东北梅花鹿茸生长期顶端组织差异表达基因的筛选和鉴定

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1、万方数据学校代码：10225学号：S13402学位论文东北梅花鹿茸生长期顶端组织差异表达基因的筛选和鉴定指导教师姓名：麦霎姜蓄篓授申请学位级别：硕士论文提交日期：‘2013年4月授予学位单位：东北林业大学丁玲东北林业大学学科专业：动物遗传育种与繁殖论文答辩日期：2013年6月授予学位日期：2013年7月答辩委员会主席：马建章院士论文评阅人：露夕昼栉景大学万方数据UniversityCode：10225RegisterCode：S13402DissertationfortheDegreeofMasterIdentificationofdifferentiallyexpressedg

2、enesinthedevelopingantlerofSikaDeer(CervusNipponhortulorum)Candidate：Supervisor：AssociateSupervisor：AcademicDegreeAppliedfor：Speciality：DateofOralExamination：University：DingLingProf．LiHePingAssociateProf．XiaYanLingMasterAnimalbreedingandgeneticsJune，2013NortheastForestry万方数据摘要鹿茸是哺乳动物中惟一能够再生的组

3、织器官，因此鹿茸为哺乳动物组织器官再生的研究提供了独特的模型。研究已表明鹿茸发育属软骨内成骨，其再生基于干细胞而不涉及细胞的去分化；在鹿茸生长过程中，细胞的分化、增殖、凋亡都受到特定基因的表达调控；但其再生及其生长发育的分子机制迄今还并不十分清楚。本试验采用mRNA差异显示PCR技术筛选东北梅花鹿茸生长过程中小鞍子f前期)、二杠茸(quN)和三权茸(后期)项端间充质组织的差异表达基因片段，共获得45条鹿茸生长过程中差异表达片段，回收了15条，其中14条克隆测序，经Blast比对发现5条序列(ESTl、EST2、EST3、EST4和EST5)分别与已知基因(COL9A3、MALAT

4、l、LOX、BCLAFl)高度同源，EST3与EST5来源于LOX基因，其它序列在数据库中均无同源基因。采用实时定量PCR进一步检测LOX基因表达水平，与mRNA差异显示结果基本一致。本试验初步发现：COL9A3在鹿茸生长前期不表达，后期的表达量大于中期；MALATl在鹿茸生长中期表达量最高，前期至中期表达上调，中期至后期表达下调；LOX在鹿茸生长中、后期的表达量大于前期；BCLAFl只在鹿茸生长的后期表达。实时定量结果显示：鹿茸间充质生长的3个时期，LOXmRNA表达水平呈上调趋势，中期表达量最高，显著高于前期(氏0．05)，后期与前期、中期差异均不显著(胗O．05)，提示该基

5、因参与鹿茸间充质前期至后期的生长，推钡!f其可能促进了间充质细胞的快速增殖，协同其它因子使胶原蛋白与弹性蛋白形成分子闻的交联，稳定细胞外基质，保持细胞外内环境稳定。关键词东北梅花鹿；鹿茸；问充质组织；mRNA差异显示技术；基因表达万方数据AbstractDeerantlersaretheonlymammalianappendagescapableofregeneration，andthusprovideauniquemodelforresearchingthemechanismsofmammalianorganregeneration．Antlerdevelopmentisbas

6、edonstemcellsandbelongstoendochondralossification，butnotinvolvescelldifferentiation．Duringthedevelopment，celldifferentiation，proliferationandapoptosiswereregulatedundergeneexpression．However,themolecularmechanismremainspoorlyunderstood．HereweapplieddifferentialdisplayreversetranscriptionPCR(D

7、DRT-PCR)toscreentranscriptsdifferentiallyexpressedduringSikadeerantlerdevelopmentandidentifiedtheantlergrowing-relatedgenesthroughprofilingthedifferentialgeneexpressionbetweenthreedifferentstagesofthemesenchymallayeratthevery卸ofthevelvetantle