内皮祖细胞对神经干细胞增殖分化及notch信号分子表达的影响

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1、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名(手写蝴签字日期溯年石月1日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本

2、人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名c手写)赫巾翮签名c手瓢签字日期：城年6月／Et签字日期：。2’-时年多月∥El学位论文作者毕业后去向：工作单位：通讯地址：电话：邮编：第1章引言自1992年Reynolds等成功地从成年鼠脑纹状体中分离得具有自我复制能力和多分化潜能的NSCs后⋯，近年来对NSCs的研究已成为当今生命科学领域的研究热点。对NSCs的研究不仅有助于了解神经系统的发育、神

3、经疾病的发生和神经损伤后的修复，同时为NSCs移植、基因治疗和利用内源性NSCs治疗中枢神经系统疾病开辟了一条全新的研究途径。研究已证实，NSCs是一种终生具有自我更新能力的细胞，在特定条件诱导下，能够向特定类型神经元或神经胶质细胞分化嵋。。故而NSCs对中枢神经系统疾病造成的神经缺损的修复具有巨大的潜能及临床治疗的实用价值。目前对于NSCs的分离、培养和纯化已有较成熟的技术，而NSCs的增殖及定向诱导分化，则主要通过生长因子诱导、基因调控及信号传导通路等进行调控。已知多种细胞因子参与NSCs诱导分化，如神经生长因子(NGF

4、)、碱性成纤维因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、胰岛素样生长因子-I(IGF-1)、NKIP、白血病抑制因子(LIF)瞄1u等。基因调控对NSCs在体内沿既定的路线增殖发育成各种神经细胞也起着重要作用，已发现的调控基因有抑癌基因PTEN、numb、Npml、Bcl-2及Septamer基因等[12，13]。同样，信号传导通路如Notch、Noggin、Wnt、Shh、Nf-KB和MAPK等多种信号通路的调控对NSCs的增殖与分化也具有非常的重要作用u}驯，

5、但其调控方面仍缺乏精确具体的认识。目前有关NSCs增殖分化的信号调控机制的研究中，Notch信号传导途径研究较多，其已被证实对NSCs增殖分化起非常重要的作用。多数学者认为Notch信号系统的作用是通过“旁侧抑制"实现的，激活的Notch信号系统是干细胞分化的抑制性通路，即当Notch被激活时，Notch与其配体结合，干细胞进行增殖；而Notch信号系统活性被抑制时，干细胞进入分化程序，发育分化为功能细胞u”。研究表明，在Notch信号通路中，Mash-1、Neurogenin等基因，在神经系统的发生中起重要的调节作用¨仉趴

6、。。血供及神经功能的恢复是缺血性脑损伤治疗的两个主要目标，其中血供的恢复是神经功能恢复的基础比。叫钊。EFCs的发现为缺血区的血管重建及血供的恢复带来希望。特别是EPCs还可以诱导内源性NSCs迁入缺血区参与神经功能的修复，而且EPCs分化后的内皮细胞可以产生一个特殊的血管性微环境，进而影第1章引言响NSCs的增殖、分化及分裂周期坦5’拍1。但EPCs与NSCs的相互作用的具体机制仍有待进一步阐明。通过分析我们前期对骨髓间充质细胞及NSCs深入研究所取得的结果，我们推测EPCs很有可能是通过分泌各种生长因子如VEGF、EGF

7、等来调控NSCs的增殖及分化。本实验拟采用transwell混合培养板模拟体内的微环境，将EPCs与NSCs以不同方式混合培养，探讨EPCs在促进NSCs的增殖分化中的重要作用，以及这种作用是否与notch信号通路有关，以达到进一步明确NSCs增殖、分化的信号分子调控机理的目的。．2第2章材料与方法2．1实验材料2．1．1实验动物健康成年BALB／C小鼠，清洁级，重量309左右，怀孕12d(E12)。健康SD大鼠乳鼠，生后2周左右，清洁级，重量259左右，(均由南昌大学医学院动科部提供)。2．1．2主要仪器超净工作台(中国苏

8、净集团安泰公司)C02细胞培养箱(Formla公司，美国)荧光显微镜(Olympus公司，日本)倒置相差显微镜(Olympus公司，日本)低温台式离心机(Sigma公司，德国)XW一80A旋涡混合器(上海医科大学仪器厂)BeckmanDU640型核酸蛋白分析仪(Bekman公司，美国)水平