eb病毒相关胃癌组织中nf-κb及bcl-2蛋白表达的研究

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1、EB病毒相关胃癌组织中NF-kB及bcl-2蛋白表达的研宄文亦磊叶星江(丙中医药大学第一附属医院病理科530023)【摘要】目的探讨NF-κB及bcl-2蛋白在EB病毒相关性胃癌(EBVaGC)与非EB病毒相关性胃癌(EBVnGC)中的表达及意义。方法应用原位杂交技术(ISH)检测84例胃癌组织中EB病毒小RNA(EBER)表达情况；应用免疫组织化学方法(S-P法)检测84例胃癌组织中NF-κB及bcl-2蛋白表达情况。结果⑴9例(10.7%)胃癌组织EBER原位杂交阳性，属于EBVaGC;75例(89.3%)胃癌组织EBER原位杂

2、交阴性，属于EBVnGC。(2)9例EBVaGC中7例(77.8%)NF-κB表达阳性，75例EBVnGC中28例(37.3%)NF-κB表达阳性，NF-κB的表达在EBVaGC及EBVnG间存在差异(P<0.05);(3)9例EBVaGC中6例(66.7%)bcl-2表达阳性，75例EBVnGC中38例(50.7%)bcl-2表达阳性，bcl-2的表达在EBVaGC及EBVnG间无明显差异(P>0.05｝。结论EBVaGC中NF-κB蛋白的高表达，提示EB病毒可能通过影响细胞转录调控而参与了EBVaG

3、C发生、发展的过程。【关键词】EB病毒相关性胃癌；非EB病毒相关性胃癌；NF-κB;bcl-2基金项目：广丙壮族自治区卫生厅自筹经费科研课题(合同号：Z20U113)EB病毒(EBV)属于DNA疱疹病毒，该病毒编码大于85个基因组，大部分人群都感染过EB病毒，而且EB病毒与很多淋巴源性及上皮源性肿瘤密切相关。有研究表明，约有10%的胃癌与EB病毒感染有关［1］，故这类胃癌乂被称为EB病毒相关性胃癌(EBVaGC)。NF-κB作为重要的转录调控因子，起着核心枢纽作用，它可以调控很多基因表达，而这些基因乂与细胞增殖、分化、凋亡、免疫反应

4、、转化有着密切的联系；bcl-2能抑制细胞凋亡，延长细胞生存期，进而引发肿瘤。胃癌的发生、发展是一个多步骤、多因素影响的过程，涉及的机制非常复杂，本文通过原位杂交方法检测胃癌中EBER表达情况及免疫组化方法检测NF-κB和bcl-2的表达情况，探讨它们与胃癌临床病理特征的关系及意义。1材料与方法1.1一般资料选择广西中医药大学第•一附属医院2008年1月〜2013年6月手术切除并经病理检测证实为胃癌的蜡块标本84例，所冇病例术前均未进行放疗、化疗，病理类型均为腺癌。其中男性48例，女性36例；年龄32〜87岁，平均年龄56岁。1.2EBER原位

5、杂交EBER原位杂交试剂购于PanPath公司。组织蜡块切成4um粘附于防脱片上，常规脱蜡及水化，蛋白酶K消化。滴加适量杂交液，55°C下孵育1.5小吋，转移至37°C下孵育12小吋，PBS浸泡洗涤，滴加适量一抗，于37°C下孵育30分钟，拭去组织周围的液体，滴加适量二抗，于室温下孵育20分钟。拭去组织周围的液体，滴加适量HRP聚合物，室温下孵育30分钟，PBS浸泡洗涤后滴加适量DAB显色液，在室温下孵育约3-10分钟，同吋在镜下观察显色程度。1.3免疫组织化学法NF-κB及bcl-2单克隆抗体均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。5μm厚

6、切片。常规脱蜡水化后，柠檬酸高压修复，3%H2O2阻断内源性过氧化物酶，其余步骤按试剂盒说明进行操作。用PBS替代一抗作为阴性对照，用已知阳性片作为阳性对照。1.4结果判读EBER原位杂交结果判定：EBER阳性表达于细胞核，呈棕黄色。免疫组化采用Volm使用的半定量法[2]:NF-κB阳性表达部位为胞质和（或）胞核，bcl-2阳性表达部位为胞质和（或）胞膜。1.5统计学分析应用SPSS15.0软件进行统计学分析，P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1EBER在胃癌组织中的表达84例胃癌组织中9例（10.7%）胃癌组织EBER原位杂交阳性，

7、属于EBVaGC（见图1）;75例（89.3%）胃癌组织EBER原位杂交阴性，属于EBVnGCo2.2NF-κB在胃癌组织中的表达9例EBVaGC中7例（77.8%）NF-κB表达阳性（见图2）,75例EBVnGC中28例（37.3%）NF-κB表达阳性，NF-κB的表达在EBVaGC及EBVnG间存在差异（P<0.05｝（详见表1｝。2.3bcl-2在胃癌组织中的表达9例EBVaGC中6例（66.7%）bcl-2表达阳性（见图3）,75例EBVnGC中38例（50.7%）bcl-2表达阳性，bcl-2的表达

8、在EBVaGC及EBVnG间无明显差异（P〉0.05）（详见表1）