免疫组化技术进展及在病理诊断中的应用

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1、免疫组化技术进展及在病理诊断中的应用武雪芹(皖北煤电集团总医院病理科安徽宿州234000)【中图分类号】R364.7【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2011)45-0190-02【关键词】肿瘤免疫组织化学病理诊断研究进展免疫组织化学或免疫细胞化学是一种方法学，是用免疫学的方法把抗体标记上可见的颜色如荧光素、酶、某种金属等呈色物质，使抗体由不可见变为可见，来寻找检测组织细胞中的抗原，即组织细胞中的化学成分，所以也是用颜色的变化来判断组织细胞中的化学成分，从而达到诊断和研究疾病的目的。近20年来，由于免疫组化技术的飞跃发展，特别是绝大多数抗体能够应用在福尔马林固定的石蜡切片上，因而

2、大大促进了它在临床病理学上的应用。1免疫组化技术的进展1.1检测技术的进展自1941年Coons及其同事发表免疫荧光技术至今已有半个多世纪［1］,嗣后免疫组化技术也逐步发展。检测技术的进步主要表现在敏感性的提高，以及特异性增强，即可使用较少的抗体检测出针对性的抗原,而乂有极少或没有非特异背景呈色。此外，整个免疫染色时间也更加缩短。这主要表现在以下几方面。1.1.1检测步骤有直接法走向间接法。包括一般间接二步法、PAP法、ABC法、LAB-SA法，现在大家认为以LAB-SA法最为优越［2］。目前曾有将多聚体氧化酶直接连接在第一抗体上，用直接法染色，敏感度也大大提高，但毕竟存在每一单个一抗都需酶标

3、记以及对核抗原效果不好的缺陷。1.1.2标记物有荧光素、酶、胶质金等。近年来，新岀现的荧光素具有荧光更强、封片后不易褪色的特点，或是与其他荧光素可用相似波长的滤光片组合以激发荧光，但颜色不同，更有效的进行双重染色。在胶质金作为标记物方面，使用银加强剂，可使用较小的胶质金标记二抗，经银加强剂及显示棕黑色或黑色，大大增强了敏感性［3］。在酶标记方面，则仍以辣根氧化酶及碱性磷酸酶为常用。1.1.3标记技术近年来，由于生化技术的进步，免疫组化中个别试剂的质量也大有提高，包括二抗的亲和力，标记物的质量等，从而提高了检测系统的灵敏度。例如，Zymed的LAB-SA系统，由于生物素标记二抗，酶标链霉亲生物素

4、蛋白新技术的应用，使得Zymed第二代LAB-SA产品比第一代产品，在敏感度上提高了2-4倍，同样有非常清晰的背景染色。使得一些很难测到的、含量极少的抗原得以显示，或使抗原使用量大大减少，或是在同一抗体浓度下，大大增强了特异染色。LL4其他方面.单一的、不必在使用前新鲜配制的即用型稳定AEC显色剂以及DAB溶液Zymed也已研制成功，另外，将免疫金检测技术与荧光相结合，即是将已经免疫金染色的切片，用特殊的滤片组合激发出的荧光在荧光显微镜下观察，可大大提高其敏感性。1.2抗原修复技术的进展过去，由于有些抗体只能用于冰冻切片上，而不能用于福尔马林固定的石蜡切片上，从而限制了免疫组化技术在研究上与临

5、床上的应用。近年来，由于对福尔马林固定的石蜡切片上抗原修复方法的进展,使免疫组化技术的应用有了很大的突破。1.2.1酶修复方法在进行免疫组化染色前，用酶作预先处理，以暴露被掩盖的抗原。疲用的酶种类繁多，如Ficin，Trypsin,Pepsin等［4］不同抗原需用酶的种类也可能不同，不冋实验室应用酶的种类、浓度、作用时的温度与时间均有不同，一般使用即用型的稳定溶液在37度下培育10分钟以修复抗原。1.2.2热处理方法酶修复抗原法虽扩大了免疫组化染色的应用，但仍有些抗原经酶处理后未能获得阳性染色结果。1991年Shi氏等［5］发表了用微波炉方法修复抗原，使得更多抗原得以修复，使免疫组化染色技术得

6、以迅速扩人应用。在加热方法方面，有以下几种方法值得采用。（1）耐热塑料高压锅置入微波炉中加热15分钟；（2）直接煮沸，经煮沸15分钟；（3）用有温度控制的微波炉，使温度维持在92-98度之间15分钟即可。在进行热处理中应注意：任何方法都需把切片先放入冷的即室温下的缓冲液中，然后逐渐加热煮沸后起算10-15分钟，停止后仍应把切片留在原有存器中，待其冷却15分钟再取出切片进行进一步免疫染色。2免疫组化在病理诊断中的应用免疫组化技术在临床病理学上的应用主要可协助未分化或低分化原发恶性肿瘤或未明来源的转移性恶性肿瘤的诊断；测定肿瘤组织中的某些抗原以了解肿瘤的预后或治疗效果，但免疫组化仍奋一定的局限性，

7、随着tl益频繁的应用，一些最初认为具有器官或组织特异性的抗原都是相对的，例如上皮性标记CK常可在非上皮性肿瘤（血管、平滑肌、横纹肌和肌纤维母细胞等）中表达，间叶性标记Vimentin对软组织肉瘤并不特异，很多癌和恶性淋巴瘤也可表达，故在应用吋应全面分析。2.1应用中性福尔马林缓冲液固定对取得免疫组化的正确结果极其重要，此液能使抗原保存良好，固定吋间1-2天。抗原的修复固定后可使蛋白质分子内及分子间