大鼠孤束核内h3 受体对哮喘发作时脑组织中fos蛋白表达的影响论文

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1、大鼠孤束核内H3受体对哮喘发作时脑组织中Fos蛋白表达的影响论文.freelalerats.MethodsTheexpressionsofER.αmRNAandER.βmRNAinlungtissueserasechainreaction(RT-PCR),andER.βproteininlungmunohistochemistry.ResultsAsidefromRNA,lungtissueshooderateexpressionofER.βmRNA.ThepositiveER.βimmunore

2、ac-tivitynarepithelium,intermediatecells.freeloothmusclecellsoflungtissueandinpulmo-naryvascularsmoothmusclecells,endothelialcells.ConclusionER.βisdistributedinlungtissueofmalerats.Keymunohistochemistry;rats[摘要]目的:探讨大鼠孤束核(NTS)内组胺H3受体对哮喘发作时大脑Fos蛋白表达的影响

3、及其意义。方法:取健康雄性SD大鼠制备哮喘模型并诱发哮喘发作,采用中枢立体定位及微量注射技术,分3组分别在NTS内微量注射无菌生理盐水、H3受体激动剂R.α.methylhistamine(RMHA)以及H3受体拮抗剂thioperamide(Thio)加RMHA,用SABC免疫组织化学方法测定大鼠哮喘急性发作后1hFos蛋白在丘脑至延髓平面各核团的分布情况。结果:与哮喘组相比,哮喘大鼠NTS内微量注射1μgRMHA,丘脑室旁核、下丘脑室旁核、室周核、NTS等核团Fos蛋白表达减少,阳性细胞数降低

4、,差异有显著性(P0.01);而用Thio5μg预处理则可拮抗RMHA的上述效应。结论:NTS内H3受体可能通过丘脑室旁核、下丘脑室旁核和室周核等脑区相关神经元参与对哮喘的神经调控,从而可能抑制哮喘发作。[关键词]大鼠;孤束核;H3受体;哮喘;Fos蛋白;表达支气管哮喘是一种常见的气道慢性变态反应性炎症,发病机制非常复杂,其中涉及多种炎性细胞和炎性介质,目前已证实c-fos参与了气道炎症反应。c-fos是一种即刻早期基因,在生理状态下即有低水平表达,调控着多种细胞的生长和分化,参与重要脑功能活动的

5、信号转导和调控过程,已被公认为脑功能活动形态学定位标记物之一[1]。本研究拟在大鼠孤束核(nucleustractussolitarius,NTS)内微量注射H3受体激动剂(R.α.methylhistamine,RMHA),用Fos蛋白抗体免疫组织化学方法检测丘脑至延髓平面各核团Fos蛋白的表达情况,初步探讨NTS内H3受体可能通过哪些脑区神经元来调控大鼠哮喘发作时的呼吸运动,从而为揭示哮喘发病机制和开发有效的抗哮喘药物提供实验依据。1材料和方法1.1哮喘模型制备雄性成年SD大鼠28只,体重25

6、0~300g,由东南大学医学院实验动物中心提供,在安静、温暖(18~25℃)、避强光、明暗周期为10.14h的实验室预饲养1周后,随机取24只大鼠分成哮喘模型组(n=18)和生理盐水(NS)对照组(NS组,n=6)。实验第1天,每只模型组大鼠腹腔注射用卵蛋白(OVA)粉末100mg、氢氧化铝干粉100mg、灭活的百日咳杆菌5×109个配成的混悬液1ml1次,自第15天开始用超声雾化器给大鼠雾化吸入1%OVANS溶液(2~3mlmin-1,颗粒直径≤5μm),每天1次,每次均以哮喘症状出现(烦躁不安

7、、呼吸急促、用力呼吸、呼吸困难、喘息、腹肌明显收缩、咳嗽等)作为指标,连续3d。NS组大鼠在致敏和吸入激发阶段均以NS代替OVA混悬液,且吸入时间为同批哮喘模型组鼠最长诱喘时间。1.2核团定位和给药方法模型大鼠乌拉坦1gkg-1腹腔注射麻醉后,将鼠头固定于立体定位仪上,参照Paxinons-HA(Sigma公司)临用前用无菌NS配制成1μgμl-1和2μgμl-1;H3受体拮抗剂thioperamide(Thio,Sigma公司)用无菌NS新鲜配制成10μgμl-1,pH7.2~7.4,低温保存,

8、注射前置于37℃水浴箱中加温。实验结束后用相同给药法在原点注射等体积美蓝后,将大鼠头浸泡在10%的甲醛液内,7d后冰冻切大鼠脑片(40μm),查找注射点,对照大鼠脑图谱确定注射部位,凡注射部位不在NTS的实验动物均剔除。1.3实验分组将已成功制备的哮喘模型大鼠按NTS处注射不同药物再随机分为哮喘组(OVA加NS组)、OVA加RMHA组及OVA加Thio加RMHA组3组,每组6只,即各组在静脉注射OVA溶液(40mgkg-1,共0.1ml)诱发哮喘急性发作后,分别往NTS内微量注射1

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