透明颤菌血红蛋白基因在啤酒酵母as2.346中表达

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1、关于学位论文独立完成和内容创新的声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得任何教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：觯字日期：川，年f月心日学位论文版权使用授权书论文《透明颤菌血红蛋白基因在啤酒酵母As2．346中的表达》系剑药工程学院丝生物鱼生丝药堂专业奎瞳盘(作者姓名)在沈阳药科大学攻读博士口／硕士回学位而完成的作品。本学位

2、论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权沈阳药科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于1、保密口，在口三年／口五／——年解密后适用本授权书。2、不保密团。(请在以上相应方框内打“4”)日期：硎石年多月心目日期：耐年，月ll"-Et沈阳药科大学硕：L学位论文中文摘要摘要本文首次把透明颤菌血红蛋白基因(哟)引入啤酒酵母As2．346中，用于提高左炔诺孕酮中间体在啤酒

3、酵母As2．346中的转化率。透明颤菌血红蛋白能在分子水平上提高菌体对氧气的利用能力，增加菌体中的溶氧量。筛选啤酒酵母As2．346敏感的抗性标记，确定甲醛为抗性标记。筛选在啤酒酵母As2．346中稳定存在的质粒类型。经过实验验证，YCp型质粒是在啤酒酵母As2．346中稳定存在的类型。构建了含有vgb基因和甲醛抗性基因的质粒pSPUVl29。建立起对啤酒酵母As2．346菌株有效的转化方法——乙酸锂转化法，并将pSPUVl29转入啤酒酵母As2．346中。通过PCR特异性扩增和点杂交双重验证表明：获得了含有vgb基因的啤酒酵母As2．346转化子。

4、在发酵实验中，通过对v曲基因转化子和对照菌的菌体浓度和左炔诺孕酮中间体转化率的考察表明：咖基因在啤酒酵母As2．346中得到了表达。考察48小时之内，呦基因转化予和对照菌的菌体浓度变化：无论在富氧条件下还是贫氧条件下，vgb基因转化予菌体浓度均高于对照菌菌体浓度。1劝基因转化子左炔诺孕酮中间体转化率比对照菌左炔诺孕酮中问体转化率有显著提高：富氧条件下，对照菌左炔诺孕酮中间体转化率为48．31％，vgb基因转化子左炔诺孕酮中间体转化率为73．67％，提高近1．53倍；贫氧条件下，对照菌左炔诺孕酮中间体转化率几乎为O％，而嘴6基因转化予左炔诺孕酮中问体转

5、化率为6060％。实验结果表明了：ugh基因的转入在分子水平上提高了菌体的溶氧能力，有效地促进了啤洒酵母As2．346的生长，进而提高了左炔诺孕酮中间体转化率。关键字：啤洒酵母As2．346，透明颤菌血红蛋白基因(vgb)，左炔诺孕酮中间体，转化沈阳药科大学硕士学位论文ABSTRACrABSTRACTInordertolncreasethetransformationefficiencyoftheintermediateoflevonorgestrel．whichisaover-the—counterdrugcurrentlyoftenusedinc

6、ontraception，Vitreoscillahemoglobingene(vgb)wastransformedintoS．cerevisiaeAs2．346．ScerevisiaeAs2．346isaindustrialstrainoftheintermediateoflevonorgestrel．Vitreoscillahemoglobingene(vgb)encodesldtreoscillaHemoglibin(VHb)whichhasthefunctionoftrappingextracellularoxygentoinside．Whi

7、chtypeoftheplasmidandtheresistancelabellingfittoS．cerevisiaeAs2．346istheproblem．Throughtheexperiments，wefoundS．cerevisiaeAs2．346wassensitivetotheformaldehyde．ThattheYCpplasmidcansteadilyreplicateinS．cerevisiaeAs2．346wasalsoproved，RecombinantplasmidpSPUVl29carryingvgbgeneandform

8、aldehyderesistancewasconstructedandtransformedintoS．ce