研究海带多糖体外抗氧化作用论文

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1、研究海带多糖体外抗氧化作用论文摘要：目的研究海带多糖体外抗氧化作用。方法　采用体外实验研究海带多糖对羟自由基、超氧阴离子的清除作用以及对H2O2诱导的红细胞氧化溶血和大鼠肝匀浆脂质过氧化的保护作用。结果　海带多糖体外可清除O-2·及·OH;抑制H2O2诱导的大鼠红细胞氧化性溶血;抑制小鼠组织MDA的生成。结论　海带多糖体外具有清除自由基及抗脂质过氧化的作用。关键词：海带多糖;氧自由基;脂质过氧化;抗氧化　海带属海带目海带科，含有多种生物活性成分，其大部分生物活性与其中的多糖成分密切相关[1]。海带多糖(laminarin)是从海带中提取出来的多糖类化合物。梁桂林[2]等对海带多糖进行体内

2、抗氧化研究，结果表明海带多糖在体内具有抗氧化活性。本文对海带多糖的体外抗氧化作用进行了探讨。　　1材料与方法　　1.1材料　　海带多糖的提取、纯化及纸层析鉴定法按文献[3]制备。将市售干海带适度粉碎,用蒸馏水浸泡,加热提取,冷却离心,浓缩,浓缩液加入4倍体积的95%乙醇沉淀,沉淀物依次用无水乙醇、丙酮及乙醚洗涤,用蒸馏水复溶,透析,Seveg法除蛋白,常规干燥得海带多糖。纸层析分析表明,海带多糖由葡萄糖、半乳糖、木糖等组成。硫酸-苯酚法测多糖含量为85%，考马司亮蓝法测定总蛋白含量。　　硫代巴比妥酸购自国药集团化学试剂有限公司(批号：20080925);肝素为万邦医药(批号：081211

3、1);抗坏血酸为福州海王福药制药有限公司产品(批号：0901042);硫酸亚铁、过氧化氢、三氯乙酸等均为市售分析纯试剂。　　752N紫外分光光度计(上海精密科学仪器有限公司);TDL60B台式离心机(上海安亭科学仪器厂);BS124S分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司);HH睸数显恒温水浴锅(常州市国立试验设备研究所);XH睠旋涡混合器(常州市国立试验设备研究所)。（作文网zirnoff等的方法改进[4]，用FeSO4H2O2产生·OH，以·OH氧化水杨酸所得产物的吸光值表示·OH的多少，吸光值越大，·OH越多。4mL反应体系中含9mmol/LFeSO41mL，8.8mmol/LH2

4、O21mL，9mmol/L水杨酸1mL(用50%乙醇作溶剂)及1mL不同浓度的海带多糖，最后加H2O2启动反应，37℃温浴1h，于510nm测吸光值。空白组以重蒸水代替水杨酸和海带多糖，对照组以重蒸水代替海带多糖。清除率以[A0-(Ai-Ai0)]/A0×100%计算，其中A0为对照，Ai为海带多糖某浓度时的吸光值，Ai0为空白组的吸光值。　　1.2.2海带多糖清除O-2效果的测定[5]每支试管加Tris睭Cl缓冲液(pH8.2)4.5mL，25℃预热20min，加1mL不同浓度的海带多糖，再加10mmol/L的邻苯三酚0.4mL，立即摇匀，准确反应4min，立即加入8mol/LHCl0

5、.1mL终止反应，325nm测吸光值。空白组以重蒸水代替邻苯三酚和海带多糖，对照组以重蒸水代替海带多糖。清除率以(A0-Ai)/(A0-Ai0)×100%计算，其中A0为对照，Ai为海带多糖某浓度时的吸光值，Ai0为空白组的吸光值。　　1.2.3海带多糖对小鼠红细胞H2O2所致溶血的影响[6]小鼠颈总动脉采血，肝素抗凝，4℃3000×g离心得红细胞，冷生理盐水洗3次，制成0.5%悬浮液。取红细胞悬液1mL,加不同浓度的海带多糖，最后加50mmol/LH2O20.5mL混匀，37℃温浴1h，加生理盐水4mL，3000r/min离心5min，取上清于415nm测定其吸光值。正常组以生理盐水代

6、替H2O2和海带多糖，模型组以生理盐水代替海带多糖。以模型组为100%溶血，计算溶血度及抑制率。　　1.2.4海带多糖对生成MDA抑制作用的测定小鼠颈椎脱臼致死，迅速分离出肝组织和心组织，用冷的生理盐水洗净后称重，冰浴下匀浆，制成含蛋白质0.5%的悬浮液。　　　取5%肝/心匀浆悬浮液0.2mL，加入不同浓度海带多糖溶液1mL，在37℃温浴1h后，加入20%TCA1mL终止反应,再加0.67%TBA1mL，于沸水浴中显色15min，冷却后离心，测532nm上清液吸光度，以吸光度表示MDA含量的多少。对照组以重蒸水代替海带多糖，清除率以(A0-Ai)/A0×100%计算，其中为A0为对照，A

7、i为海带多糖某浓度时的吸光值。　　1.2.5海带多糖对Fe2睭2O2诱导的小鼠肝线粒体中MDA生成的影响肝组织于在冰浴下以生理盐水制成10%匀浆，2000r/min离心20min，取上清液，以10000×g离心20min,沉淀用生理盐水洗涤2次后,以生理盐水配成吸光值在0.5～0.6的线粒体悬浮液[7]。取肝线粒体悬浮液2.5mL，加入不同浓度海带多糖溶液0.4mL，再加入1mmol/LFeSO40.1mL，1mmol/LH2O20