hcv复制子复制效率的影响因素及意义论文

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1、HCV复制子复制效率的影响因素及意义论文【关键词】,肝炎病毒【关键词】肝炎病毒,丙型；复制子；变异(遗传学)；细胞容受性0引言自1989年丙型肝炎病毒（hepatitisCvirus，HCV）发现以来，HCV体外细胞模型研究一直是HCV研究的热点问题之一，能在人肝癌细胞系中高水平自主复制的HCV复制子系统的出现，大大加强了HCV体外复制机制的研究.至1999年复制子模型系统被首次描述以来，这个系统逐步得到了完善.特别是细胞培养适应性变异及宿主细胞容受性这两个能明显增强HCV体外复制能力的重要因素的发现，拓展了复制子系

2、统的应用领域，如瞬时复制系统、选择性全长基因组及基础研究和抗病毒药物筛选所需各种新型复制子的构建.最终.freelo）中，HCV复制子的基因变异及复制动力学研究发现，复制子的基因变异呈现时间依赖性的累积，变异率约为每年每个位点3.0×10-3碱基替代，复制子的基因离散度（diversity）也随时间扩大，来自不同时间点的复制子RNA转染Huh7细胞揭示随时间累积的基因变异明显改善克隆形成效率［8］.1.2适应性变异对HCV复制的影响最初，将一些细胞培养适应性变异插入亲代复制子中，定量转染后测定G418抗性集落的数量，

3、发现特定区域变异的插入致集落形成效率增加，NS5A区某些变异的插入，集落形成效率较亲代增加1×104倍［1］.功能性筛选检测发现高效率的复制子常有多个位点发生适应性变异.目前，有4个HCV分离株的复制子系统即：Con1［9］，HCVN［10］，H77［1］及JFH1［11］序列.HCVN与JFH1序列不需要适应性变异即能在Huh7细胞中有效复制，实验证明NS5A区4个氨基酸（SSYN）的插入与HCVN序列的有效复制有关.H77序列复制子至少需要两个适应性变异［1,5］，S2204I，A1226D或P1496L，含有P

4、1496L及S2204I的复制子较仅含有S2204L复制子的复制效率高3×104倍，而含有A1226D及S2204I的复制子较仅含有S2204L复制子的复制效率高800倍；仅含有P1496L复制子较含有P1496L及S2204I的复制子的复制效率低250倍，表明P1496L联合S2204I适应性变异是有效的H77复制子复制所必需的.Con1复制子的适应性变异研究较深入，发现了一系列的适应性变异位点［2,3］，其中，NS5B区R2884G适应性变异效率最高.在Con1复制子的研究中还证明了复制子的高水平复制无细胞毒性作

5、用.此外，Lohmann等［3］发现两个高度适应性变异位点的组合使复制子的复制能力明显下降.实验显示，与不含适应性变异的复制子比较，NS4B区P1936S变异复制能力增加12倍，NS5A区E2163G变异复制能力增加60倍，NS5B区R2884G变异的复制能力增加500倍，而NS4B加NS5B区联合变异，其复制能力仅增加20倍，NS5A加NS5B区联合变异则未见克隆集落的形成.因此，这些变异可能具有性质相反的作用（inpatibility）.NS3区变异总是与NS4B，NS5A，NS5B区至少1个变异相关，NS4B，

6、NS5A或NS5B区单个变异赋予细胞培养的适应性机制似乎不同于NS3区的变异.由上可见，适应性变异可发生于所有HCV非结构蛋白区域，根据其对复制效率及协同性的影响，适应性变异至少可分为两组：①NS3区变异：对复制效率影响小，但与高度适应性变异联合，可协同增加复制效率；②NS4B，NS5A，NS5B区变异：对复制效率有明显的增强作用，但相互之间联合可引起复制效率降低.此外，有人［12］构建了一个含有1bNS35A骨架和2bNS5B的嵌合性1b:2b复制子，仅在NS5B区含有一个新的适应性变异，即能在Huh7细胞中有效复

7、制.1.3适应性变异增加RNA复制效率的机制目前尚不清楚.根据一些实验结果显示，NS3和NS5B区的替代常常位于分子的表面及远离各个酶活性中心，推测细胞适应性变异主要是直接或间接地影响了复制子与宿主细胞因素的相互作用［13］.1.4细胞培养适应性变异对体内感染性的影响在细胞培养适应性变异的研究中发现病毒基因的体内感染性与体外复制能力明显不一致［1,9,10,14］.HCVCon1亲代基因（不含适应性变异的分离株）肝内接种黑猩猩1Eq/L，但其复制子的复制能力很弱，而在该基因的NS3区引入2个适应性变异（E1202G,

8、T1280I）及NS5A区引入1个适应性变异（S2197P）的子代基因则完全丧失了体内感染性，但体外复制能力明显增强，如果仅在NS5A区引入1个适应性变异，动物可被该子代基因感染，只是感染时间延后1annV,KornerF,DobierzeannV,HoffmannS,HerianU,etal.Viralandcellulardetermina