比格犬注射重组腺病毒adhgf后血清中抗腺病毒抗体及中和抗体的检测论文

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1、比格犬注射重组腺病毒AdHGF后血清中抗腺病毒抗体及中和抗体的检测论文哈小琴,赵治华,吕同德,劳妙芬,吴丹莉,吴祖泽【摘要】目的：观察Beagle犬重复给予AdHGF后血清中抗腺病毒抗体及抗肝细胞生长因子（hepatocytegroo龄.freelAb（RD），辣根过氧化物酶标记羊抗鼠IgG(JacksonImmunoResearchLaboratories,Inc),重组人HGF蛋白纯品（RD）,DMEM(Gibco),小牛血清（天津血研所）,猴抗血清（军事医学科学院五所昭衍新药研究中心），洁净工作台（北京半导体设备一厂），

2、CO2培养箱（Sanyo）,IX70倒置荧光显微镜（Olympus）,.freelpus）.1.2方法1.2.1动物分组设正常对照组、手术对照组、AdHGF小剂量组(2.4×107pfu/kg,拟临床用量3.4倍)和大剂量组(2.4×108pfu/kg,拟临床用量34倍)，每组6只.1.2.2给药途径采用心肌注射和臀部肌肉注射相结合,首次心肌注射，其余13次为肌肉注射给药.给药期限为7o.1.2.3犬血清中抗腺病毒抗体测定利用病毒中和反应方法，即病毒与抗血清中和后，将其感染细胞，细胞不产生病变为抗腺病毒抗体阳性，反之细胞出现病变

3、为抗腺病毒抗体阴性，并观察绿色荧光是否出现.将293细胞接种于96孔细胞培养板上，5×104个/孔.次日感染病毒（AdGFP）与血清的混合液:取20μL犬血清加8u的青霉素，再加5×106pfu病毒,相当于100MOI(multiplicityofinfection,感染强度)，混匀后37℃水浴30min.吸弃原培养液，加入上述混合液，每个样品双份，每孔加入200μL，以小牛血清加病毒液作阴性对照,猴抗血清为阳性对照，置37℃，50mL/LCO2的培养箱继续孵育.24，36，48h观察荧光及CPE(细胞病变效应).1.2.4犬血

4、清中中和抗体测定用ELISA方法测定血清中抗HGF抗体水平.收集稳定分泌表达HGF的CHO细胞的培养上清作为抗原，辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG为二抗，新鲜配制的OPD为底物显色液，测A490nm值.同时用抗HGFmAb作一标准曲线，以计算抗体的滴度.2结果2.1血清抗腺病毒抗体检测共12次采血，受试动物212只次，手术对照组及正常对照动物血清均出现明显CPE及强荧光(图1).给药前及给药2次后24h的血清也出现明显的阳性结果.给药4次后大剂量组5只动物血清均对腺病毒有中和作用(图2A)，小剂量组3只动物也已检测到抗体.给药6次

5、后，动物全部检测到高滴度抗体(图2B).停药后4etovDM,GaggarA,NiS,etal.Adenovirusbindingtobloodfactorsresultsinlivercellinfectionandhepatotoxicity［J］.JVirol,2005,79(12):7478-7491.［4］PandoriM,HobsonD,SanoT.Adenovirusmicrobeadconjugatespossessenhancedinfectivity:aneE.Rebinantadenovirusvector

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