透明颤菌血红蛋白基因和λ噬菌体裂解基因在产聚羟基烷酸重组大肠杆菌中作用的研究

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1、分类号：单位代码：10019密级：学号：S01381硕士学位论文透明颤菌血红蛋白基因和λ噬菌体裂解基因在产聚羟基烷酸重组大肠杆菌中作用的研究StudyonVitreoscillaHemoglobinGeneandPhageλLysisGenesinRecombinantEscherichiacoliStrainProducingPolyhydroxyalkanoates研究生：李莉莉指导教师：田杰生副教授申请学位门类级别：理学硕士专业名称：微生物学研究方向：细菌代谢工程所在学院：生物学院2004年6月独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指

2、导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解中国农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文

3、的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日摘要由于透明颤菌血红蛋白基因（vhb）在质粒上高拷贝的表达，降低了PHB的产量。故本文将vhb基因插入到E.coliHMS174的染色体上，构建成为vhb基因整合菌HV，并用CO结合实验证实了血红蛋白的表达。在摇瓶中培养，发现在培养前期，HV的生长与无vhb基因的对照菌E.coliHMS174相差不多，到培养后期时，vhb基因整合菌HV才略有生长优势。将带有phb操纵子和质粒稳定分配基因parDE的质粒pTZ101引入vhb整合菌中，构建成为产P

4、HB的vhb整合菌HV(pTZ101)。摇瓶中培养40小时，OD600和PHB的含量均比无vhb基因的对照菌E.coliHMS174(pTZ101)高。5-L发酵罐发酵HV(pTZ101)，OD600为50，PHB占干重的47.3％；发酵E.coliHMS174(pTZ101)，OD600为172，PHB占干重的62.4％。-利用PCR扩增得到噬菌体裂解基因的启动子和结构基因（SRRz），连接在转座子miniTn5上，-构建成为质粒MVPS，用于将vhb基因和SRRz基因共同插入到E.coliHMS174的染色体上。对E.coliCC118/λρ

5、ir（MVPS）进行裂解实验，但是没有成功。关键词：聚β-羟基丁酸，透明颤菌血红蛋白基因，λ噬菌体裂解基因IAbstractThestraincontainingthehigh-copyplasmidwiththeVHbgenehadlowproductionofpoly-β-hydroxybutyrate.ThestrainHVintegratedtheVHbgeneintothechromosomeofE.coliHMS174wasconstructed.TheVHbexpressioninthestrainHVwasinvestigated

6、byCO-bindingassay.Inflaskculture,thestrainHVhadalmostcelldensitiescomparedwithE.coliHMS174intheearlyphaseofthegrowth.However,inthelatephaseofthegrowth,thestrainHVgrewalittlefasterthanE.coliHMS174.HV(pTZ101)wasconstructedbytheplasmidcontainingthephboperonandtheparDEgenetansfor

7、medintothestrainHV.Inflaskculturefor40hours,thefinalOD600andthepoly-β-hydroxybutyrateconcentrationofHV(pTZ101)weremorethanE.coliHMS174(pTZ101)notcontainingtheVHbgene.Infeed-bachculturefor30hoursin5Lautomaticfermentor,thefinalOD600andthepoly-β-hydroxybutyrateconcentrationofHV(

8、pTZ101)were50and47.3%,respectively.ThefinalOD600andthepoly-β-hydroxy