小梅山猪初情期前后下丘脑差异表达基因筛选和鉴定

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1、潘孝青小梅山猪初情期前斤下丘脑筹异表达基冈的筛选与鉴定二小梅山猪初情期前后下丘脑差异表达基因的筛选与鉴定研究生：潘孝青导师：丁家桐教授专业：动物遗传育种与繁殖(扬州大学动物科学与技术学院，扬州225009)中文摘要目前，国内外相关学者对各种动物初情期的调控因子做了多方面的研究，阐明了类固醇激素、生长因子、神经递质、体脂代谢信号等对下丘脑神经元释放GnRH的影响。但除了以上所述的调控因子对猪初情期启动有调节作用外，是否还存在未知调控基因，影响猪初情期的启动尚不清楚。本研究的目的是通过RT-PCR、差异显示PCR(DDRT-PCR)、反向Northern(Rever

2、seNorthern)、荧光定量PCR(realtimePCR)等分子生物学技术，对小梅山猪初情期前后下丘脑差异表达的未知基因进行筛选、鉴定，并与其在不同生理发育阶段的表达变化规律联系起来，探索这些基因在猪初情期启动机制中的作用，为丰富动物生殖机理和早熟品种选种选育提供理论基础。主要研究结果如下：试验用初生、初情期、性成熟期纯种小梅山母猪各3头，取出生(0同龄)、初情期(70日龄)(I组)以及初情期(70同龄)、性成熟期(150同龄)(II组)各三头小梅山猪下丘脑总RNA，各取lOt．tl组成总R．NA池30lal。共组成两组、四个RNA池。采用10条锚定引物，

3、10条随机引物组成100种引物组合进行DDRT-PCR，共获得12条差异表达条带，通过NCBI比对发现其中4条序列与已知基因高度同源，分别命名为MS01(355bp)，MS02(39Ibp)，MS03(241bp)，MS04(281bp)。MS01与猪脑特异性血管生成抑制因子(bpai)高度同源，同源性为98％，GenBank登录号为XM—001925295。MS02与猪脑脂肪酸结合蛋白基因(fabp7)有高度同源性，同源性为93％，GenBank登录号为DQ000160。MS03与猪13号染色体上一段功能未知的序列同源，同源性为86％，GenBank登录号为C

4、U633348。MS04与人的胶原蛋白剪接变体有较强的同源性，同源性为95％，GenBank登录号扬州人学硕十论文为DQ644568。其他序列在数据库中均无相同基因。最后通过ReverseNorthern、realtimePCR定性和定量检测各基因表达水平。定量结果显示：猪下丘脑三个发育阶段中，bpaimRNA表达水平呈下调趋势，并且初生时该基因的表达量与初情期以及性成熟期相比，差异表达显著(P<0．05)，本实验结果提示，下丘脑在出生至性成熟发育过程中，这一因子参与其中，为初情期时下丘脑神经元的脉冲式释放提供通路保障，起着管道迅速发育的导向作用；fabp7mR

5、NA在下丘脑三个不同发育阶段中，表达水平呈上调趋势，差异表达不显著(P>0．05)，本实验结果提示，脂肪酸调节因子在小梅山猪中其表达量随着生长日龄的增加是逐渐递增并蓄积的一个过程，该因子作为脂肪酸的受体，增强脂肪酸及其衍生物的亲和力，促进脂肪酸的摄取，推测该因子能进一步增加猪体内脂肪的蓄积，而脂肪进一步蓄积的结果直接影响猪体的营养状况，当脂肪蓄积量达到猪初情期启动所需体脂水平时，进而协同其他调节因子共同参与猪初情期的启动。关键词：小梅山猪；下丘脑；初情期启动；差异显示PCR；荧光定量PCR；反向Northern；分子克隆潘孝青小梅山猪初情期前后下R脑筹异表达基冈

6、的筛选与鉴定三IsolationandcharacterizationofgenesinvolvedbeforeandafterpubertyinXiaoMeishanpig’ShypothalamusM．S．candidate：Xiao．QingPanSupervisor：Prof．Jia-TongDing(AnimalScienceandTechnologyCollege，YangzhouUniversity,225009)ABSTRACTAtpresent，domesticandforeignscholarsonavarietyofanimal-relat

7、edpubertytheregulatorhasdoneawiderangeofresearch，explainedthesteroidhormones，growthfactors，neurotransmitters，bodyfatandothermetabolicsignalsofneuronsinthehypothalamusoftheimpactofthereleaseofGnRH．However,apartfromtheabovementionedfactorsontheregulmionandcontrolpigspubertytostartthead

8、justment，the