腹腔内注射不同剂量异丙酚对大鼠脑内中枢Fos蛋白表达的影响

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1、郑州大学硕士学位论文腹腔内注射不同剂量异丙酚对大鼠脑内中枢Fos蛋白表达的影响姓名：孙凯申请学位级别：硕士专业：麻醉学指导教师：董铁立201105摘要腹腔内注射不同剂量异丙酚对大鼠脑内中枢Fos蛋白表达的影响研究生孙凯导师董铁立郑州大学第二附属医院麻醉科河南郑州450014背景和目的全身麻醉的发展历史大约已经有160多年，关于全身麻醉药作用机制的研究一直是麻醉学科的重点、难点项目，但是全身麻醉的机理尚不明确，静脉全麻药在人体的作用位点、怎样作用等问题至今也不明确。丙泊酚是静脉全身麻醉药物的一种，是一种新型

2、短效的静脉麻醉药，其诱导速度迅速、苏醒快且安全，连续输注无体内蓄积作用，现在已广范围应用于麻醉诱导及麻醉维持中，也常用于ICU病房的镇静等，但其导致意识消失的机制尚不明确。多数学者认为脑是异丙酚作用的主要部位，但其作用的具体位置还需要进一步研究；在全身麻醉状态下机体中枢神经的许多功能被抑制，然而神经系统的某些区域仍处于功能活跃状态，表明脑内存在着与全身麻醉药作用的敏感靶位；随着麻醉技术的不断发展，近年来人们发现即刻早期基因c．Fos，在中枢区域可因刺激而立即进行转录为c．FosmRNA，翻译生成Fos蛋白

3、返回核内调节其他靶基因，参与重要脑功能活动的信号传导和调控过程，现在已经是一种脑功能活动形态学定位标记物。本研究，我们通过在大鼠腹腔注射不同剂量的异丙酚，观察其行为学的改变，并用麻醉深度评分标准打分，采用免疫组化法，通过对全麻状态下检测基因表达产物Fos蛋白的研究，进一步探讨异丙酚作用机制以明确其在静脉全身麻摘要醉中的相关敏感靶位。材料与方法选择健康、足月、雄性SD大鼠64只，体重200．2409，由河南省动物实验中心提供，随机分为8组(n-8)：对照组(Cl组、CID组)、异丙酚组(Pl组、P2组、P3

4、组、Plo组、P2D组、P3D组)。Cl组即SD大鼠腹腔注射生理盐水+DMSO2ml、P1组即SD大鼠腹腔注入异丙酚30mg／kg、P2组即SD大鼠腹腔注入异丙酚75mg／kg、P3组即SD大鼠腹腔注入异丙酚120mg／kg、Cm组即SD大鼠腹腔注射生理盐水+DMSO2ml后5．5min断尾、PID组即SD大鼠腹腔注入异丙酚30mg／kg后5．5min断尾、P2D组即SD大鼠腹腔注入异丙酚75mg／kg后5．5min断尾、P3D组即SD大鼠腹腔注入异丙酚120mg／kg后5．5min断尾：然而，观察各组腹

5、腔注射生理盐水、药物后5．5min及5．5min断尾时，30min，lh时大鼠的呼吸及行为学的改变，并用麻醉深度评分标准打分；腹腔注射生理盐水、药物后1．5小时，各组断头取脑组织，应用Fos蛋白免疫组织化学法(ABC法)，检测Fos免疫反应(Fos．IR，immunityreactionofFos)阳性神经元在大鼠脑区的分布；观察腹腔注射不同剂量异丙酚的镇静、镇痛作用及其量效关系。实验fj{『将大鼠放置在室温为20℃的安静环境中饲养24h以上，以消除强光、噪音等额外刺激。统计处理实验数据以均数±标准差(X

6、±s)表示，应用SPSSl2．0软件分析数据，组问、组内比较采用时间序列的方差分析，两两比较采用q检验，计数资料采用，检验；检验水准为a=0．05。结果1．行为学评分结果：CI、CID组腹腔注射生理盐水后，大鼠意识清醒，活动没有受限评分为0。Pl组，5．5min，30min，lh时评分为4分，则均处于轻度镇静；PlD组，5．5min时评分为2分，处于警觉状态，30min、lh时评分为4分，均处于轻度镇静；P2组5．5rain时评分为10分，处于过渡状态；30min为13分，达适度麻醉，lh时评分10分则处

7、于过渡状态；P2D组5．5min评分为5分，处于轻度镇静；30min时评分为6分，处于过渡状态，lh时评分为5分，处于轻度镇静；P3组5．5min时评分为13分，大鼠达适度麻醉，30rain时评分为15分达深麻醉，1h时评分为lO分，则处于过渡状态；P3D组，5．5min时评分为10分，达过渡状态；30min时评分为14分，大鼠达适度麻醉；lh时评分为10分则处于过渡状。摘要2．实验发现：Cl组大鼠皮层、海马可见少量散在分布的Fos．IR阳性神经元。Pl组、P2组、P3组大鼠中枢Fos．IR阳性神经元表达

8、较CI组大鼠明显增多，且呈强阳性表达，且Fos．IR阳性细胞核呈棕黑色，主要分布在皮层，海马、杏仁核、丘脑室旁核、下丘脑室旁核，与CI组比较有显著差异性，差异具有统计学意义(尸<0．05)，且大鼠中枢Fos．IR阳性神经元表达与异丙酚剂量呈剂量依赖性，P3组与Pl组、P2组比较有显著差异性，差异具有统计学意义(尸