体细胞克隆法制备红色荧光转基因猪胚胎研究

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1、ResearchesofProductionofPigEmbryosExpressingRedFluorescenceProteinbySomaticNuclearTransferThe"．ssubmittedtoSUl3mittedto．SQingdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfor也eDegreeofMasterofAgronomyZhouJing(CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicin

2、e)Supervisor：SongXuexiongQingdao．ChinaJune，2012学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。如不实，本人负全部责任。学位论文作者虢／式签字日期：刎净么月“日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关

3、部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：阀掳导师签字：签字日期：砂ly年占月％日签字日期：年月日青岛农业大学硕士学位论文中文摘要体细胞克隆法制备红色荧光转基因猪胚胎研究摘要本试验用红色荧光蛋白转基因猪胎儿成纤维细胞做为供核细胞，体外成熟猪卵母细胞作为受体细胞，构建了转红色荧光蛋白基因的重构胚胎，并进行了胚胎移植试验。探索了猪

4、卵母细胞体外成熟、去核及融合，以及重构胚体外发育的优化条件。主要研究结果如下：1、TcM-199基础液中添加不同物质对卵母细胞体外成熟的影响。与无添加对照组卵母细胞成熟率76．64％比较，0．1％PVA、10％FBS和10％PFF的卵裂率分别是80．00％、78．21％、87．04％；O．I％PVA和10％FBS没有显著差异(P>O．05)，10％PFF显著高于其它组(P<0．05)。这些结果表明，用添加10％PFF的TCM-199体外成熟液效果最好。2、卵母细胞体外成熟培养的不同时间对重构胚发育的影响。设置三个

5、培养时间(37h、40h、43h)培养的卵母细胞，核移植后的卵裂率分别为65．26％、64．44％、63．33％，三组间没有显著差异(P>0．05)；37h成熟的囊胚率17．72％显著高于40h和43h的lO．33％和8．75％(P

6、8．98％；囊胚率分别为27．78％和26．65％；两组间没有差异(P>O．05)。这些结果表明，转红色荧光蛋白基因猪胎儿成纤维细胞作为供核细胞，没有影响重构胚的发育。4、两种不同培养液对重构胚体外发育的影响。用NCSU-37和PzM一3两种不同胚胎培养液进行重构胚的体外培养，结果显示，卵裂率分别为63．33％和67．5％；囊胚率分别为15．79％和18．51％；两组间没有显著差异(P>O．05)。5、转基因重构胚移植试验。用促性腺激素同期发情的5头受体母猪进行胚胎移植，胚胎移植后一个月经B超检测证实，有4头妊娠

7、。但是，在2-3各月期间，出现胎儿退化和流产现象，最终没有顺利产出转基因猪。在妊娠120天时进行剖腹产，在子宫中发现退化的胎儿已形成吸收肉囊。关键词：猪卵母细胞；体外成熟；核移植；体外培养；红色荧光转基因青岛农业大学硕士学位论文英文摘要Researchesofproductionofpigembryosexpressingred■_·‘'·●l·●■IIU0rescenceoroteinDVS0matiCnUcleartranSterAbstractSCNTembryosconstmctedbyfusingpig

8、fetusfibroblastcellexpressedredfluorescenceproteinwithOO-plasmweretransfferedintorecipientpigs．Invitromaturation,nucleartransfer,fusionandembryosinvitroculturewereoptimized，resultsshowedb