体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的实验研究

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1、大连医科大学学报2014年第36卷第1期(JournalofDalianMedicalUniversity2014．Vol．36No．1)7基础医学doi:10．11724/jdmu．2014．01．02体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的实验研究李双月，王哲敏，陈若霖，戚媛，刘爽，朴丰源(大连医科大学劳动卫生与环境卫生学教研室，辽宁大连116044)［摘要］目的对大鼠骨髓间充质干细胞(bonemarrowmesenchymalstemcells，BMSCs)进行分离、培养与鉴定，并探讨全反式维甲酸(retinoicacid，

2、ＲA)、碱性成纤维细胞生长因子(fibroblastgrowthfactor，basic，bFGF)和表皮生长因子(epidermalgrowthfactor，EGF)联合诱导BMSCs分化为神经细胞的可行性。方法全骨髓贴壁法分离培养BMSCs，观察细胞形态及生长增殖情况;流式鉴定细胞表面标志物CD29、CD34、CD90;选用第3代细胞，经ＲA、bF-GF和EGF联合诱导后，细胞免疫化学染色检测神经细胞标志物神经元特异性烯醇化酶(neuronspecificenolasen，NSE)的表达。结果体外培养的BMSCs呈成纤维细胞样，第

3、3、4、5代BMSCs的生长曲线均呈S形，活性无明显差异。BMSCs的均一性较好，第3代细胞CD29、CD90阳性率均在90%以上，而CD34阳性率仅为0．58%;BMSCs经诱导后分化为神经细胞，并表达神经细胞标志NSE。结论成功建立BMSCs的体外培养体系，所得细胞纯度高、生物学特征稳定，并可诱导分化为神经细胞，为移植治疗神经系统损伤提供实验基础。［关键词］骨髓间充质干细胞;神经细胞;分化;诱导;培养［中图分类号］Ｒ322．2［文献标志码］A文章编号:1671－7295(2014)01－0007－04［引用本文］李双月，王哲敏，陈

4、若霖，等．体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的实验研究［J］．大连医科大学学报，2014，36(1):7－10．Neuron－likecellsdifferentiatedfromratmesenchymalstemcellsinvitroLIShuang－yue，WANGZhe－min，CHENＲuo－lin，QI－Yuan，LIUShuang，PIAOFeng－yuan(DepartmentofOccupationalandEnvironmentalHealth，DalianMedicalUniversity，Dalian

5、116044，China)［Abstract］ObjectiveToisolateandcultureratbonemarrowmesenchymalstemcells(BMSCs)andinducethemdifferen-tiatetoneuralcells．MethodsBMSCswereisolatedfromratsbywallstickingmethod．Thenthecellswereidentifiedwithmorphology，proliferationandthesurfacemarkers．Neuron－lik

6、ecellsfromBMSCswereinducedbythecombinationofret-inoicacid(ＲA)，fibroblastgrowthfactor，basic(bFGF)andepidermalgrowthfactor(EGF)，andtheirneuronspecificeno-lasen(NSE)weredetectedbyNSEimmunohistochemistry．ＲesultsCulturedBMSCslikefibroblast－shapedinvitro．thGrowthcurvesofthe3r

7、d，4and5th－generationBMSCsandtheiractivitieswerenotsignificantlydifferent．FCMdetectedthatCD29andCD90werepositivelyexpressed，butCD34wasnegativelyexpressed．TheinducedBMSCsshowedneuron－likemorphologyandexpressedNSE，theneuronmarker．ConclusionWehaveestablishedanefficientandst

8、eadymethodtoobtainBMSCs．BMSCscoulddifferentiatedintoneuronswhichwasanidealsourceforclinicalcelltransplantation