孕妇血中胎儿dna荧光定量pcr检测及与临产关系

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1、孕妇血中胎儿DNA荧光定量PCR检测及与临产关系【关键词】孕妇；胎儿;DNA;聚合酶链反应　　［ABSTRACT］ObjectiveTostudythechangesofcontentoffetalDNAinmaternalplasmainlatepregnancyandinlabor,andexploretheirsignificance.MethodsThecontentoffetalDNAinmaternalplasmain28-42equantitativePCRtechnique.ResultsThe

2、differencesofmeancontentoffetalDNAinmaternalplasmaamong28-31aternalbloodincreases,ostlikely,oneoftheinducementsleadingtodelivery.［KEYasterMixture(ABI公司)10μL，荧光探针与引物1μL。采用ABI公司的PE7500实时荧光定量PCR仪。PCR反应条件为：50℃1min,95℃10min后，95℃30s，60℃30s，40个循环。为增加数据的可信度，每份标本为3管

3、检测，结果取平均值。　　2结果通过稀释法，定量地检测男性Y染色体的DYS14基因，所有怀男胎的孕妇均检测到阳性结果，但作为对照的女性外周血细胞DNA始终为阴性。孕28～31周组、孕32～35周组、孕36～42周组、临产组孕妇血浆中DNA的含量拷贝数分别为（230±69）、（480±55）、（800±70）、（1100±77）/mL。各组间孕妇外周血中胎儿DNA的含量比较,差异有显著意义(F=308.19,q=11.59～40.33，P<0.01)。　　3讨论随着分子生物学技术的发展，LO等[1]用定量PC

4、R技术对体外受精孕妇的血浆连续性检测显示，最早在孕7周即可从母血浆中测到胎儿DNA存在,并对不同孕周的孕妇血浆进行SRY基因检测，结果显示，胎儿DNA的含量随孕周增加而增加。CHAN等[2]对26例孕晚期(35～42周)孕妇血循环中胎儿DNA分析显示，在妊娠晚期胎儿DNA量迅速增加，平均每周增加29.3％，且DNA的含量与孕周之间有显著相关性。本研究对40例处于不同妊娠期的孕妇外周血的胎儿DNA的检测结果说明，随着妊娠时间的增加，胎儿DNA的含量增加,与CHAN等[2]的研究结果相同。目前，母血中胎儿DNA确切

5、尚不清楚。对胎儿DNA的推测包括于母血循环中受母体免疫系统破坏的胎儿细胞，胎儿发育过程中凋亡的细胞，或是凋亡的滋养细胞[3,4]。在分娩前几周的母血中胎儿DNA水平迅速升高，与此同时伴随胎盘老化滋养细胞凋亡增加并释放大量DNA。也有学者观察到在母血循环中的很多胎儿有核红细胞以凋亡形式存在，最终释放DNA分子片段，因此推断这些存在于母血循环中的造血细胞和滋养细胞的凋亡是母血中胎儿DNA之一。还有研究认为，胎儿DNA在母血浆中不断被代谢清除，同时母血浆中总DNA含量随妊娠时间增加而升高[5]。而这种释放到母血中的胎

6、儿DNA是否仍有活性尚不清楚[6]。本研究结果显示，随着孕周的增加，母血中的胎儿DNA的含量也升高，临产后母血中胎儿DNA的含量在整个妊娠过程中达到最高，说明胎儿DNA含量升高可能是诱发临产的机制之一。一般认为，妊娠晚期随着胎儿的成熟，宫腔内容积增大，宫腔压力增加，子宫动静脉中的血流量加大，母体与胎儿之间的血液交换也随着胎盘的长度、厚度及表面积的增加而增加,从而导致胎儿的有形成分逐渐增多并运输到母体血循环中。同时胎盘老化，滋养细胞凋亡增加，母体和胎儿之间的屏障完整性遭到破坏，也会导致更多的胎儿成分释放到母血中。

7、在对一些病理性妊娠疾病的研究中显示，如羊水过多则母体血浆中胎儿DNA的含量升高，而其发病的胎盘因素考虑是胎盘血管丰富，渗透面积大导致的[7,8]。另一方面，现代医学认为妊娠是一种自然同种异体移植现象,胚胎带有父亲抗原，与母亲为同种半抗原的免疫关系，如同种异体移植，胎儿在妊娠期内不受母体免疫排斥,与胎盘组织的免疫屏障、胎膜细胞抑制细胞对胎儿组织的杀伤、母体免疫抑制细胞及免疫抑制物的作用有关。随着妊娠期的进展，这种免疫平衡失调，胎儿与母体之间的滋养层细胞受到母体免疫性损伤，远端毛细血管坏死、破裂出血，引发胎盘剥离，

8、从而导致临产的发生。而这种胎盘滋养细胞凋亡增加引起了更多的胎儿成分释放入母血中[9]。如在妊娠期高血压综合征、母儿RH血型不合的研究中，都发现了母血浆中胎儿DNA含量升高，这两种疾病的诱因都有母体和胎儿之间的免疫屏障破坏等方面的因素。本研究结果也表明，胎儿DNA在临产时达到最高，分析认为这种胎儿DNA水平的升高，最终破坏母胎间的免疫平衡，导致临产及分娩的发生，从分子水平进一步丰富了分娩