大孔吸附树脂纯化贯叶连翘总黄酮工艺研究.doc

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1、ectiveToobtaintheorseparatingtheflavctofHypericumperfogappropriatemacropins..MethodsSeparaurtypesofmacroporoaluatedbymeasuringandelutingratiooffheAB8macroporousaetterseparatingeff,feasibleandsuitab大孔吸附树脂纯化贯叶连翘总黄酮工艺研究【摘要】目的研究大孔吸附树脂分离和纯化贯叶连翘总黄酮的工艺条件。方法以总黄酮的吸附量和解吸率为考察指标，对4种不同类型的树脂进行评价

2、。结果AB8型大孔吸附树脂对贯叶连翘中总黄酮具有较好的分离能力。结论采用本法分离纯化贯叶连翘总黄酮简单可行。【关键词】贯叶连翘；总黄酮；大孔吸附树脂；纯化【Abstract】ObjptimalconditionsfoonoidsfromtheextraractumL.byselectinorousabsorptionrestingefficiencyoffousabsorptionwereevtheabsorptionratiolavonoids.ResultsTbsorptionresinhadbiciency.ConclusionThismethodis

3、simpleleforindustryproduction.[Keywords]HypericumperforactumL.；flavonoids；macroporousabsorptionresin；purification贯叶连翘属金丝桃属藤黄科多年生草本植物，全草可入药。这种野生植物的全草或带根全草有药用价值。贯叶连翘具有清热解毒、收敛止血、利湿等功效，主要用于止血、抗炎、治疗妇科病等。目前，用贯叶连翘提取物制成的制剂已在欧美大量上市，用于治疗抑郁症、甲型和乙型肝炎及艾滋病等。此外，还有文献报道其有抗肿瘤活性。贯叶连翘含有多种具有生物活性的化学成分，不

4、同成分具有不同的药用价值，成分相互之间发挥协同作用从而用于不同疾病的治疗。因此，分离纯化贯叶连翘总黄酮具有重要意义。大孔树脂物理化学稳定性高、比表面积大、吸附容量大、选择性好、吸附速度快、解吸条件温和、再生处理方便、使用周期长，现已广泛应用于天然产物的分离和富集。但大孔吸附树脂型号很多，性能用途各异，因此本文特选了四种不同型号的大孔树脂，从中筛选出分离纯化效果最好的树脂种类。1试药贯叶连翘；AB8、D101、NKA、D4020大孔吸附树脂，其余试剂均为分析纯。2方法与结果总黄酮含量的测定最大吸收波长的选择精密量取标准品溶液各lml分别置25ml容量瓶中，其余

5、操作均同标准曲线制备，在紫外可见光分光光度计下400〜700nm处扫描，标准品最大吸收波长nm，样品液最大吸收波长为nm，综合上述实验拟定510nm为检测波长。标准曲线的绘制精密量取在120°C干燥至恒重的芦丁标准品mg置25ml量瓶中，加一定浓度的甲醇适量，超声30min使溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，准确吸取20m1置于25ml容量瓶中，加水至刻度，即得mg/ml的标准品溶液。精密量取上述芦丁标准品溶液0ml、1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml分别于7支50ml容量瓶中，编号，各加水至6ml,加入lml5%亚硝酸钠溶液，摇匀，静置6mi

6、n，加入lml10%Al(N03)3溶液，摇匀，放置6min，后加入%的似011溶液10ml,再加水至刻度，摇匀，放置15min,以0号容量瓶为空白试剂，照紫外可见分光光度法，在波长510nm处测定吸光度。表1各样品液吸光度表以吸光度A和浓度C进行回归，得线性回归方程为：C=0A+2,r=83,线性范围mg/ml〜mg/ml.样品溶液的制备药材的取样：因为贯叶连翘是全草入药，且在各个部位的总黄酮1的含量不一致，为使取样均一性且保证其全草入药，故将其分为枝和叶两部分分别粉碎干燥，混匀后称取，以消除取样带来的误差。贯叶连翘中黄酮的提取：选用4种方法提取贯叶连翘中

7、的黄酮，分别是：乙醇回流提取法、碱液提取法、超声提取法、渗漉法。由实验结果得碱提效果最佳，后进行碱提提取条件的考察，包括碱水量、提取次数、碱水浓度、提取时间，从而确定最佳提取工艺，得到黄酮的提取液。静态吸附实验树脂预处理树脂先用乙醇充分溶胀，然后用乙醇洗至流出液加适量水无白色浑浊现象，再用去离子水洗尽乙醇至无味即可。树脂的筛选吸附率的测定：精密称取处理好的树脂2g,分别置120ml磨口三角瓶中，将样品液过滤，分别精密加样品液50ml，静置24h，充分吸附后，取上层液，过滤，先吸取滤液，测得吸光度为，因吸光度在〜之间稳定性较好，故初选设定各吸取lml，测得吸光

8、度。表2各树脂吸光度表吸附率s=/Po.式中：Po为