反相高效液相色谱法测定解痉镇痛酊中橙皮苷的含量论文

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1、反相高效液相色谱法测定解痉镇痛酊中橙皮苷的含量论文.freell·min-1，检测波长为283nm，柱温为35℃。结果橙皮苷在0.102～0.765μg范围内线性良好，r=0.9996；平均加样回收率为97.7%，RSD为1.38%(n=5)。结论该方法快速简便，准确可靠.freelinationmethodofhesperidininJiejingZhentongTincturebyRPHPLC.MethodsTheseparationedonC18column,ethanol1%aceticacid(40∶60)a

2、smobilephase.Theflol·min-1,thedetection,andthecolumntemperatureethodisrapid,sensitiveandaccurate,anditcanbeusedforqualitycontrolofJiejingZhentongTincture.Keyp，ALS，COL，VstationforLC3D）；色谱柱：AgilentODS3(5μm，4.6mm×250mm），梅特勒托利多AB265S电子天平。橙皮苷对照品（批号：110721200211，供含

3、量测定用，中国药品生物制品检定所），除甲醇为色谱纯、水为纯化水外，其它试剂均为分析纯，解痉镇痛酊为市售品（由上海市某一制药企业生产，批号050205，050613，051103）。2方法与结果2.1测定波长的选择根据文献报道［2］，本实验应选择283nm作为检测波长，经Agilent1100的DAD检测器扫描测定，橙皮苷在283nm处有最大吸收，可以作为橙皮苷的检测波长。2.2色谱条件AgilentODS3色谱柱(5μm，4.6mm×250mm)，流动相为甲醇：1%醋酸溶液（40∶60），柱温为35℃，检测波长为283

4、nm，流速1.0ml·min-1。2.3对照品溶液的制备精密称取对照品适量，加甲醇配制成每毫升含橙皮苷0.051mg的溶液即得。2.4供试品溶液的制备精密吸取解痉镇痛酊25ml，水浴蒸去乙醇，残渣加入硅藻土适量，拌匀，置入索氏提取器中，加入石油醚（60～90℃）适量，加热回流2～3h，弃去石油醚液，药渣挥干，加甲醇适量，再加热回流至提取液无色为止，放冷，提取液置100ml量瓶中，用少量甲醇分次洗涤容器，并入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。2.5阴性对照溶液的制备按缺陈皮浸出液的处方进行配制，然后同供试品溶液的制备方法

5、进行制备即得。2.6系统适应性实验分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液10μl注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行分析，记录色谱图，发现该色谱条件下柱效较高，橙皮苷与其它组分可完全分离，阴性对照溶液图谱在橙皮苷峰位置处无假阳性峰。见图1～3。2.7线性关系考察精密吸取2，4，6，8，10，15μl橙皮苷对照品溶液，注入液相色谱仪，按上述色谱条件分别测定其峰积，以橙皮苷的量X（μg）为横坐标，测得的峰面积Y为纵坐标，进行线性回归，其回归方程为：Y=3.991×103X+1.842×101,r=0.9996（n=6）

6、，结果表明橙皮苷在0.102～0.765μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。2.8精密度实验精密吸取上述对照品溶液10μl重复进样5次，按上述色谱条件测定橙皮苷峰面积。结果：RSD=0.85%(n=5)，表明进样精密度良好。2.9稳定性实验取“2.4”项下供试品溶液，重复进样1次/h，10μl/次，持续6h，其峰面积的RSD=1.05%(n=6)，结果表明供试品溶液6h内基本稳定。2.10重复性实验取同一批号的解痉镇痛酊，按“2.4”项下的方法进行制备，并按上述色谱条件重复测定5次，测得橙皮苷的平均含量为1.26mg·ml

7、-1，RSD=1.25%(n=5),表明分析方法精密度较好。2.11回收率实验采用加样回收法，分别精密吸取已知橙皮苷含量的样品1ml，共5份，再分别精密加入一定量的橙皮苷对照品，按“2.4”项下的方法进行处理，并按上述色谱条件测定，计算回收率。结果见表1。表1回收率实验结果（略）2.12样品含量测定精密吸取不同批号的样品25ml按“2.4”项下的方法进行制备，再精密吸取对照品溶液与样品溶液各10μl，注入液相色谱仪中，按上述色谱条件测定，以外标法测定样品中的橙皮苷的含量。结果见表2。表23批样品中橙皮苷的含量（略）3讨论3

8、.1本品经二极管阵列检测器扫描测定，橙皮苷在283nm处有最大吸收，与《中国药典》［2］报道的一致，本实验也选择283nm为检测波长，保证了检测的准确性。3.2在该实验中曾考虑不经过去乙醇和石油醚处理，而直接把供试品注入液相色谱仪中，结果发现杂质峰很多，而且跟橙皮苷不能很好的分离，本样品经过上述方法处理