mir-21调控大鼠bmscs向肌成纤维细胞分化的机制研究

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1、上海交通大学SHANGHAIJIAOTONGUNIVERSITY硕士学位论文MASTER'STHESISmiR-21调控大鼠BMSCs向肌成纤维细胞分化的机制研究THEEFFECTANDMECHANISMOFMIR-21INMYOFIBROBLASTDIFFERENTIATIONOFRATBONEMESENCHYMALSTROMALCELLS作者姓名：付水霆指导老师：何悦教授学科：口腔临床医学（口腔颌面外科）答辩日期：2015年4月miR-21调控大鼠BMSCs向肌成纤维细胞分化的机制研究研究生：付水霆导师：何悦教授导师组成员：郭伟教授张萍研究员王延安副教授专业：口腔临床

2、医学（口腔颌面外科）学号：1127239421申请学位级别：硕士学位答辩日期：2015年4月培养单位：上海交通大学附属第九人民医院资助基金项目：国家自然基金面上项目(编号：81271112)上海市人才发展资金(编号：201312)上海交通大学晨星计划A类上海交通大学学位论文原创性声明在导师的指导下，独呈交的学位论文，是本人本人郑重声明：所引用的内容外，本论立进行研巧工作所取得的成果。除文中己经注明文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文已在文中Ｗ明确方式标明。本的研究做出重要贡献的个人和集体，巧人完全意识到本声明的法律结果由本人

3、承担。｜＾／学位论文作者签名：弓守＾日期；年Ｓ月１日上海交通大学学位论文版权使用授权书，本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定同意学校保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，论文的允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可Ｗ将本学位、全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可Ｗ采用影印缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。。保密□，在年解密后适用本授权书＿本学位论文属于不保密口。＂＂（请在上方框内打Ｖ）学位论文作者签名：指导教师签名：ｔ＾月曰曰期：＞４ｔ月曰曰期＾〇＂章

4、夕年技／／＞上海交通大学医学院硕士学位论文miR-21调控大鼠BMSCs向肌成纤维细胞分化的机制研究摘要研究报导放疗诱导的纤维萎缩机制在放射性颌骨坏死中起重要作用，但具体的调控机制尚不明确。通过多种纤维化疾病研究的文献发现miR-21与TGF-β1在纤维化过程中参与调控作用，因此本实验通过研究大鼠骨髓间充质细胞向肌成纤维细胞分化的过程，探讨miR-21是否调控了TGF-β1对大鼠骨髓间充质细胞向肌成纤维细胞的诱导分化过程。此研究有望深入阐述放射性颌骨坏死中颌骨纤维萎缩机制的具体调控机制，为进一步治疗和预防提供新靶点。目的：检测TGF-β1诱导大鼠BMSCs成纤维细胞

5、和肌成纤维细胞分化过程中miR-21的基因表达，同时探讨miR-21在体外大鼠BMSCs成纤维细胞分化过程中的调控作用。为治疗颌骨纤维化提供了一个新的靶点。方法：1.原代获得大鼠骨髓间充质细胞，并进行分离纯化培养。并用一定浓度的TGF-β1对大鼠骨髓间充质细胞向肌成纤维细胞进行诱导分化。2.Real-timePCR检测大鼠骨髓间充质细胞向肌成纤维细胞诱导过程中miR-21基因表达水平差异。3.利用miR-21基因模拟物mimics上海交通大学医学院硕士学位论文和inhibitor对大鼠骨髓间充质细胞进行转染，使其过表达或者下调，Real-timePCR和Westernbl

6、ot检测肌成纤维细胞的相关基因和蛋白α-SMA的表达，观察miR-21对大鼠骨髓间充质细胞的生物学影响。3.miR-21基因的mimics模拟物转染大鼠骨髓间充质细胞后，加入一定浓度的TGF-β1，Westernblot和免疫细胞化学法检测肌成纤维细胞的相关蛋白α-SMA的表达，从而明确miR-21对大鼠骨髓间充质细胞向肌成纤维细胞的调控作用是否与TGF-β1通路相关。结果：本实验发现一定浓度的TGF-β1可以诱导大鼠骨髓间充质细胞向肌成纤维细胞分化，在此过程中miR-21基因的表达上调，并且具有时间依赖性和剂量依赖性。一定浓度的TGF-β1处理后miR-21表达升高且在

7、处理后的48h表达量达到最高峰值。当TGF-β1的浓度为5ng/ml时，miR-21的表达最高。人工合成的miR-21mimics转染至大鼠BMSCs后能够有效提高miR-21表达量从而促进了细胞α-SMA基因和蛋白的表达，而人工合成的miR-21inhibitor转染后能够有效下调miR-21表达量从而降低了细胞α-SMA基因和蛋白的表达；miR-21mimics增加了TGF-β1刺激大鼠BMSCs向肌成纤维细胞分化的作用，表明miR-21为促纤维化的基因。上海交通大学医学院硕士学位论文结论：本研究发现，miR-21能够正调