mir—182基因表达和肺癌相关性探究

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1、miR—182基因表达和肺癌相关性探究［摘要］目的分析肺癌局部miR-182的表达水平，考察其与肺癌临床特征的相关性。方法选取2012年3月〜2013年5月在我科住院并行手术治疗的非小细胞肺癌患者62例，分离肿瘤组织并提取miR-182,RTPCR方法检测miR-182的表达水平，分析其肺癌临床病例特征之间的相关性。结果miR-182在不同年龄和性别的患者中表达没有差异（P>0.05）；miR-182在肺癌组织中的表达与浸润程度、淋巴结转移、远处转移和肿瘤分期具有明显的相关性（P0.05）o1.2试剂miRCutemiRNA提取分离试剂盒、Re

2、alMasterMixProbe试剂盒（天根公司），5XReverseTanscriptaseM-MLVBuffer,dNTPMixture（大连宝生物公司），引物和探针均由上海闪晶公司设计并合成。miR-182、U6上游引物购至上海生工生物工程有限公司。1.3RT-PCR组织中总RNA提取：取-80°C保存的组织，切成薄片,用液氮研磨法磨成粉末，用天根公司miRCutemiRNA提取分离试剂盒（离心柱型）按说明书操作提取总miRNAo用紫外分光光度仪检测RNA溶液A260/280nm比值，计算RNA浓度和纯度，取A260/280nm比值在1.

3、8〜2.1者用于进一步实验。逆转录后，加入miR-182或内参U6探针等，置于荧光定量PCR上进行PCR扩增。以2-AACt方法计算miR-182的相对表达量［5］。1.4统计学分析采用SPSS16.0软件包进行，计量资料采用(x±s)表示，两两均数比较采用t检验，多组均数比较用单因素方差分析，P0.05)；肺癌男女患者之间miR-182没有统计学差异(P>0.05)；miR-182在肺癌组织中的表达与浸润程度、淋巴结转移、远处转移和肿瘤分期具有明显的相关性(P肺癌位居世界癌症死因之首，肺癌的发生也是一个极其复杂的过程。大多数肺癌均起源于支气管

4、粘膜上皮，主要包括鳞状细胞癌、小细胞癌、腺癌、大细胞癌四种基本类型。研究表明，has-miR-155的高表达和has-let-7a-2的低表达可能会降低肺腺癌患者的存活率［7］。还有研究人员对112个NSCLC病患的miRNA表达数据进行检测分析，发现has-miR-221和has-let-7a对于肺癌患者具有保护作用，而has-miR-137、has-miR-372、has-miR-182则会对预后有不良的影响［8］o目前文献报道的与肺癌关系比较密切的miRNA有miRNA-126、miRNA-221、miRNA-222、has-miR-22

5、1、miR-17-92簇、miRNA-128b、has-miR-137、has-miRT82、has-miR-372及miRNA-let7家族成员等［9］。目前，关于miR-182在恶性肿瘤中的表达及其发挥的作用尚不明了，甚至有矛盾之处。miR-182通过下调肿瘤调控基因BRCA1的表达来影响DNA的修复，进而影响乳腺癌的治疗。而有研究显示，miR-182高表达的ER+乳腺癌患者，对内分泌治疗敏感，无复发，生存期长，且miR-182与淋巴结转移呈负相关，这可能是由于miR-182在不同的肿瘤中靶基因可能并不完全相同，而其下游靶基因的生物学效应决

6、定了miR-182的作用[10]o同时miR-182在肿瘤中检测结果不一致的原因也可能是由于miRNA的表达具有时序性、组织特异性。本研究发现，miR-182可显著表达于肺癌患者肿瘤部位,其表达量在患者年龄和性别之间没有统计学差异；而伴随着肺癌的发展，浸润程度（T）、淋巴结转移（N）、远处转移（M）的发生，miR-182的表达呈现正相关，癌症分期水平越高而miR-182表达量也逐步增加，这些实验结果都表达miR-182在肺癌中的表达扮演了一个负面的作用，这与运用Cox比例风险回归对157个miRNA表达进行分析has-mir-182是危险性的m

7、iRNA取得的结果相似，其可能与在乳腺癌中扮演同样的机制，通过调控基因BRCA1的表达来影响DNA的修复，进而影响肺癌的进程，亦有文献报道将mir-182前体has-mir-182转染入低侵袭性的肺癌细胞系中，肺癌细胞系渗入基质胶膜的侵袭性增强，肺癌患者miR-182表达增加会导致肺癌细胞侵袭力增强。此外，肺癌鳞癌和腺癌中miR-182表达量虽有不同，但其不同分期癌症表达趋势相同，这可能与不同类型肺癌的组织细胞的敏感性有关。综上述，本研究发现miR-182在肺癌患者组织中表达水平上调，且与肺癌临床病理特征密切相关，局部组织的miR-182有可能

8、成为新一代的肺癌肿瘤标志物，并可用于肺癌的临床诊断，具有较好的临床应用前景。［参考文献］［1］杨健，张秀伟，文昱婷，等.miR-155在非小细胞肺癌患