树突状细胞活化的ctls联合5

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1、树突状细胞活化的CTLs联合5【摘要】目的探讨树突状细胞（dendriticcells,DCs）活化的细胞毒T细胞（CytotoxicTlymphocytes,CTLs）联合5-氟尿嘧啶（5-Fluorourac，5-FU）体内外对子宫颈癌的抑制作用。方法用细胞因子从人外周血诱导DCs，MTT法检测DCs激活的CTLs联合5-FU体外对子宫颈癌细胞的抑制作用。皮下接种Hela细胞建立荷瘤裸鼠，实验分为CTLs治疗组、5-FU治疗组、CTLs联合5-FU治疗组，以生理盐水为对照。每3天腹腔注射1次，治疗21天，观察疗效。结果CTLs联合5-FU在体外显著抑制癌细胞生长，其MTT检

2、测结果低于其他实验组（P＜0.01）；在对裸鼠进行治疗的14天、21天，联合治疗组的肿瘤体积、瘤重明显小于其他实验组（P＜0.01）。结论联合应用CTLs及5-FU较单纯使用CTLs或5-FU更有效。【关键词】树突状细胞细胞毒T细胞5-氟尿嘧啶子宫颈癌InhibitiveeffectofCTLsactivedbydendriticcellsandbinedacervicisinvitroandvivo【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheinhibitiveeffectofcytotoxicTlymphocytes（CTLs）activedbyd

3、endriticcells（DCs）andbinedacervicisinvitroandvivo.MethodsCoculturedhumanperipheralblood.ThentheinhibitiveeffectofCTLsactivedbyDCsandbinedacervicisancarcinomacervicisHelamodeliceentresultsofeachgrouporcellseandorofCTLs／5-FUgroupphocytes;5-fluorourac;carcinomacervicis树突状细胞（Dendriticcells,DCs）是

4、机体功能最强的专职抗原提呈细胞，在启动、调节并维持免疫应答中起重要作用［1，2］。本实验观察DCs激活的细胞毒T细胞（CytotoxicTlymphocytes,CTLs）联合5-氟尿嘧啶（5-Fluorourac，5-FU）在裸鼠体内外对子宫颈癌的抑制作用，意欲探索以DCs为基础的肿瘤免疫治疗联合化学治疗的可行性。1材料与方法1.1材料细胞因子（IL-4、GM-CSF）购自Glaco公司；Hela子宫颈癌细胞株购自北京医科大学；雄性BALB／c裸鼠8周龄，l8～20g，清洁型，购自中山医科大学；人外周血购自锦州中心血站。1.2方法1.2.1制备肿瘤抗原粗提物取107个Hela

5、细胞，加入1ml生理盐水，反复冻融3次后稀释到10ml，微孔滤膜过滤，4℃保存备用。1.2.2制备DCs及CTLs分离人外周血单个核细胞，37℃孵育2h后，非贴壁细胞经尼龙毛柱孵育1h后冲洗出T细胞备用。贴壁细胞用含GM-CSF、IL-4的培养基培养，3天加入肿瘤抗原粗提物，7天收集悬浮细胞为DCs。DCs与T细胞按1：20的效靶比培养72h，收集CTLs。1.2.3体外实验以Hela为靶细胞（5000细胞/孔）。实验分四组：CTLs治疗组（5×104/孔）、5-FU治疗组（5mg/L）、联合治疗组（CTLs加5-FU）、对照组（生理盐水）。72h后MTT法检测。1.2.4体内

6、实验皮下注射Hela（2×106/鼠）制备荷瘤鼠，随机分4组，每3天瘤内注射：50μl生理盐水（对照组）、10mg5-FU（5-FU治疗组）、2×105个CTLs（CTLs治疗组）、10mg5-FU加2×105个CTLs（联合治疗组），观察21天，测瘤体积（V=肿瘤最长径×最短径2/2）、瘤重。1.2.5统计学方法应用SPSS11.0软件处理实验数据，所有数据用x±s表示，采用单因素方差分析，P＜0.05为差异有显著性。2结果2.1体外MTT检测结果CTLs加5-FU联合治疗组（0.19±0.05）、CTLs治疗组（0.45±0.07）、5-FU治疗组（0.40±0.06）均低

7、于对照组（1.45±0.06）（P＜0.01）；联合治疗组低于单纯应用CTLs或5-FU治疗组（P＜0.01）。2.2体内实验见表1。表1各组裸鼠治疗后瘤体积及瘤重比较注:a,b,c：分别为CTLs治疗组、5-FU治疗组、联合治疗组与对照组比较。P均＜0.01，差异有显著性；d,e：分别为联合治疗组与CTLs治疗组、5-FU治疗组比较。P均＜0.01，差异有显著性。3讨论子宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一，临床以手术治疗为主。由于其术后五年生存率较低，而且容易复发甚至转移，因此，单一使用一种治