il—17与il—4基因遗传多态性与儿童哮喘易感性及

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1、IL—17与IL—4基因遗传多态性与儿童哮喘易感性及目的探讨白细胞介素-17（L-17）与白细胞介素-4（IL-4）基因遗传多态性与儿童哮喘易感性及外周血IL-17、IL-4和IgE的关系。方法通过采用PCR-RFLP技术检测分析60例哮喘儿童（哮喘组）和72例体检正常儿童（对照组）的IL-17以及IL-4基因的多态性，以及采用免疫组化ELISA方法检测血清中IL-17、IL-4以及总IgE的含量，对两组患儿的检测数据进行统计比较。结果在单个基因位点多态性分析时，发现两组儿童的IL-17基因rs763780（TT，TC，cc）位点以及IL-4基因-3

2、3C/T位点的基因型和等位基因频率分布，差异有统计学意义（P0.05）；哮喘组患儿血清中IL-17含量为（3576.00271.38）ng/L，IL-4含量为（4923.00328.70）ng/L，总IgE含量为（159.3219.49）g/mL，对照组IL-17含量为（1045.3173.35）ng/L；IL-4含量为（897.6251.39）ng/L；总IgE含量为（42.167.45）g/mL，哮喘组3组数据均明显高于对照组，差异有统计学意义（P0.05）。结论IL-4基因-33C/T基因型可能是儿童容易发生哮喘的基因型，而且IL-17F基因的

3、突变可能在哮喘的发生发展中也起着重要的作用，-33位点多态性与IL-4表达水平相关。【关键词】白细胞介素-4；白细胞介素-17；基因多态性；哮喘支气管哮喘是由多种细胞和细胞组分参与的，一种以黏膜高分泌和血清高IgE为特征的气道慢性疾病[1]，是儿童期最常见的慢性呼吸道疾病，严重影响儿童健康[2]。其发病机制迄今尚未完全阐明，大部分学者以Th1/Th2反应失衡的免疫学发病机制为主。Th0细胞在正常机体中往往会按特殊比例分化为Th1和Th2细胞，然而在哮喘患者体内Th1类细胞的分泌会减少，而Th2细胞分泌增多，从而诱导气道高反应及炎症的发生。IL-4主要

4、由活化T细胞产生，有许多多态性靶点，其中IL-4基因启动子区-33bp处为常见的多态性位点，与哮喘的易感性和严重程度有一定的相关性。IL-17是主要由T淋巴细胞等分泌的前炎性细胞因子，它参与了机体多种炎症性疾病的发生、发展，并且能够积极促进多种炎性因子的释放，尤其与肺部感染、哮喘等疾病的发生有着密切的关系。本文选择IL-4和IL-17的两个多态性位点进行分析，研究基因的多态性与哮喘的易感性之间的关系，以及对IgE水平的影响，以解释哮喘的发病机理。现报告如下。1资料与方法1.1一般资料选取2013年2月～2014年10月湛江中心人民医院和广东医学院附属

5、医院收治的60例哮喘患儿作为哮喘组，年龄3～10岁，其中男34例，女26例，选择同期72例体检正常的儿童作为对照组，年龄4～12岁，其中男41例，女31例，排除有哮喘病史、典型过敏性病史患者。两组儿童在性别构成、年龄分布等一般资料方面组间比较，差异无统计学意义（P0.05），具有可比性。见表1。1.2方法1.2.1DNA样品提取采用EDTA抗凝管采集两组儿童的外周静脉血2ml，并按说明书使用DNA提取试剂盒提取基因组DNA，通过电泳检测其是否完整，并采用紫外分光光度仪检测其浓度以及纯度后，置于-70℃保存备用。剩余全血离心分离血浆后分装冷冻，用于检测

6、外周血IL-4、IL-17和IgE含量。1.2.1IL-4与IL-17基因型分析IL-4基因型引物序列为IL-4基因启动子区-33位点引物Ⅰ：5-TGAAGATATCTTTGTCAGCATT-3，引物Ⅱ：5-AGACCCATTAATAGGTGTCG-3。IL-17基因型引物序列为IL-17/rs763780位点引物Ⅰ：5-CATTTCTACAGCTTCTTCAGCTG-3，引物Ⅱ：5-AGAAGGTGCTGGTGACTGTT-3。并行PCR扩增，取PCR产物5l，加限制性内切酶，37℃消化8h，对PCR产物和酶切产物的检测应用凝胶电泳的方法，进而参照

7、DNAmarker确定其基因型。1.2.3外周血IL-4、IL-17和总IgE水平检测采用ELISA技术测定外周血IL-4、IL-17和总IgE含量。1.3统计学方法用SPSS18.0统计学软件处理数据。计量资料以均数标准差（x-s）表示，实施t检验；计数资料以率（%）表示，实施2检验。P0.05表示差异有统计学意义。2结果2.1IL-4与IL-17基因内切酶PFLP与哮喘的关系IL-17基因rs763780位点以及IL-4基因-33C/T位点的基因型分布在哮喘组和对照组内分布，差异具有统计学意义（P0.05）。见表2。2.2两组外周血IL-17、I

8、L-4和IgE水平的比较外周血IL-17、IL-4和IgE水平3组数据中哮喘组均明显高于对照组，差异有统计学