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XRCC2基因多态性与非小细胞肺癌易感性的关系王瑞，曾辉，李琰，王娜，张健慧，张金文，王伟，刘俊峰【关键词】非小细胞肺癌；XRCC,2基因；易感性；遗传多态性 AssociationbetorphismofXRCC2andsusceptibilityofnonsmallcelllungcancers 1DepartmentofThoracicSurgery,FourthAffiliatedHospital,HebeiMedicalUniversity,2LaboratoryofMolecularBiology,HebeiCancerInstitute,Shijiazhuang050011,China,3NationalCenterforAIDSControlandPrevention,ChineseCenterforDiseaseControlandPrevention,Beijing100050,China,4OperationRoom,ThoracicHospitalofHebeiProvince,Shijiazhuang050011,China,5DepartmentofSurgery,ChenganCountyHospitalofHebeiProvince,Handan056700,China 【Abstract】AIM:ToobservetheassociationbetallcelllungcancersandpolymorphismandgenefrequencyofXRCC2C41657TandG4234Cinnorth ChineseHanpopulation.METHODS:Thesinglenucleotidepolymorphisms(SNPs)oftheC41657TandG4234CintheXRCC2geneallcelllungcancerpatientsand300healthycontrols.RESULTS:ThereorphisminnorthChineseHanpopulation.ThegenotypeandallelotypedistributionsoftheXRCC2C41657TandG4234CSNPsinthenonsmallcelllungcancerpatientsthoseofthecontrols(allP>0.05).gCl21.5mmol/L(C41657T)或1.25mmol/L(G4234C)，TaqDNA聚合酶2U，dNTPs160μmmol/L和上、下游引物各200nmol/L.PCR反应条件为：94℃5min预变性后，94℃变性45s,72℃(C41657T)或70.1℃(G4234C)退火45s,72℃延伸1min，35个循环后，72℃继续延伸7min.XRCC2C41657TPCR产物经限制性内切酶MvaⅠ166.7nkat于37℃酶切16h后进行40g/L脂糖凝胶电泳.C/C基因型为315bp,42bp和59bp3个DNA片段，T/T基因型为357bp和59bp两个DNA片段，C/T基因型为315bp,357bp,42bp和59bp4个DNA片段(图1).XRCC2G4234CPCR产物经限制性内切酶MluⅠ166.7nkat于37℃酶切20h后，进行40g/L琼脂糖凝胶电泳.G/G基因型为251bp一个DNA片段，G/C基因型为251bp,230bp和21bp3个DNA 片段，C/C基因型为21bp和230bp两个DNA片段(图2).为进行基因型检测的质量控制，每一批PCR反应均以灭菌蒸馏水替代模板DNA作为阴性对照，实验样本随机抽取10%进行重复实验. 图1PCRMvaⅠ酶切的XRCC2C41657TSNP基因分型 略 图2PCRMluⅠ酶切的XRCC2G4234CSNP基因分型 略 统计学分析：采用χ2检验对健康对照组XRCC2C41657T，G4234C多态位点的基因型分布进行HardyWeinberg平衡分析.NSCLC组和对照组的XRCC2C41657T，G4234C基因型及等位基因分布比较采用R×C表的χ2检验进行.应用非条件Logistic回归模型计算比数比（oddsratio,OR）及其95%可信区间（confidenceinterval,CI），以P0.05为有统计学意义.统计分析采用SPSS11.5软件包进行.采用EH软件计算XRCC2基因的两个多态性位点的单体型频率分布. 2结果 2.1基本情况两组研究对象的性别和年龄构成无统计学差异（P>0.05，表1）.NSCLC组吸烟个体比例(66.8%)高于对照组(41.3%，χ2=33.5,P0.01)，表明吸烟可增加NSCLC的发病风险（经年龄、性别校正后的OR为3.62,95%CI为2.34～5.62). 表1NSCLC组和对照组人口学分布及XRCC2C41657T,G4234C多态性分布〔略〕 2.2XRCC2C41657T,G4234C多态性分布所有DNA标本均经PCRRFLP方法成功进行了基因型分析，所有重复分型结果均与原结果相符.对照组XRCC2C41657T,G4234C基因型分布符合HardyWeinberg平衡(χ2值分别为0.23和0.62，P值均>0.05).在对照组中XRCC2C41657T的3种基因型（C/C,C/T,T/T）频率分别为76.0%,22.0%,2.0%,C和T等位基因频率分别为87.0%,13.0%；在NSCLC组中3种基因型频率分别为69.5%,27.0%,3.5%,C和T等位基因频率分别为83.0%,17.0%，两组之间基因型、等位基因分布均无统计学差异(χ2值分别为3.23和3.34,P值分别为0.20和0.07).XRCC2G4234C在对照组及NSCLC组中的G/G,G/C,C/C基因型频率分别为74.0%,24.7%,1.3%及72.1%,27.0%,0.9%，G和C等位基因频率分别为86.3%,13.7%及85.6%,14.4%，两组之间基因型、等位基因分布均无统计学差异(χ2值分别为0.56和0.11,P值分别为0.76和0.74). 2.3XRCC2C41657T,G4234C多态性与肺癌病理类型的关系根据肺癌病理类型进行分层分析表明，XRCC2C41657T多态可能与腺鳞癌的发病风险相关，与C/C基因型相比，携带T等位基因的基因型(C/T +T/T)可增加腺鳞癌的发病风险（经年龄、吸烟校正后的OR为2.45,95%CI=1.05～5.72）；但未发现XRCC2G4234C多态与NSCLC的病理类型存在相关性. 2.4XRCC2C41657T,G4234C多态性与吸烟联合作用对NSCLC的影响根据个体吸烟情况进行分层分析表明，XRCC2C41657T多态性可能与不吸烟人群的NSCLC发病风险相关，与C/C基因型相比，C/T基因型和携带T等位基因的基因型(C/T+T/T)可增加不吸烟人群患NSCLC的风险（经年龄校正后的OR为2.12和1.85，95%CI为1.57~3.90和1.02~3.36）；但在XRCC2G4234C多态位点未见二者相关（表2,3）. 表2XRCC2C41657T基因多态性与NSCLC发病风险的相关性分析〔略〕 表3XRCC2G4234C基因多态性与NSCLC发病风险的相关性分析〔略〕 2.5单体型分析采用EH软件对这两个多态性位点进行了单体型分析.结果显示对照组41657C/4234G单体型最常见（75.2%），其次为41657C/4234C（11.8%）,41657T/4234G（11.2%）及41657T/4234C（1.8%），NSCLC组的单体型频率与对照组相比无统计学差异（χ2=3.46,P=0.33，表4）. 表4XRCC2C41657T, G4234C基因多态性单体型频率与NSCLC发病风险〔略〕 3讨论 DNA双链断裂(DNAdoublestrandbreaks,DSB)是一种严重的DNA损伤，如果DSB不能被及时而准确地修复，可能导致基因突变、基因组不稳定、细胞凋亡甚至癌变〔3〕.为了对抗这种损伤，细胞形成了两条独立而又互补的DSB重组修复途径即同源重组修复（homologyrebination,HR）和非同源末端连接（nonhomologyendjoining,NHEJ）〔4〕.XRCC2与RAD51B,RAD51C,RAD51D结合形成的复合物具有单链DNA结合活性，与单链DNA和双链DNA连接；还可以识别DNA损伤部位,促进蛋白在同源重组位置聚集，形成对反应的核蛋白丝Rad51foci,在HR的早期阶段发挥重要作用〔5-6〕.Griffin等〔7〕等发现XRCC2基因的表达缺失可导致染色体异常分离率大大增加，说明由于DNA损伤修复基因的缺失，DNA损伤得不到有效修复从而使基因的不稳定性显著增加，也说明XRCC2是潜在的抑癌基因.XRCC2基因的一些单核苷酸多态性可能影响XRCC2基因的表达，降低DNA修复能力，从而和某些肿瘤的易感性相关〔8-9〕. 本研究结果显示：XRCC2C41657T的C/C,C/T,T/T基因型在中国北方人群分布频率与Kuschel等 〔1〕等对欧洲白种人的报道结果（88.6%,10.6%和0.8%）不同（χ2=30.08,P0.01）；T等位基因在中国北方人群分布频率(13.0%)高于Kuschel等〔1〕和Landi等〔10〕各自报道的欧洲白种人6%的分布频率.G4234C的G/G,G/C,C/C基因型在中国北方人群分布频率与Kuschel等〔1〕的报道结果（63.5%,32.5%和4.0%）也不相同（χ2=13.25，P=0.01）；C等位基因在中国北方人群分布频率(13.7%)低于Kuschel等〔1〕和Landi等〔10〕分别报道的20%和23%的分布频率.这表明XRCC2多态性分布存在地域、种族差异.本研究提示,XRCC2C41657T和G4234C多态性分布在NSCLC组和对照组之间没有显著性差异，C41657T和G4234C多态性可能与NSCLC的发病风险无明显相关.这与Kuschel等〔1〕和Auranen等〔11〕对乳腺癌和卵巢癌的研究结果相似.但是该基因的其他多态性位点如XRCC2R188H和XRCC23＇非翻译区的G30833A多态性，分别与乳腺癌和基底细胞癌的发病风险相关〔9-10〕.由此可见，XRCC2基因多态性和肿瘤易感性的关系可能与多态性的位点以及肿瘤的类型有关. 由于NSCLC可分为几种的不同病理类型，它们的病因、组织发生、生物学特性等都各不相同，为了进一步明确XRCC2多态性和NSCLC各病理类型之间是否相关，本研究按病理类型进行了分层分析.分层后的结果显示：XRCC 2C41657T多态只与腺鳞癌的发病风险相关.这表明XRCC2C41657T多态与NSCLC易感性的关系可能与NSCLC的病理类型有关，但是分层后的病例数相对较少有待增加病例数，做进一步研究证实.本研究又根据吸烟状况进行了分层分析，发现在不吸烟组中XRCC2C41657T多态位点的C/T基因型和携带T等位基因的基因型(C/T+T/T)可显著增加NSCLC的发病风险，而在吸烟组无此相关.这可能是因为吸烟作为NSCLC的高危因素所产生的主效应掩盖了XRCC2C41657T多态性在NSCLC发病过程中所起的作用，所以只有在不吸烟人群中才能观察到XRCC2C41657T多态位点的C/T基因型和携带T等位基因的基因型对NSCLC易感性的影响；也可能是因为进行分层分析后的样本量较小产生结果的偶然性，有进行必要进行更大样本量的研究. 本文对XRCC2C41657T,G4234C多态位点与NSCLC易感性的关系进行了初步分析,XRCC2基因41657T可能是中国北方汉族不吸烟者的易感因素，其XRCC2基因41657T携带者可能易患腺鳞癌.但目前的样本量并不足以得出最后结论，有待于进一步扩大样本量来证实本结论.而且XRCC2多态性在肿瘤的发病过程中可能有着非常复杂的作用，其中涉及XRCC2多态性和环境暴露及其他遗传因素的相互作用等，这些问题都需要进一步研究. 【
