hplc法测定利咽合剂中黄芩苷的含量

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1、HPLC法测定利咽合剂中黄芩苷的含量【摘要】建立一种可测定利咽合剂中黄芩苷含量的高效液相色谱方法。［方法］采用Hypersil—ODSC18（250mm×4.6mm5μm）色谱柱；流动相为甲醇—1.5%磷酸10%甲醇溶液（40∶60,v/v）；检测波长为276nm；流速为1.0ml/min；柱温：40℃。［结果］黄芩苷在25.74μg·ml-1～514.8μg·ml-1范围内呈良好的线性关系（r=0.9999）,平均回收率为99.8%；RSD1.43%。［结论］高效液相色谱方法简便，快速，准确，可

2、作为该制剂的质控方法。【关键词】利咽合剂黄芩苷高效液相色谱法含量测定　　DeterminationoftheBaicalininPharynxPreparationbyHPLC　　Abstract：［Objective］ItisaimedatdiscoveringaneffectivenofHypersilODSC18：250mm×4.6mm　5μm；themobilephase：1.5%orthophosphoricacidand10%methanealcohol;thedetection;v

3、elocityofflol/min;temperature:40℃;thecontentismeasuredintheethodofapexarea.［Result］Bythismethod，baicalintakesonanexcellentlinearlyrelationl-1～514.8μg·ml-1,averagerecoveriesgetupto99.8%andRSD1.43%respectively.［Conclusion］Thisethodofqualitycontrolonsuch

4、baicalinpreparation.　　Keym×4.6mm5μm）；流动相：甲醇-1.5%磷酸10%甲醇溶液（40：60，v/v）；检测波长为276nm；流速：1.0ml/min,柱温：40℃。　　2.2供试品溶液的制备（1）样品溶液的制备：精密吸取利咽合剂2ml，置100ml容量瓶中，加70%乙醇溶液稀释至刻度，滤过，取续滤液用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液即得。（2）阴性空白对照溶液的制备：按其质量标准中的处方比例，制备缺味（黄芩、木蝴蝶）中药的阴性空白样品对照液，照上述样品溶液的制

5、备方法制成阴性空白对照溶液。（3）对照品溶液的制备：精密称取黄芩苷对照品适量加70%乙醇制成1ml含黄芩苷25.74μg的对照品溶液。　　2.3系统适用性试验取黄芩苷对照品溶液、阴性空白对照溶液和样品溶液，按上述色谱条件下进样10μl，得HPLC图谱（见图1）。理论塔板数按黄芩苷峰计算不应低于3000，分离度大于1.5，黄芩苷峰对称因子为0.95～1.05之间。　　图1对照品黄芩苷和样品及阴性空白对照液的HPLC图（略）　　t/minA.对照品图谱t/minB.样品图谱t/minC.阴性空白对照品

6、图谱　　2.4线性关系的考察分别精密吸取对照品溶液1.0、2.0、5.0、8.0、10、15、20、25μl，注入高效液相色谱仪，按上述条件测定，记录峰面积，以峰面积（y）为纵坐标、黄芩苷进样量（x）为横坐标进行线性回归，得回归方程：Y＝3.408×106X-5.299×103，r=0.9999。结果表明黄芩苷的溶液在25.74μg·ml-1～514.8μg·ml-1之间呈良好的线性关系。　　2.5精密度试验精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，重复进样5次，按上述色谱条件测定峰面积。结果，R

7、SD分别为0.07%和0.10%。　　2.6重复性试验取同一批号样品5份（批号：060214），按2.2项下样品溶液的制备方法制备供试液,平行测定，得：RSD为1.49%。说明方法重现性良好。　　2.7稳定性试验取供试品溶液（批号：060214），分别于0，1，2，4，8，12h，各精密吸取10μl，按上述色谱条件测定峰面积，结果，RSD为0.56%。表明供试品溶液在12h内稳定。　　2.8回收率试验精密吸取已知含量的样品2.0ml，精密加入黄芩苷对照品10ml，照供试品溶液项下操作，按上述色谱条

8、件测定，计算结果见表1。　　2.9样品含量测定分别取不同批号样品，按2.2项下方法制备供试品溶液。精密吸取供试品和对照品溶液各10μl，分别注入高效液相色谱仪测定，结果，黄芩苷含量分别为：2.175，1.629，1.844mg/ml。　　表1回收率测定结果（略）　　　3讨论　　取上述黄芩苷对照品溶液，在紫外分光光度计上于波长200nm～400nm处扫描，结果在276nm波长处有最大吸收，故以276nm为检测波长。笔者对不同系统的流动相进行了比较，结果以甲醇－1.5%磷酸10%甲醇溶