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《表观遗传修饰在大鼠bmscs向bsmcs分化中调控机制的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、表观遗传修饰在大鼠BMSCs向BSMCs分化中调控机制的研究徐梦遥，王延洲，徐惠成(400038重庆，第三军医大学西南医院妇产科)、(国家自然科学基金青年科学基金，项目编号30801234)[摘要]目的通过骨髓间充质干细胞(bonemarrowmesenchymalstemcells,BMSCs)与膀胱平滑肌细胞(bladdersmoothmusclecells,BSMCs)接触共培养探讨组蛋白乙酰化对BMSCs分化能力的影响。方法 分别采用密度梯度离心法和胶原酶消化法培养大鼠BMSCs及BSMCs至第3代，并对BMSCs进行了鉴定；以单独培养的B
2、MSCs作为对照组，接触共培养的BMSCs为实验组；运用免疫荧光化学染色法分别对2组BMSCs中的平滑肌标志性蛋白平滑肌α肌动蛋白(α-smoothmuscleactin,α-SMA)、平滑肌肌球蛋白重链(smoothmuscle-myosinheavychain,SM-MHC)、calponin进行检测，并用微球菌核酸酶(MicrococcalNuclease)对平滑肌三个标志性基因的启动子区进行了染色质开放性的检测，同时运用了ChIP技术分析了α-SMA、SM-MHC启动子区组蛋白乙酰化水平对BMSCs向平滑肌分化的影响。结果 大鼠原代BMSC
3、s流式检测显示CD29表达阳性,阳性率分别为99.8%；CD31、CD45表达阴性，阳性率为6.30%、1.04%；免疫荧光显示平滑肌3种标志性蛋白的表达均随时间的延长而增加；MNase显示实验组的BMSCs启动子区染色质对核酸酶的敏感性明显高于对照组，ChIP显示实验组中BMSCs平滑肌标志性基因α-SMA、SM-MHC、Calponin启动子区H4乙酰化水平较未分化前明显增加(P<0.05)。结论组蛋白乙酰化程度的增加促进了BMSCs向BSMCs分化。[关键词] 骨髓间充质干细胞;膀胱平滑肌细胞;组蛋白乙酰化;启动子Theregulatorym
4、echanismofepigeneticmodificationondifferentiationofratbonemarrowmesenchymalstemcellstosmoothmusclecellsXuMengyao,WangYanzhou,XuHuicheng(DepartmentofGynecologyandObstetricsSouthwestHospitalThridMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400038China)[Abstract]ObjectiveMesenchymalstemcel
5、lsinthebonemarrow(bonemarrowmesenchymalstemcells,BMSCs)andbladdersmoothmusclecells(bladdersmoothmusclecells,BSMCs)coculturehistoneacetylationBMSCsdifferentiationcapacity.Method:Densitygradientcentrifugtionandcollagenasedigestionmethodwereusedtotraintherats'BMSCsandBSMCstothe3r
6、dgeneration,andidentifytheBMSCs.BMSCsculturedaloneasthecontrolgroup,whichcontactstheco-culturedBMSCsfortheexperimentalgroup.UsingimmunefluorescencestainingonthesmoothmuscleofthetwogroupswhichisBMSCslandmarkproteinonthesmoothmuscleαactin(α-smoothmuscleactin,α-SMA)andsmoothmuscl
7、emyosinheavychain(smoothmuscle-myosinheavychain,SM-MHC)whichwillbedetected,andthepromoterregionsofthethreemarkergenesinsmoothmusclewithmicrococcalnuclease(MicrococcalNuclease)chromatinopenadetection,whiletheuseofChIPtechnicalanalysisofα-SMA,SM-MHCthepromoterregionsofgroupprote
8、inacetylationlevelsofBMSCstosmoothmuscledifferentiation.Resul
