bfgf通过内质网应激信号通路对大鼠急性脊髓损伤早期保护作用机制的研究

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1、温州医学院硕士学位论文bFGF通过内质网应激信号通路对大鼠急性脊髓损伤早期保护作用机制的研究姓名：张谢申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：李校堃；肖健；张宏宇2012-05-22温州医学院硕士学位论文bFGF通过内质网应激信号通路对大鼠急性脊髓损伤早期保护作用机制的研究中文摘要第一部分：大鼠急性脊髓损伤早期内质网应激(ERS)信号通路相关蛋白的表达目的：观察大鼠急性脊髓损伤早期，脊髓损伤处ERS信号通路相关蛋白GRP78、CHOP／GADDl53、Caspasel2的表达变化，探讨大鼠急性脊髓损伤早期ERS与细胞凋亡的关系。方法：用动脉血

2、管夹(309，2min)压迫脊髓法来制作SD大鼠急性脊髓损伤动物模型。36只雌性SD大鼠，随机分为假手术组与模型组，按照不同时问点又分为ld，3d，7d三组，采用BBB法对其后肢运动功能进行评分，并于相应点处死，收集脊髓损伤节段作为组织标本。采用HE染色法观察损伤脊髓细胞形态变化，用免疫组化法以及westernblot法来检测脊髓组织中GRP78、CHOP／GADDl53、CaSpaLsel2蛋白的表达，用TUNEL法检测细胞凋亡。结果：1、BBB评分：假手术组大鼠下肢行动正常，而模型组出现不同程度的下肢功能障碍，术后1d与3d下肢瘫痪程度无

3、显著性差异，7d后有所好转(p<0．05)。2、HE染色发现各组脊髓损伤节段出现不同程度的细胞肿胀、凋亡和坏死。3、免疫组化与westernblot结果显示模型组GRP78、CHOP／GADDl53、Caspasel2蛋白在各个时间表达均明显高于假手术组(p<0．05)，且模型组内这些蛋白表达在1d就有所增加，3d达到高峰，7d又逐渐减少(p

4、脊髓损伤节段表达增加，促进细胞凋亡。4温州医学院硕士学位论文第二部分bFGF抑制ERS信号途径保护早期大鼠急性脊髓损伤作用是通过ERKl／2，AKT途径介导目的：研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对ERS的PCI2细胞的保护作用机制以及对大鼠急性脊髓损伤后促进大鼠后肢功能恢复作用机制。方法：1、用lnmol／ml毒胡萝卜素(TG)诱导PCI2细胞建立ERS损伤模型，用40ng／mlbFGF进行药物干预，流式细胞仪检测各组细胞凋亡率，westernblot法检测p-ERKl／2，p-AKTl／2／3，p-GSK313以及CHOP／GADDl

5、53表达变化。2、54只SD雌性大鼠随机分为假手术组(Sham)、脊髓损伤生理盐水对照组(SCI)、脊髓损伤bFGF治疗组(SCI+bFGF)，按不同的时间点分1d，3d，7d三个组。采用BBB法对其后肢运动功能进行评分，获得的损伤脊髓节段组织标本进行HE染色观察各组脊髓损伤组织学变化，免疫组化法检测脊髓组织中ERS相关蛋白GRP78、CHOP／GADDl53、Caspasel2表达，用westemblot法来检测GRP78、CHOP／GADDl53、Caspasel2、P-ERKl／2，p-AKTl／2／3，p-GSK313以及神经保护因子

6、GAP．43、Stathmin蛋白表达变化。结果：1、流式图结果显示用TG处理过的PCI2细胞，用bFGF处理后，细胞凋亡率明显下降。2、Westernblot结果显示，用TG处理过PCI2细胞，P．ERKl／2，P．AKTl／2／3，p-GSK3p表达明显降低(p<0．05)，而CHOP／GADDl53表达明显升高(p

7、行干预，P．ERKl／2，p-AKTl／2／3表达明显减少(p<0．01)，而CHOP／GADDl53表达又升高(p<0．05)。3、BBB评分动物组后肢功能恢复情况，从术后3d开始SCI+bFGF组明显高于SCI组(p<0．05)。4、术后7d动物组织片HE染色观察发现SCI+bFGF组脊髓组织结构明显比SCI组致密。5、术后7d免疫组化显示SCI+bFGF组ERS相关蛋白GRP78、CHOP／GADDl53、Caspasel2表达相比SCI组明显下降(p<0．05)；westernblot检测术后1d，3d，7d上述蛋白得到一致的结果，即

8、SCI+bFGF组相比SCI组表达量明显下降(p