hplc法测定红霉素明胶微球的含量

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1、HPLC法测定红霉素明胶微球的含量：伍善广杨帆潘育方黄慧李桃【摘要】目的建立红霉素明胶微球中红霉素含量的测定方法。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为DIKMAC18色谱柱(5μm,250mm×4.6mm)，流动相为0.1mol/L磷酸二氢铵（三乙胺调节至pH6.5）乙腈（体积比67∶33），流速1mL/min；检测波长210nm。结果红霉素质量浓度在0.0992～0.4960mg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系，r=0.9999；平均回收率为100.1%，RSD=0.95％(n=9)。结论本文方法可用于红霉素明胶微球的含量检测

2、。【关键词】红霉素明胶微球；高效液相色谱法；紫外分光光度法Abstract:ObjectiveToestablishanHPLCmethodfordeterminingthecontentoferythromycininthegelatinmicrospherescontainingerythromycin.MethodsDIKMAC18column(5μm,250mm×4.6mm)columnplebyusingthemobilephaseconsistingof0.1mol/Lammoniumdihydrogenphosph

3、ate(adjusttopH6.5ine)acetonitrile(67∶33).ThefloL·min-1andthedetection.ResultsThecalibrationcurveg·mL-1forerythromycin(r=0.9999).Therecoverythroughthecolumnethodissimple,rapidandaccurateforthecontentanalysisoferythromycininthegelatinmicrospheres.Keyycin；gelatinmicros

4、pheres；HPLC红霉素(erythromycin)是临床上应用广泛的抗生素，是治疗支原体肺炎、军团菌肺炎的首选药物［1］，但在体内分布广泛，有效治疗浓度维持时间短，容易诱发耐药性，且有口服吸收不规则、肝毒性等不良反应［2］。红霉素微球是以可生物降解的明胶为载体，是本实验室通过正交试验优化制备的具有合适粒径的肺靶向性微球［3］。中国药典(2005年版)中红霉素的含量测定采用微生物检定法［4］，此法操作繁琐、费时、影响因素多、结果准确性差。文献报道红霉素及其在制剂中含量的检测方法有紫外分光光度法、高效液相法、高效毛细管电泳法等

5、［5-7］。本文曾采用紫外分光光度法测定红霉素微球的含量［5］,取得良好效果。本文采用高效液相色谱法测定红霉素明胶微球含量，并对2种方法进行统计分析，检验2种方法的差异性。1仪器与试药　　岛津LC10ATVP高效液相色谱仪（SHIMADZUCOPRPORATION），紫外SPD10Avp检测器（SHIMADZUCOPRPORATION），HGMS，自制，批号：20060809、20060812、20060815、20060820、20060822、20060828)。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：DIKMAC18柱(5

6、μm,250mm×4.6mm)；流动相：0.1mol/L磷酸二氢铵（三乙胺调节pH6.5）乙腈（体积比67∶33）；流速1mL/min；检测波长：210nm。2.2溶液的配制　　精密称取红霉素标准品49.6mg置50mL量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,制成质量浓度为0.992mg/mL的标准品溶液。　　精密称取红霉素明胶微球172.3mg(约相当于红霉素23mg),充分研磨，显微观察微球完全破坏后，置于容量瓶中加流动相至刻度，超声30min，放冷,用流动相定容至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜过滤，制成供试品溶液。精密称取空

7、白明胶微球172.4mg,充分研磨，按“供试品溶液”制备方法制成阴性对照溶液。2.3系统适应性及方法专属性试验　在选定的色谱条件下，分别注入红霉素标准品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液，结果见图1。红霉素拖尾因子为1.26、保留时间约13.1min，理论塔板数按红霉素计算不低于1000，与其他组分可基线分离，阴性样品不干扰样品测定。2.4标准曲线分别精密量取标准品溶液1、2、3、4、5mL置10mL量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀。分别取20μL进样,记录色谱峰峰面积。以峰面积(A)为横坐标,质量浓度(ρ)为纵坐标,绘制标准曲线,

8、回归方程为:ρ=0.3×10-4A+0.28×10-2，r=0.9999。结果表明红霉素的质量浓度在0.0992～0.4960mg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。2.7回收率试验　　精密吸取已知浓度的红霉素明胶微球溶液9份，加入一定量的红霉素对照品，配制成