349例乳腺癌her―2基因扩增和蛋白表达相关性探究

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1、349例乳腺癌HER-2基因扩增和蛋白表达相关性探究［摘要］目的了解乳腺癌组织中人表皮生长因子受体2(HER-2)基因扩增与Her-2/neu蛋白表达的一致性与相关性。方法采用荧光原位杂交(FISH)法及免疫组化(IHC)法分别检测349例浸润性乳腺癌患者的HER-2基因扩增与蛋白表达情况，分析二者检测结果的一致性与相关性。结果FISH与IHC符合率为55.3%,结果存在一致性(Kappa=O.189,P=0.000),呈正相关(r=0.434,P=0.000)。结论FISH与IHC两种检测结果存在一致性，但IHC(+〜+++)患者均应以FISH检测作为评价

2、HER-2基因是否扩增的标准方法。［关键词］乳腺癌；人表皮生长因子受体-2；荧光原位杂交；免疫组织化学［中图分类号］R737.9［文献标识码］A［文章编号］2095-0616(2013)20-16-03人表皮生长因子受体-2(HER-2)基因扩增与蛋白的过度表达提示该患者的内分泌治疗效果差，而应用曲妥珠单抗敏感性好［1-2］o目前指导临床治疗的常规检测方法为免疫组织化学(IHC)法和荧光原位杂交(FISH)法。本资料主要探讨IHC法HER-2蛋白表达与FISH法HER-2基因扩增的一致性与相关性，为临床应用曲妥珠单抗等药物提供参考。1资料与方法1.1一般资料

3、2010年11月〜2013年3月在泸州医学院附属医院病理科及2010年10月〜2012年11月在四川省德阳市人民医院病理科进行IHC与FISH检测的349例患者，石蜡切片分别用于IHC与FISH检测。1.2试剂与探针IHC检测使用基因科技（上海）有限公司抗体，ER克隆号：SP1；PR克隆号：SP2：erbB-2多克隆抗体；Ki-67克隆号：MIB-I.FISH,检测使用北京金普嘉公司HER-2基因扩增试剂盒。1.3方法1.3.1IHC技术采用免疫组化envision法进行检测，Her-2蛋白棕色阳性定位于细胞膜。1.3.2FISH技术按北京金普嘉公司Her-

4、2基因扩增试剂盒说明书操作：（1）标本要求：2年以内的浸润性乳腺癌患者的石蜡包埋组织切片。新鲜标本取下后lh内放入10%中性福尔马林固定，用量为组织块的10倍以上，固定时间为6〜48h；（2）老化玻片：切片厚3?m,置于干净的涂胶玻片，65工烘烤过夜。（3）切片处理：常规脱蜡复水；高压锅抗原修复3min,冷却4min；37°C2XSSC液5min漂洗两次;37°C胃蛋白酶溶液（5?g/mL）+0.01mol/LHCL消化10〜18min；37°C2XSSC液漂洗5min两次；乙醇梯度脱水后自然干燥玻片。(4)变性杂交：滴加10?L探针混合液覆盖组织，封片胶封

5、闭盖玻片，于杂交仪中83£变性8min,42°C杂交16ho(5)洗涤、判读：取出切片后去除封片胶，室温下于2XSSC液中浸泡使盖玻片自然脱落；46°C2XSSC漂洗lOmin；46°C0.1%NP4O漂洗5min；室温70%乙醇浸泡4min；暗处自然干燥玻片后加10?LDAPI覆盖杂交区域并盖上盖玻片，暗处放置10〜20min后荧光显微镜下观察。1.4结果判定标准1.4.1IHC结果判定无着色者为(❷)；任何比例的浸润癌细胞呈微弱、不完整的细胞膜着色者为(+);>10%的浸润癌细胞呈微弱至中等强度、完整但不均匀的细胞膜棕黄着色者，或30%的浸润癌细胞呈现强

6、的、完整的细胞膜棕褐着色者为(+++)［3］。1.4.2FISH结果判定(1)浸润癌区肿瘤细胞Her-2红信号明显成簇成团，判定为簇状扩增；(2)若不同于(1)的情况，计数30个细胞并计算Her-2红信号与着丝粒绿信号之比值，Ratio2.2为阳性；Ratio介于1.8〜2.2之间时,增加计数细胞至100,若比值仍不变则判断为不确定［4］。1.5统计学方法用SPSS11.5统计学分析软件分析，两种方法检测结果的一致性采用Kappa检验，P本研究中，349例浸润性乳腺癌标本的FISH检测结果显示HER-2基因扩增率为28.08%(98/349),与某些国外报道

7、基本一致［9-10］。IHC检测HER-2蛋白状态为(-/+)时，FISH检测HER-2基因扩增率为4.76%(5/105),两者符合性较好，与大多数文献报道一致［4,11］,提示IHC(-/+)时也应进一步行FISH检测进行筛查，避免遗漏部分HER-2蛋白状态为(-/+)但其HER-2基因扩增者的治疗；IHC(++)时的FISH检测HER-2基因扩增率为29.59%(50/169),与HebaAL-Khattabi［12］、李慧慧等［13］的报道相近，显示IHC(卄)者应常规进行FISH检测，才能更加准确地指导临床选择治疗方案；IHC(+++)时FISH检

8、测HER-2基因扩增率为57.33%(43/75)，