黄芪蛰虫合剂体外抗乙型肝炎病毒的作用观察

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1、通告和公告的区别公告与通告的区别《国家行政公文处理办法》明茹，程延安，张正国，王宝峰，张欣，宋平【关键词】黄芪蛰虫合剂；细胞；肝炎病毒，乙型【Abstract】AIM：ToevaluatetheinhibitiveeffectsofAstragalusandThoroughfaredecoctionagainsthepatitisBvirusinvitro.METHODS：cells,astargetcells,wereexposedtodifferentconcentrationsofInterferona(IFNa)orAstra.galusa.ndTho

2、roughfaredecoctionrespectively.RealtimePCRwasappliedtoquantifyextracellularHBVDNAandenzymelinkedimmunosorbentassay(ELISA)wasusedtoassessHBsAgandHBeAg.RESULTS：The50%inhibitoryconcentration(IC50)ofAstragalusandThoroughfaredecoctionagainstHBsAg,HBeAg,andextracellularHBVDNAwas,andg/Lres

3、pectively,andtreatmentindex(TI)>aIFNhadweakinhibitoryeffectsagainstHBV.CONCLUSION：AstragalusandThoroughfaredecoctioncaninhibitHBVreplicationinvitrotosomeextent.LKeywords】AstragalusandThoroughfaredecoction；cell；HepatitisBVirus【摘要】目的：观察黄芪蛰虫合剂体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用.方法：以细胞为靶细胞，分别加入不同浓度的黄芪蛰虫合

4、剂和a干扰素.采用ELISA法及荧光定量PCR法，测定药物对细胞培养上清HBsAg，HBeAg及细胞外HBVDNA的抑制作用.结果：黄芪蛰虫合剂具有一定程度的抗HBV的作用，其抑制HBsAg，HBeAg及细胞外HBVDNA的50%抑制浓度(IC50)分别为，，g/L.治疗指数〉~aIFN也有抑制HBV的作用，但抑制作用较弱.结论：黄芪蛰虫合剂具有一定的体外抗HBV作用.【关键词】黄芪蛰虫合剂；细胞；肝炎病毒，乙型我国为乙型肝感染的高发区[1].目前，尚没有理想的治疗慢性乙型肝炎的药物.我国有数千年应用中草药治疗疾病的传统和经验，从中已发现了不少抗乙型肝炎病毒的

5、有效单方和复方制剂.黄芪蛰虫合剂是基于理论研究和临床观察将黄芪、蛰虫、党参、白术、炙甘草及枸杞这六味中药按君、臣、佐、使进行配伍而自制的复方合剂.在临床初步试用中发现其具有恢复肝功能、提高机体免疫力、抗肝纤维化和抑制病毒复制的作用.动物实验表明，黄芪蛰虫合剂对肝纤维化有良好的抑制作用[2].我们采用含HBV基因转染的细胞株为靶细胞，观察不同浓度黄芪蛰虫合剂体外对HBV的抑制作用.1材料和方法材料黄芪蛰虫合剂为自行煎煮，水浴蒸发浓缩至生药浓度为lOOOg/L.尼龙网过滤后经2000r/min离心，过滤除菌后备用.实验时用培养液稀释，分别配制成10,5，，，g/L

6、共5个浓度梯度.aIFN由深圳市海王生物工程有限公司提供，实验时分别用培养液稀释成5X105,X105,X105IU/L.噻唑蓝；二甲基亚砜；HBsAg和HBeAg的ELESA检测试剂盒，DG5031型酶联免疫检测仪；HBVDNA提取及扩增荧光检测试剂盒，PE7700型自动荧光PCR检测仪；细胞由第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心张岩博士惠赠；DMEM、胰蛋白酶、L谷氨酰胺（Gibco公司）；月台牛血清;G418（Sigma公司）；青、链霉素.方法细胞培养［3］用含200mL/L胎牛血清、400mg/LG418,X105U/L青、链霉素及g/LL谷氨酰胺的

7、DMEM培养液培养细胞，56g/L碳酸氢钠调pH值到用g/L胰蛋白酶消化传代.取对数生长期状态良好的细胞，调整细胞数为1X107/L，接种于96孔板，每孔mL，于37°C，50mL/LC02培养箱培养48h，待细胞贴壁后进行试验.两种药物按配制不同浓度分组，每一浓度设3个复孔，同时设仅加细胞培养液的空白对照.每3日换同样浓度含药培养液及对照培养液1次.各孔用药第3,6,9日将吸去的上清液置于-20°C冰箱保存待检.药物对细胞毒性试验采用MTT法.于加药第9日吸去上清液，每孔加5g/LMTT20uL,37°C培养4h，弃上清液后每孔加入150nLDMSO,震荡l

8、Omin，测A490nm值.计算细胞存