cyp1a1-2a基因多态性与宁夏汉族乳腺癌遗传易感性研究论文

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1、CYP1A1*2A基因多态性与宁夏汉族乳腺癌遗传易感性研究论文郭卫东，饶宁莲，刘春莲，赵巍，，霍正浩，彭亮，陈银涛.freelorphismandSusceptibilitytoBreastCancerintheHanNationalityinNingxiaAbstract:［Purpose］ToinvestigatetheassociationbetorphismanditssusceptibilitytobreastcancerintheHannationalityinNingxia.［Me

2、thods］CYP1A1*2Agenepolymorphismin144casesozygoteCCorphismislinkedozygoteandheterozygotemightincreaseriskforbreastcancer,buts;cytochromeP4501A1*2A;genepolymorphism;Ningxia;Hanpopulation目前已确认的乳腺癌危险因素只能解释30%～40%的发病原因1。除家族性乳腺癌主要与BRCA1、BRCA2有关外，散发性乳腺癌的发生可

3、能与环境致癌物的代谢有关。个体之间的患癌差异性被称为肿瘤遗传易感性。研究表明Ⅰ相与Ⅱ相代谢酶基因多态性与个体肿瘤易感性差异有关。CYP1A1是体内重要的Ⅰ相代谢解毒酶之一，能代谢活化多种环境致癌物或致突变物2，国外报道显示其遗传多态性与乳腺癌的易感性有关3。本研究对144例乳腺癌患者和154例对照的细胞色素P4501A1（CYP1A1）基因3′端*2A多态性的分析，探讨CYP1A1*2A基因多态性与宁夏汉族乳腺癌易感性的相关性。1材料与方法1.1研究对象于2005年5月～2006年8月，收集经宁

4、夏医学院第一附属医院临床病理检查确诊的女性乳腺癌患者144例，年龄28~75岁，平均年龄52.27岁；来自该院的健康体检女性对照者154例，年龄30~70岁，平均年龄52.69岁。所有研究对象均无乳腺炎等乳腺疾病史、无放射和化学药物治疗史、无自身免疫性疾病史；两组研究对象均为在宁夏地区生活15年以上且无血缘关系的汉族居民。以上研究对象为排除PCR扩增失败的样本。1.2实验方法1.2.1提取外周血DNA抽取静脉血3～5ml，EDTA抗凝，低渗溶血法分离白细胞,酚、氯仿法提取基因组DNA，并用乙醇沉

5、淀，溶解于保存液(TAE)中(浓度为0.1mg/L)，置-4℃冰箱保存。1.2.2CYP1A1基因多态性检测引物设计：引物3由北京赛百盛技术有限公司合成。上游：5′-TAGGAGTCTTGTCTCATGCCT-3′，下游：5′-AGCGGCTACACCTCTTCACTG-3′。上下游引物（各5OD）分别加去离子水228.8μl及262.6μl配置成1μl/L备用。PCR扩增：体系总体积为25μl，包括10pmol/μl的引物溶液各1.25μl，4×dNTP(含各种dNTP2.5mmol/L)溶液

6、2.0μl，10×Buffer2.0μl，25mmol/LMgCl2溶液1μl，Tag酶1U（购自华美生物工程公司），基因组DNA溶液2.0μl，再加去离子水至25μl配成反应体系。应用Bio-Rad公司的PE2400PCR仪进行基因扩增。反应条件为94℃预变性5min，循环周期依次为解链94℃35s，退火60℃35s，延伸72℃60s，33个循环周期后72℃再延伸7min。1%琼脂糖凝胶电泳，检查聚合酶链反应（PCR）扩增产物，扩增片段大小为343bp。PCR扩增产物置-4℃冰箱保存待用。酶切

7、与电泳：PCR扩增产物10μl，MspⅠ(Promega)0.5μl(10U)，10×Buffer2.0μl，BSA2.0μl，用去离子水补足至20μl，37℃水浴，转摇40转，消化4h。2%琼脂糖凝胶电泳40min。酶切结果经电泳后，于紫外灯下判定其基因型，CYP1A1*2A野生型（TT）显示为343bp一条带；杂合突变型（TC）为343bp、200bp、143bp三条带；纯合突变型（CC）为200bp、143bp两条带。另取TT和CC的PCR扩增样本数例送测序，检验基因分型的准确性。1.3统

8、计学处理采用SPSS11.5软件对所得数据进行统计分析。测得的基因型、等位基因频率与Hardy-spⅠ识别的酶切位点。3种基因型在不同人群中的分布表现出较大的差异。在亚洲人群基因型CC和基因型TC频率分别是2%～18%和32%～55%，而在欧洲和美洲白种人群两种基因型的频率则分别是0～5%和9%～28%4。环境致癌物如多环芳烃(PAHs)5通过胞浆内芳烃受体(AhR)介导而高度诱导CYP1A1表达。前致癌物与受体结合后，AhR与Hsp90解离，在芳烃受体核转运蛋白(Ahreceptornucle