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1、丹参和三七单体成分对干细胞分化的影响论文.freelol/L的5-氮胞苷(5-aza)和30mg/L丹酚酸B(SalB)的低糖DMEM培养液培养MSCs24h后,RT-PCR法检测心肌特异性转录因子Nkx2.5、GATA-4和心肌特异性蛋白α-actinmRNA的表达。结果显示,用贴壁培养法可获得纯化的MSCs,SalB可诱导MSCs向心肌样细胞分化。研究人员通过培养、纯化及鉴定大鼠MSCs,用SalB、5-aza、SalB联合5-aza分别定向诱导分化,观察此过程中MSCs的形态学变化并采用免疫细胞化学法鉴定诱导后MSCs心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)的表达
2、,检测GATA-4和Nkx2.5基因表达。结果SalB可在体外诱导大鼠MSCs定向分化为心肌样细胞,其与5-aza联合诱导可明显提高MSCs向心肌细胞分化的能力,并且在Nkx2.5基因表达上SalB的优势更加明显,其中SalB纯度为78%(终浓度为250μg/L)3-5。华氏等6选用成年近交系SCs,并进行培养扩增;免疫组化方法对第9代MSCs表面抗原进行鉴定。分别应用10μmol/L5-aza及250μg/LSalB联合5-aza对第9代MSCs联合诱导24h,于诱导后第4周检测Desmin、α-actinmRNA的表达。结果发现,SalB具有促进5-aza诱
3、导的MSCs向心肌样细胞分化的作用。2.2诱导干细胞向神经元样细胞分化庹氏等7观察SalB诱导小鼠胎脑神经干细胞分化后细胞膜结构,发现SalB诱导神经干细胞分化神经元细胞膜的窗孔样结构与小凹明显增多,提出可能与SalB增强细胞内外物质交换功能和促进细胞内信号转导有关,其中SalB在培养基中终浓度为0.5μg/mL。原氏等8体外分离培养猴MSCs,流式细胞仪检测其表面标志,用含隐丹参酮的无血清L-DMEM诱导MSCs分化为神经元样细胞,发现隐丹参酮可在体外将猴MSCs诱导分化为神经元样细胞,其中隐丹参酮浓度为20mg/L。夏氏等9-10采用Ficoll-Paque
4、液分离成人MSCs,体外扩增,流式细胞仪检测表面抗原表达,采用含隐丹参酮与丹参酮Ⅱ(TanⅡA)无血清DMEM诱导MSCs分化为神经元样细胞。指出隐丹参酮体外可诱导成人MSCs分化为神经元样细胞,TanⅡA体外可诱导成人MSCs分化为神经元样细胞,其中TanⅡA浓度为25μmol/L。余氏等11-12采用含丹参素与丹参酮的无血清L-DMEM诱导人MSCs分化为神经元样细胞,并且探讨了丹参素与丹参酮不同浓度及不同作用时间对MSCs诱导分化为神经元样细胞的影响。发现丹参素可以在体外诱导MSCs分化为神经元样细胞,其诱导转化率与丹参素浓度和作用时间有关。在经碱性成纤维
5、生长因子(bFGF)预诱导后,用10μg/mL丹参素诱导5h作用最为显著。丹参酮可以在体外诱导MSCs分化为神经元样细胞,在浓度为5μg/mL时诱导作用最为明显。2.3对干细胞的其他作用孙氏等13用密度梯度法分离、培养兔MSCs,18只兔随机分为空白组、丹参素和克伦特罗组,观察形成的MSCs成纤维样集落数目,并用流式分析法鉴定。发现丹参素和克伦特罗对兔MSCs有增殖作用,其中丹参素浓度为10μg/mL。陈氏等14采用密度梯度离心法获得外周血内皮祖细胞(EPC),体外进行诱导、分化和扩增,于培养第7日选择免疫荧光鉴定EPC,观察不同浓度TanⅡA对EPC增殖和迁移
6、的影响,提出TanⅡA能改善EPC的增殖、迁移和粘附能力的观点,且0.8mg/LTanⅡA达最大效应。巢氏等15采用细胞培养法,以新生24h内大鼠海马神经干细胞为研究对象,制备缺氧、氧自由基损伤模型,观察神经干细胞损伤后变化,四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定OD值。结果发现,丹参酮对神经干细胞缺氧、氧自由基损伤具有保护作用,尤以80μmol/L组保护作用最明显。郭氏等16以丹参素、丹酚酸为干预药物,观察其对胎鼠脑神经干细胞迁移的诱导作用及不同浓度丹参素、丹酚酸的差异,并观察了在小鼠体内条件下,丹参素和丹酚酸对小鼠室管膜下nestin阳性神经元迁移的影响,得出丹参素
7、和丹酚酸均具有诱导胎鼠脑神经干细胞迁移的作用,丹酚酸的作用优于丹参素,丹酚酸浓度为40mg/L时促迁移作用最强的结论。3三七总皂苷作为干细胞分化诱导剂的研究3.1诱导干细胞向心肌细胞分化李氏等17采用骨髓细胞体外培养技术分离大鼠MSCs,以流式细胞仪检测细胞表面标志;采用MTT法观察PNS对MSCs增殖的影响;采用第8代MSCs进行体外心肌细胞诱导分化并鉴定心肌细胞。结果发现,PNS能促进大鼠MSCs体外增殖并可诱导MSCs分化为心肌样细胞,并且短期(第1、3日)、低浓度(50mg/L)时PNS促进MSCs增殖,长期(第5日)、高浓度(250、400mg/L)时
8、PNS则明显抑制MSCs
