双价抗真菌基因表达载体的构建及转基因西瓜的研究

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1、维普资讯http://www.cqvip.com热带亚热带植物学报2005，13(5)：369—374JournalofTropicalandSubtropicalBotan)双价抗真菌基因表达载体的构建及转基因西瓜的研究张志忠，吴菁华，吕柳新，何承坤(福建农林大学园艺学院，福州350002)摘要：构建了同时含有番茄儿丁质酶基冈(Chi3)和13一l，3一葡聚糖酶基因(Glu-Ac)的双价抗真菌基因植物表达载体，以西瓜(Citrulluslanatth~)子叶块为外植体，采用根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)介导

2、法，将Chi3和Glu-Ac同时导入西瓜栽培种“中育一号”，共获得46株抗性再生植株。经PCR、Southernblot和RT-PCR检测，表明外源基因己成功整合到西瓜基因组中，并在转录水平得到表达。利用尖孢镰刀菌西瓜专化型(Fusariumoxysporurn)对转基因植株进行离体叶片抗病性检测，表明转基因植株对枯萎病的抗性均有不同程度的增强。关键词：几丁质酶基因；B—l，3一葡聚糖酶基因；西瓜；遗传转化；抗病性中图分类号：Q782文献标识码：A文章编号：l005—3395(2005)05—0369—06ConstructionofaPl

3、antExpressionVectorCarryingTwoAntifungalGenesandItsTransfertoWatermelonZHANGZhi—zhong，WUJing—hua，L0Liu—xin，HECheng—kun(CollegeofHorticulture，r4ionAgricuhureandForestryUniversity,Fuzhou350002，China)Abstract：UsingplantbivalentexpressionvectorpCAMBIA1300andpBI121asbasiccompon

4、ents，anewbinaryvectorharboringtomatochitinasegeneChi3andtomato卢一1，3一glucanasegeneGlu-Ac，wasconstructedthroughsequentialrestrictiondigestsandligationsrecombination．ThetwogenesdrivenbyCaMV35spromoterweresuccessfullytransferredintowatermeloncultivars“ZhongYuYiHao”viaAgrobacte

5、rium．mediatedtransformation．SuccessfulintegrationandexpressionofChi3andGIu-AcwereconfirmedbyPCR,SoutheFllblotanalysisandRT—PCR．ThereactionofdetachedleavesoftransgenicplantstoinfectionFusariumoxysporuminfectionWaSexamined．Theresultsindicatedthattransgenicplantsgainedcertain

6、resistance．Keywords：Chitinasegene；B一1，3-glucanasegene；Watermelon；Genetictransformation；Diseaseresistance西瓜(Citrulluslanatus(Thunb．)Mansfeld)是重中可长期存活，防治十分困难，并且由于长期连作要的经济水果，但生产中病害种类繁多，主要有枯及使用农药，客观上筛选了致病力更强的病原突变萎病、炭疽病、蔓枯病、白粉病、霜霉病、疫霉病及病体，致使病害日益猖獗。野生西瓜材料PI296341是毒病等，其中枯萎病是西瓜生产上

7、危害最严重的病目前国际上公认的唯一1份抗枯萎病3个生理小害之一，由尖孢镰刀菌西瓜专化型(Fusarium种的抗源，但农艺与品质性状极差，属饲料西瓜变oxysporumfsp．niveurn(E．F．Smith)Synder&种，不能直接作为育种材料来使用[2]，所以通过常规Hansen)侵染所致【”。该病属土传病害，病菌在土壤育种方法获得稳定抗病的品种较为困难。近年来，收稿日期：2005—03—11接受日期：2005—06—20基金项目：福建省自然科学基金项目(B0510017)资助通讯作者Correspondingauthor维普资讯ht

8、tp://www.cqvip.com370热带亚热带植物学报第l3卷植物抗真菌病害基因工程的迅速发展为解决这一菌介导法导入西瓜，成功获得了一批抗病性增强的问题带来了希望。目前最常