brn-3a标记大鼠视网膜神经节细胞的实验研究

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1、分类号：R775.9学校代码：10392学科专业代码：100212学号：200901126福建医科大学硕士研究生毕业论文Brn-3a标记大鼠视网膜神经节细胞的实验研究AnexperimentalstudyonBrn-3aasamarkerofretinalganglioncellsofrats学位类型：医学硕士所在学院：第一临床医学院研究生：林俊学科、专业：眼科学导师：朱益华副教授研究起止日期：2010年9月至2011年12月答辩日期:2012年6月4日二O一二年六月万方数据1万方数据目录缩略语表………………………………………………………………

2、…………….3中文摘要…………………………………………………………………………….4英文摘要…………………………………………………………………………….6前言…………………………………………………………………………….8材料与方法………………………………………………………………………….9结果…………………………………………………………………………….14讨论…………………………………………………………………………….21结论…….………………………………………………………………………27参考文献…….………………………………………………………

3、………………28致谢…….………………………………………………………………………31综述…….………………………………………………………………………322万方数据英文缩略词表英文缩写英文全称中文全称DABdiaminobenzidine二氨基联苯胺ESCembryonicstemcells胚胎干细胞株GCLganglioncelllayer神经节细胞层GFAPglialfibrillaryacidicprotein胶质纤维酸性蛋白HEhaematoxylin-eosin苏木精-伊红HSP27heat-shockprotein27热休克蛋白27I

4、NLinnernuclearlayer内核层NFneurofilament神经微丝NFH+Lneurofilament-H+L神经微丝H+LNSEneuronspecificenolase神经特异烯醇化酶ONLouternuclearlayer外核层、感光细胞层POUPit-Oct-UncandUnc-85POU家族PBSphosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲液RGCsretinalganglioncells视网膜神经节细胞SNAPsynaptosome-associatedprotein突触小体相关蛋白SYsynaptoph

5、ysin突触素3万方数据Brn-3a标记大鼠视网膜神经节细胞的实验研究中文摘要目的对比Brn-3a与Thy-1.1标记大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)的特点及计数差异，评估Brn-3a是否可作为一种可靠的内源性标记物，标记并计数大鼠RGCs。方法20只SD大鼠，随机选取大鼠一眼为Thy-1.1组，另一眼作为Brn-3a组,过量麻醉处死，行3点钟位缝线标记,立即摘除眼球，浸泡于4%多聚甲醛的固定液中。48h后沿角巩膜缘切除眼前节，剥离晶状体，余下部分逐节脱水、透明、石蜡包埋，于视乳头颞侧旁开1mm，做4μm切片，烘干备用，做视网膜石蜡切片，常规苏

6、木素-伊红染色镜下观察RGCs的形态，运用免疫组织化学法检测Brn-3a与Thy-1.1的表达情况，每只眼球取1张切片，在每张待测视网膜切片上，以视网膜后极部中点为起点，至近角膜缘视网膜止点处，将视网膜分为三等份，即中央区、中间区及周边区，每个区域视网膜随机取5个高倍视野，分别计数Thy-1.1、Brn-3a阳性细胞均数。结果光镜下正常大鼠的视网膜从内向外依次为神经节细胞层(GCL)、内核层(INL)、外核层(ONL)。GCL的细胞呈单层排列，较为整齐，胞核清楚数目相对较少，INL和ONL呈多层排列，且细胞排列紧密，数目相对较多。两种标记物染色

7、都仅仅存在于视网膜的GCL，但在大鼠RGCs中分布呈明显差异：Brn-3a主要在胞核中着色，Thy-1.1主要在胞浆中着色；运用此两种标记物标记计数RGCs,中央区Thy-1.1组(n=20)和Brn-3a组(n=20)分别是29.752.02（个/高倍视野）和29.461.25（个/高倍视野），中间区Thy-1.1组(n=20)和Brn-3a组(n=20)分别是24.721.10（个/高倍视野）和24.431.66（个/高倍视野），周边区Thy-1.1组(n=20)和Brn-3a组(n=20)分别是21.791.25（个/高倍视野）

8、和21.841.37（个/高倍视野）,各个相同区域内Thy-1.1和Brn-3a阳性细胞计数比较，差异均无统计学意义（P>0.05)。Thy-1.1