反相高效液相色谱法测定解痉镇痛酊中橙皮苷的含量

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1、反相高效液相色谱法测定解痉镇痛酊中橙皮苷的含量【摘要】目的建立反相高效液相色谱（RPHPLC）法测定解痉镇痛酊中橙皮苷含量的方法。方法采用C18柱，甲醇：1%醋酸溶液（40∶60）为流动相，流速为1.0ml·min-1，检测波长为283nm，柱温为35℃。结果橙皮苷在0.102～0.765μg范围内线性良好，r=0.9996；平均加样回收率为97.7%，RSD为1.38%(n=5)。结论该方法快速简便，准确可靠，灵敏度高，可用于解痉镇痛酊的质量控制。【关键词】解痉镇痛酊；橙皮苷；反相高效液相色谱法　　Abstract：ObjectiveToestablishthedeterminati

2、onmethodofhesperidininJiejingZhentongTincturebyRPHPLC.MethodsTheseparationedonC18column,ethanol1%aceticacid(40∶60)asmobilephase.Theflol·min-1,thedetection,andthecolumntemperatureethodisrapid,sensitiveandaccurate,anditcanbeusedforqualitycontrolofJiejingZhentongTincture.　　Keyp，ALS，COL，Vstationfor

3、LC3D）；色谱柱：AgilentODS3(5μm，4.6mm×250mm），梅特勒托利多AB265S电子天平。橙皮苷对照品（批号：110721200211，供含量测定用，中国药品生物制品检定所），除甲醇为色谱纯、水为纯化水外，其它试剂均为分析纯，解痉镇痛酊为市售品（由上海市某一制药企业生产，批号050205，050613，051103）。　　2方法与结果　　2.1测定波长的选择　　根据　　2.6系统适应性实验分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液10μl注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行分析，记录色谱图，发现该色谱条件下柱效较高，橙皮苷与其它组分可完全分离，阴性对照

4、溶液图谱在橙皮苷峰位置处无假阳性峰。见图1～3。　　2.7线性关系考察精密吸取2，4，6，8，10，15μl橙皮苷对照品溶液，注入液相色谱仪，按上述色谱条件分别测定其峰积，以橙皮苷的量X（μg）为横坐标，测得的峰面积Y为纵坐标，进行线性回归，其回归方程为：Y=3.991×103X+1.842×101,r=0.9996（n=6），结果表明橙皮苷在0.102～0.765μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。　　2.8精密度实验精密吸取上述对照品溶液10μl重复进样5次，按上述色谱条件测定橙皮苷峰面积。结果：RSD=0.85%(n=5)，表明进样精密度良好。　　2.9稳定性实验取“2.4”项下供

5、试品溶液，重复进样1次/h，10μl/次，持续6h，其峰面积的RSD=1.05%(n=6)，结果表明供试品溶液6h内基本稳定。　　2.10重复性实验取同一批号的解痉镇痛酊，按“2.4”项下的方法进行制备，并按上述色谱条件重复测定5次，测得橙皮苷的平均含量为1.26mg·ml-1，RSD=1.25%(n=5),表明分析方法精密度较好。　　　2.11回收率实验采用加样回收法，分别精密吸取已知橙皮苷含量的样品1ml，共5份，再分别精密加入一定量的橙皮苷对照品，按“2.4”项下的方法进行处理，并按上述色谱条件测定，计算回收率。结果见表1。表1回收率实验结果（略）　　2.12样品含量测定精密吸取不

6、同批号的样品25ml按“2.4”项下的方法进行制备，再精密吸取对照品溶液与样品溶液各10μl，注入液相色谱仪中，按上述色谱条件测定，以外标法测定样品中的橙皮苷的含量。结果见表2。表23批样品中橙皮苷的含量（略）　　3讨论　　3.1本品经二极管阵列检测器扫描测定，橙皮苷在283nm处有最大吸收，与《中国药典》［2］报道的一致，本实验也选择283nm为检测波长，保证了检测的准确性。　　3.2在该实验中曾考虑不经过去乙醇和石油醚处理，而直接把供试品注入液相色谱仪中，结果发现杂质峰很多，而且跟橙皮苷不能很好的分离，本样品经过上述方法处理后，不仅减少了样品对色谱柱的污染，而且大大减少了杂质峰，确保

7、了橙皮苷峰与杂质峰的良好分离，同时提高了柱效。　　3.3在该实验中曾选用甲醇-醋酸-水［2］、甲醇-水［3］系统作为流动相，均发现柱效不高，而且拖尾较严重。结果表明，以甲醇：1%醋酸（40∶60）为流动相，再适当提高柱温就能解决上述问题，而且保留时间较短。【参考