氯化钴对人胃癌细胞sgc7901增殖的体外抑制作用及其可能的机制

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1、氯化钴对人胃癌细胞SGC7901增殖的体外抑制作用及其可能的机制郭苏文(包头医学院第一附属医院保健屮心014000}【屮图分类号】R735.2【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2012)46-0235-02【摘要】R的探讨氯化钴对人胃癌细胞SGC7901的体外抑制作用及其可能机制。方法将培养的人胃癌细胞SGC7901给予不同浓度氯化钴处理，以噻唑蓝(MTT)比色法检测人胃癌细胞SGC7901增殖及堉殖抑制情况。用Western-blot方法检测氯化钴对人胃癌SGC7901细胞p-ERKl/2蛋0表达水平的影响。结果浓度低于50.0μmolL-l对细胞增殖无影响(p〉

2、0.05,VScontrol)；而浓度高于100μmolL-l氯化钴抑制其增殖(p<0.01,VScontrol)；高于100μmolL-l氯化钴引起p-ERKl/2蛋0表达水平降低。结论一定浓度氯化钴对人胃癌细胞SGC7901增殖有明显抑制作用，氯化钴的抗肿瘤机制可能与p-ERKl/2蛋白表达水平降低有关。【关键词】氯化钴人胃癌细胞SGC7901抑制p-ERKl/2钴是正常人体所必须的微量元素，它是维生素B12极其重要的组成成分。钴被广泛用于诱导细胞化学缺氧损伤，常用化合物是氯化钴［1-2］。有研究表明，氯化钴处理Hela和A549细胞24小时，可引起这两种细胞不同

3、程度的凋亡［3］。化疗是治疗肿瘤的常用手段，本研究在体外实验屮观察氯化钴对人胃癌细胞SGC7901的作用，研究氯化钴是否对人胃癌细胞SGC7901的增殖具有抑制作用，为氯化钴进一步发展成一种新型的抗肿瘤药物提供理论依据。1材料和方法1.1材料1.1.1细胞株人H癌细胞SGC7901,购于屮国科学院上海生科院细胞资源屮心。在37°C、饱和湿度及5%CO2条件下，用培养瓶在含10%胎牛血清、l×105u•L-l青链霉素的RPMI1640培养液中传代培养。1.1.2主要试剂RPMI1640培养基（Gibico公司），胎牛血清（杭州四季青生物材料冇限公司），胰蛋白酶（上海

4、华美生物工程公司），台盼兰（上海华美生物工程公司）。二甲基亚砜（Amersco）,MTT（Amersco）,十二院基硫酸钠、两焼酰胺等化学试剂购自Sigma公司。BCA蛋白分析试剂盒购自PIERCE公司。抗actin兔多克隆抗体、抗p-ERKl/2兔多克隆抗体、辣根酶标记的山羊抗兔IgG均购自SantaCruze公司。ECL反应试剂盒购自PIERCE公司。艽他试剂为分析纯。1.1.3主要仪器二氧化碳培养箱（ThermoformaofTHEU.S.A）,倒置相差显微镜（XDB-1B，国产），超浄工作台（SW-CJ-2F,上海博迅），自动双重纯水蒸馏器（SZ-98,上海本波仪器有限公司），

5、手提式压力蒸汽消毒器（YXQ02型，山东），电热恒温鼓风干燥箱（Gzx-dh.500-bs,上海），电子天平（FA1004，上海恒平科学仪器公司），全自动酶标仪（ELX-800ofTHEU.S.A）。1.2方法1.2.1细胞培养：人胃癌细胞SGC7901在37°C、饱和湿度及5%CO2条件下，用培养瓶在含10%胎牛血清，l×105u•L-l青链霉素的RPMI1640培养液中传代培养。1.2.2细胞增殖试验：采用噻唑蓝（MTT）比色法测定人胃癌细胞SGC7901的增殖情况。将单层人胃癌细胞SGC7901消化，倾去消化液后用含10%胎牛血清的RPMI1640配制成5&

6、times;104个细胞/mL的悬液，在96孔细胞培养板中每孔接种0.2mL。在5%CO2、饱和湿度条件下、37"C培养24h后吸弃培养液，分别加入含终浓度为10.0、50.0、100.0、200.0、400.0、800.0μmolL-l氯化钴的RPMI1640培养液，各浓度组均重复6孔。在上述培养条件下分别培养24小吋后，加入MTT试剂，测定490nm的吸光率（MTT测定值）。实验中同吋设置不含氯化钴的对照组，其重复孔数、温度和湿度条件、吋间等均与试验组相同。1.2.3免疫蛋白印迹实验(WesternBlot)将人胃癌细胞SGC7901悬液接种于六孔培养皿中，培养至贴壁面积达8

7、0%-90%吋弃去培养液，换上无血清培养基培养12小时，按实验分组分别加入不同浓度的氯化钴，分别为10μmol•L-l、50.0μmol•L-l、100.0μmol•L-l、200.0μmol•L-l、400.0μmol•L-l、800.0μmol•L-l,对照组不加药物。作用24h后，用RIPA+PMSF细胞裂解液在冰上裂解细胞，低温离心15分钟提