黄芪对脂多糖诱导大鼠急性肺损伤p38 mapk表

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1、黄芪对脂多糖诱导大鼠急性肺损伤p38MAPK表【摘要】目的探讨脂多糖（LPS）诱导急性肺损伤（ALI）大鼠肺组织磷酸化p38MAPK表达的变化以及黄芪对其之影响。方法静脉注射LPS复制大鼠ALI模型。随机分成3组：正常对照组、ALI组和黄芪组。采用蛋白质印迹检测肺组织磷酸化p38MAPK的表达，并观察大鼠动脉血氧分压（PaO2）、肺湿/干重比（APK的表达较正常对照组显著增加（P<0.01）。黄芪注射液可显著抑制大鼠肺组织磷酸化p38MAPK表达，降低APK磷酸化表达增加；黄芪注射液对内毒

2、素性肺损伤有保护作用，其机制可能与抑制磷酸化p38MAPK的表达有关。【关键词】急性肺损伤；脂多糖；p38蛋白激酶；黄芪EffectofAstragalusontheExpressionofp38ProteinKinaseinRatsentofRespiratoryDiseases,theFirstAffiliatedHospitalofXianningUniversity,XianningHubei437100,China)ABSTRACT:ObjectiveTostudytheexpress

3、ionofp38proteinkinaseinLPSinduecdacutelunginjury(ALI)andtheinterventioneffectofastragalus.MethodsLPSodel.Theratsly:controlgroup,LPSgroupandastragalusgroup.Theexpressionofphosphop38proteinkinaseininBALF,TNFαinserumandhistopathologyininBALFandTNFαi

4、nserum(P<0.01),andalleviatedhistropathologicdamagealleviated.ConclusionTheexpressionofphosphop38isupregulatedinratlungechanismmayberelatedtoinhibitionofthephosphorylationofp38MAPK.KEYAPK）信号转导通路[1]，这条通路与炎症、应激反应的调控密切相关[2]。本研究采用静脉注射脂多糖（LPS）复制大鼠急性肺损

5、伤（ALI）模型，通过检测动脉血氧分压（PaO2）、肺湿/干重比（APK在LPS诱导肺损伤发病过程中的作用，并观察黄芪对肺组织p38MAPK活化的影响，探讨黄芪防治肺损伤的机制。1材料和方法1.1ALI模型的复制健康APK检测速取冻存的肺组织约100mg，放入匀浆器中，加入5倍体积的BufferⅠ（0.1MNaCl，0.01MTris.Cl，pH7.6，0.001MEDTA，pH8.0，1μg/ml抑肽酶，100μg/mlPMSF），冰上匀浆10min。加入等体积的BufferⅡ（0.1MTri

6、s.Cl，pH6.8，0.2MDTT，4%SDS，20%甘油），沸水浴中加热10min。4℃，10000×g离心10min，取上清-70℃保存备用。Bradford法测其蛋白浓度。各组取总蛋白50μg加上样缓冲液（50mMTris.Cl,pH6.8,2%ersham公司）。NC膜经漂洗、封闭后加入稀释度为1∶400的兔抗磷酸化p38多克隆抗体（美国SantaCruz公司），4℃，孵育20h。然后加入辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG，稀释度为1∶200，室温孵育1h。经TBS洗涤，DAB显色。用图

7、象分析仪测定各条带的光密度值（OD）作定量分析。1.5统计学处理实验数据以±s表示，均数差异的显著性采用方差分析和q检验完成，两变量间的相关程度用直线相关分析法分析。以P<0.05作为差异有统计学意义的界限。2结果2.1大鼠动脉血氧分压（PaO2）的变化本实验测得正常大鼠PaO2为14.30±1.21kPa。LPS刺激2h，PaO2显著下降（8.80±0.73kPa）；黄芪注射液干预后PaO2显著回升（12.15±1.26kPa），与LPS刺激组相比，差异具有统计学意义（P<0.01

8、），见表1。2.2肺组织APK的变化蛋白质印迹结果显示大约在38kD的分子量位置上出现阳性条带。经图象分析发现，LPS刺激组肺组织磷酸化p38MAPK的表达较正常对照组显著增加（P<0.01）。黄芪注射后肺组织磷酸化p38MAPK的表达明显下降，与LPS刺激组相比，差异具有非常显著性差异（P<0.01）。提示黄芪抑制p38MAPK的活化（表1）。2.4肺组织磷酸化p38MAPK与PaO2、APK与PaO2呈显著负相关（r=-0.687，P<0.01），与APK抑制剂SB2035