大孔吸附树脂纯化贯叶连翘总黄酮工艺探究

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1、大孔吸附树脂纯化贯叶连翘总黄酮工艺探【摘要】目的研究大孔吸附树脂分离和纯化贯叶连翘总黄酮的工艺条件。方法以总黄酮的吸附量和解吸率为考察指标，对4种不同类型的树脂进行评价。结果AB8型大孔吸附树脂对贯叶连翘中总黄酮具有较好的分离能力。结论采用本法分离纯化贯叶连翘总黄酮简单可行。【关键词】贯叶连翘；总黄酮；大孔吸附树脂；纯化【Abstract】ObjectiveToobtaintheoptimalconditionsforseparatingtheflavonoidsfromtheextractofHypericumperforactumLbyselectingappropri

2、atemacroporousabsorptionresins.・MethodsSeparatingefficiencyoffourtypesofmacroporousabsorptionwereevaluatedbymeasuringtheabsorptionratioandelutingratioofflavonoids・ResuItsTheAB8macroporousabsorptionresinhadbetterseparatingefficiency・ConclusionThismethodissimple,feasibleandsuitableforindustr

3、yproduction.[Keywords]HypericumperforactumL；flavonoids；macroporousabsorptionresin；purification贯叶连翘(Hypericumperforatum)属金丝桃属藤黄科多年生草本植物，全草可入药。这种野生植物的全草或带根全草有药用价值。贯叶连翘具有清热解毒、收敛止血、利湿等功效，主要用于止血、抗炎、治疗妇科病等。目前，用贯叶连翘提取物制成的制剂已在欧美大量上市，用于治疗抑郁症、甲型和乙型肝炎及艾滋病等。此外，还有文献报道其有抗肿瘤活性。贯叶连翘含有多种具有生物活性的化学成分，不同成分具有不

4、同的药用价值，成分相互之间发挥协同作用从而用于不同疾病的治疗。因此，分离纯化贯叶连翘总黄酮具有重要意义。大孔树脂物理化学稳定性高、比表面积大、吸附容量大、选择性好、吸附速度快、解吸条件温和、再生处理方便、使用周期长，现已广泛应用于天然产物的分离和富集。但大孔吸附树脂型号很多，性能用途各异，因此本文特选了四种不同型号的大孔树脂，从中筛选出分离纯化效果最好的树脂种类。1试药贯叶连翘(购于五块石中药材市场)；AB8、D101、NKA、D4020大孔吸附树脂，其余试剂均为分析纯。2方法与结果2.1总黄酮含量的测定2.1.1最大吸收波长的选择精密量取标准品溶液各1ml分别置25ml容

5、量瓶中，其余操作均同标准曲线制备，在紫外可见光分光光度计下400〜700nm处扫描，标准品最大吸收波长511.3nm,样品液最大吸收波长为510.5nm,综合上述实验拟定510nm为检测波长。2.1.2标准曲线的绘制精密量取在12CTC干燥至恒重的芦丁标准品12.5mg置25ml量瓶中，加一定浓度的甲醇适量，超声30min使溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀,准确吸取20ml置于25ml容量瓶中，加水至刻度，即得0.4mg/ml的标准品溶液。精密量取上述芦丁标准品溶液0ml.1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml分别于7支50ml容量瓶中，编号，各加水至6ml,加入

6、lml5%亚硝酸钠溶液，摇匀，静置6min,加入1ml10%Al（N03）3溶液，摇匀，放置6min,后加入4.3%的NaOH溶液10ml,再加水至刻度，摇匀，放置15min,以0号容量瓶为空白试剂，照紫外可见分光光度法（《中国药典》2005年版一部附录VA）,在波长510nm处测定吸光度（结果见表1）。表1各样品液吸光度表以吸光度A和浓度C进行回归，得线性回归方程为:C=0.0930A+0.0002,r=0.99983,线性范围0.008mg/ml〜0.048mg/ml.2.2样品溶液的制备药材的取样：因为贯叶连翘是全草入药，且在各个部位的总黄酮的含量不一致，为使取样均一

7、性且保证其全草入药，故将其分为枝和叶两部分分别粉碎干燥，混匀后称取，以消除取样带来的误差。贯叶连翘中黄酮的提取：选用4种方法提取贯叶连翘中的黄酮，分别是：乙醇回流提取法、碱液提取法、超声提取法、渗漉法。由实验结果得碱提效果最佳，后进行碱提提取条件的考察，包括碱水量、提取次数、碱水浓度、提取时间，从而确定最佳提取工艺，得到黄酮的提取液。2.3静态吸附实验2.3.1树脂预处理树脂先用乙醇充分溶胀，然后用乙醇洗至流出液加适量水无白色浑浊现象，再用去离子水洗尽乙醇至无味即可。2.3.2树脂的筛选吸附率的测定：精密称取处理好