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1、六月青多糖对酒精所致小鼠急性肝损伤的保护作用黄氏黄莎黄建春葛文漪陈兆霓黄仁彬(通讯作者)(广西医科大学药理学教研室530021)【摘要】目的：研究六月青多糖的提取工艺与六月青多糖对酒精(Alcohol)所致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法：以酒精灌胃小鼠，建立急性酒精性肝损伤模型，LYQPS灌胃给药，检测小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT),天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性以及肝组织中超氧化歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的活性与谷胱甘肽(GSH)的含量，观察光镜下肝组织的病理变化。结果：LYQPS降低ALT,AST的活性(P
2、<0.01或P<0.05),LYQPS降低GSH的含量(P<0.01),升高GSH-PX,SOD的活性，能够减轻肝细胞损伤程度。结论：六月青对酒精致小鼠急性肝损伤有一定的保护作用。【关键词】六月青多糖有效部位急性肝损伤酒精【中图分类号】R965【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2013)11-0048-03酒精性肝病(AlcoholicHepatis)是由长期大量饮酒导致的肝脏疾病，是我国常见的肝脏疾病之一，严重危害人民健康［1］。因此酒精性肝病的防治已成为医学上的一个重要课题。木研究以56度白酒造模，以六月青多
3、糖为治疗剂研究六月青多糖对酒精急性肝损伤的保护作用。1•材料1丄药材：六月青采于广西灵山县，经广西中医药研究院赖茂祥研究员鉴定。1.2.动物：昆明小鼠，SPS级,雄性，体重(20±2)g,由广西医科大学实验动物中心提供，实验动物牛产许可证：CKKG(桂)2003-0003,实验动物使用许可证YKG(桂)2009-0002o13试齐I」：北京二锅头；丙氨酸转氨酶(ALT),天冬氨酸转氨酶(AST),超氧化物歧化酶（SOD）,谷胱甘肽（GSH）,谷胱甘肽过氧化物酶（GSH・PX）,试剂盒均购自南京建成生物研究所。1.4.仪器：Spac
4、trumlab722SP型分光光度计，上海精密科学有限公司；TDL・5A菲恰尔离心机；不透钢电热恒温水浴锅；R-1001N型旋转蒸发仪；RE-5210型旋转蒸发器；SHB・3循环水式多用真空干燥器。SHB循环水式真空泵;电热鼓风干燥箱ZRD-5210;电热鼓风干燥箱101-1,真空干燥箱DZF-300;超纯水制造系统CD-UPH-2-20L;数控超声波清洗器KQ-500DB;2.方法2丄六月青多糖的提取制备：取干燥的六月青，加入8倍量热蒸惚水，浸泡过夜，80°C煎煮2小吋,共煎煮3次。合并提取液，用旋转蒸发仪浓缩至每毫升提取液约为0.5g生药（
5、即0.5g生药/ml）。所得浓缩液加入六倍量无水乙醇，至4°C冰箱中静置过夜。次日将提取液及沉淀以4000rpm,离心15min。离心后用布氏漏斗抽滤，取沉淀物。所得沉淀物为六月青多糖。2.2•动物分组及模型制备：取昆明小鼠按体重随机分为5组，每组12只。正常对照组，洒精模型组，联苯双酯组,（150mg/kg）,LYQPS高、低剂量组，各组剂量分为2.5g/kg,0.625g/kgo每日上午把酒精模型组,联苯双酯组,LYQPS高，低剂量组小鼠分别按10mg/kg剂量灌胃56度白酒一次，正常对照组给小鼠喂水和饲料,每日下午把联苯双酯组,LYQPS
6、高,低剂量组小鼠分别按10mg/kg分别灌胃给药,模型组给予等体积生理盐水，连续10天，末次给药后，禁食不禁水，16h处死小鼠，采血和肝组织样品，分离血清。2.3.血精生化指标的测定：摘除小鼠眼球取血，将凝固的血液于4000rpm,4°C离心15分钟，分离血清。按各试剂盒说明书的要求测定血清中的ALT,ASTo2.3.肝组织生化的测定：选取肝脏右叶用4°C生理盐水漂洗去除积血，滤纸拭净后称重，加适量4°C生理盐水，制备10%肝匀浆，于4000rpm,4°C离心lOmin,去上清。肝组织蛋白含量测定考马斯亮蓝法。分别按试剂盒说明测定SOD,GSH
7、,GSH-PX水平。2.5•统计学分析：应用SPSS16.0软件进行统计学处理，剂量资料均采用表示，多组均数比较采用方差分析，组间差异的显著性采用t检验。计数资料采用秩和检验，a=0.05为显著性检验水准。26肝病理组织学检查：小鼠取血后，腹部做环形切口，暴露门静脉及下腔静脉，用针头自门静脉远端刺入约1.0cm左右，用4°C肝素化的生理盐水经肝门静脉冲洗肝脏，待肝脏充盈变白后剪断下腔静脉。观察肝脏颜色并检查有无凝血，颜色均匀变淡，无凝血者继续实验，持续冲洗人约3min至肝脏颜色渐白。在整个灌流的过程中，间歇压迫下腔静脉使肝脏膨胀与冋缩交替，以利
8、于肝脏与灌流液充分接触。冲洗完成后取肝左叶相同部分，切成厚度约2mm的组织块，置于4°C10%甲醛固定液中过夜、脱水、透明、石蜡包埋，常规切片，片厚5
