hplc法测定通络胶囊中芍药苷的含量

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1、HPLC法测定通络胶囊中芍药苷的含量钟美霞，肖佳尚，劳海燕【摘要】目的建立通络胶囊中芍药苷的含量测定方法，为通络胶囊质量标准的研究提供依据。方法采用HPLC法，以DiamnosilC18柱(460mm×250mm,5μm)为色谱柱，以乙腈0.05mol/L磷酸二氢钾(体积比40∶60)为流动相，230nm为检测波长。结果此方法线性为1.005~5.025μg，平均加样回收率为99.1%。结论本方法精密度高，分离度良好，可用于通络胶囊中芍药苷的含量测定。【关键词】通络胶囊；芍药苷；高效液相色谱　　Abstract:ObjectiveToestablishamethodforcontentd

2、eterminationofpaeoniflorin,themainconstituentofTongluocapsule.MethodsPaeoniflorinonsilC18column(4.6mm×250mm,5μm).Themobilephaseconsistedofacetonitrile0.05mol/Lpotassiumdihydrogenphosphate(40∶60).ResultsThecalibrationcurvefordetectionofpaeoniflorin1.005to5.025μgethodisaccurate,reliableandreproduci

3、ble,onsilC18(4.6mm×250mm,5μm)为色谱柱；乙腈0.05mol/L磷酸二氢钾(体积比40∶60)为流动相；柱温：30℃；流速1.0mL/min；检测波长为230nm。在此色谱条件下，芍药苷与样品中其他组分分离良好，理论板数按芍药苷色谱峰计大于2000，此条件下芍药苷色谱峰与其他杂峰的分离度不少于1.5。见图1~3。　　2.2对照品溶液的制备精密称取芍药苷对照品10.05mg，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。　　2.3供试品溶液的制备取本品装量差异项下内容物1g，精密称定，置具塞三角瓶中，精密加入50%（体积分数）甲醇溶液50mL，精密称定，浸

4、泡4h，超声处理30min，放冷，精密称定，用50%(体积分数)甲醇补足减失的重量，摇匀，微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，作为供试品溶液。　　图1芍药苷对照品UV图（略）　　Fig.1UVspectrumofpaeoniflorin　　图2芍药苷对照品HPLC图（略）　　Fig.2HPLCofpaeoniflorin　　图3通络胶囊HPLC图（略）　　Fig.3HPLCofTongluocapsule　　2.4线性关系考察分别精密吸取上述对照品溶液5、10、15、20、25μL，注入液相色谱仪，照上述色谱条件测定芍药苷峰面积，以对照品进样量(m)为横坐标，峰面积值(A)为纵坐标，绘

5、制标准曲线，得回归方程：A=1098912m-90526，r=0.9999。结果表明，芍药苷对照品的进样量在1.005~5.025μg范围内呈良好的线性关系。　　2.5精密度试验分别精密吸取上述对照品溶液10μL,连续进样5次,测定芍药苷峰面积值，求得芍药苷峰面积值平均值为2075228,RSD为0.7%，结果表明仪器精密度良好。　　2.6稳定性试验精密称取本品1g，按“2.3”项方法制备供试品溶液，精密吸取10μL，在0、4、8、12、24h进样测定芍药苷峰面积值,求得芍药苷峰面积值平均值为2834271，RSD为0.9%,结果表明样品在24h内基本稳定。　　2.7重复性试验精密称取通络

6、胶囊5份，每份约1g，按“2.3”项方法制备，精密吸取10μL进样测定，计算含量，求得芍药苷含量平均值为5.295mg/粒，RSD为19%，结果表明本法测定的重复性良好。　　2.8回收率试验采用加样回收法，取已知含量样品(芍药苷含量为：5.295mg/粒)6份，精密称取各约0.5g，分别精密加入芍药苷对照品，按“2.3”项方法制备，照上述色谱条件，精密吸取供试品溶液10μL，进样，测定，计算，求得芍药苷平均回收率为99.1%，RSD为1.8%，见表1。结果说明本法准确。　　表1芍药苷回收率试验结果（略）　　Tab.1Resultsofrecoverytestm　　2．9阴性对照试验取缺赤

7、芍的各味药按工艺制成阴性对照液，照前述色谱条件和供试品制备方法进行测定，结果在芍药苷对照品吸收峰位置处无干扰，见图4。　　图4缺赤芍阴性对照HPLC图（略）　　Fig.4HPLCofTongluocapsuleg/粒。　　3讨论　　3.1检测波长的选择用二极管阵列检测器对样品与对照品的芍药苷的色谱图进行检测，芍药苷在230nm有最大吸收(见图1)，在该波长处测定，其他杂质的干扰少，满足含量测定的要求。此外用二极管阵列检测