利用体细胞核移植及嵌合体技术制备荧光蛋白转基因猪的研究

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2、转基因猪的研究李智方学科专业动物遗传育种与繁殖指导教师杨小繞副研究员潘登科副研究员论文答辩日期２０１５年５月２０日学位授予日期答辩委员会主席石德顺研究员广西大学学位论文原创性和使用授权声明本人声明所呈交的论文，是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果，论文不包含任何其他个。除己特别加标注和致谢的地方外人或集体己经发表或撰写的研究成果，也不包含本人或他人为获得广西大一学或其它单位的学位而使用过的材料。与我同工作的同事对本论文的研究工作所做的贡献均己在论文中作了明确说明。本人在导师指导下所完成的

3、学位论文及相关的职务作品，知识产权归目］。，；属广西大学本人授权广西大学拥有学位论文的部分使用权Ｉ学校有权保存并向国家有关部ｎ或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可レッ采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。本学位论文属于：□保密，在年解密后适用授权。保密。＂＂（请在上相应方框内打Ｖ）：论文作者签名：冬鮮。０期指导教师签名义曰期皆：作者联系电话：电子邮相利用体细胞核移植及嵌合体技术制备黄光蛋白转基因猪的硏究摘

4、要猪在体型大小、消化代谢和基因组等方面都与人的极为相似，是人类疾病模型和异种器官移植研究的理想动物，转夷光蛋白报告基因的工具猪在异种移植、嵌合体和医学领域具有重要的应用价值。本研究利用转基因技术、体细胞核移植技术和嵌合体技术，进行构建绿色巧光蛋白示踪的工具猪及嵌合体猪的研巧。ａ－、五指山）１、构建１３半乳糖基转移酶敲除（Ｇ化０）小型猪（己马，，Ｇ４１８原代耳成纤维细胞系，利用脂质体或电转染技术转染细胞系筛选获得了可用于后续试验的绿色焚光蛋白（ＥＧＦＰ）和橘红色巧光蛋白（ｈｕＫＯ）阳性细胞。２、ＥＧＦＰ阳性克隆点细胞

5、为核供体进行体细胞核移植和胚胎移植，移植５５９枚胚胎到３头受体母猪，１头母猪分娩产出２个ＥＧＦＰ旧性克隆猪。、、肠采样屯、肝、脾、肺、肾、赎腺、胃、舌、大脑、小脯、脊髓和骨骼肌肉等１３种组织进行石蜡切片观察、Ｗｅｓｔｅｒｎ和实时定量ＰＣ民分析，结果、。显示ＥＧＦＰ为全身性表达，但是在肝脏、大脑小脑和脊髓中的表达较弱３、显微注射ｉＰＳ细胞构建嵌合体胚胎，胚胎移植进行体内验证ｉＰＳ细－胞的全能性。共计移植６０２枚嵌合胚，获得９个胎儿（其中１５＃进行ＰＣ民检测）。通过小动物活体和体式巧光观测未发现有ＥＧＦＰ表达；ＰＣＲ检测显示１

6、＃胎儿头部和２＃胎儿胎盘检测到ＥＧＦＰ基因。Ｉ４、通过注射和聚合法进行嵌合体猪的研究，共移植了４％枚胚胎；但是未获得嵌合体胎儿。总之，本研究利用体细胞核移植技术成功获得了ＧＦＰ广泛表达的ＧＴＩＣＯ猪建立了制备嵌合体猪的平台。，关键词：ＧＴＫＯ体细胞核移植ＥＧＦＰ嵌合体猪ＩＩＳＴＵＤＹＯＮＦＬＵＯＲＥＳＣＥＮＴＰＲＯＴＥＩＮＴＲＡＮＳＧＥＮＩＣＰＩＧＳＢＹＳＯＭＡＴＩＣＣＥＬＬＮＵＣＬＥＡＲＴＲＡＮＳＦＥＲＡＮＤＣＨＩＭＥＲＩＣＴＥＣＨＮＩＱＵＥＡＢＳＴＲＡＣＴＰｉｓａｒｅａｒ

7、ｏｘｉｍａｔｅｌｔｈｅｓａｍｅｓｉｚｅａｓｈｕｍａｎｓ化ｅｉｒｍｅｔａｂｏｌｉｓｍａｎｄ化ｅｇｐｐｙ，ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆ出ｅｉｒｏｒａｎｓａｒｅｓｉｍｉｌａｒ化ｅｉｅｎｏｍｅｉｓｍｕｃｈｃｌｏｓｅｒｔｏｔｈａｔｏｆｇ；ｐｇｇｈｕｍａｎｓｔｈａｎｔｈｅｍｏｕｓｅｅｎｏｍｅ．Ｓｏｉｓａｒｅｒｅｇａｒｄｅｄａｓｒｉｍａｒｃａｎｄｉｄａｔｅｓｆｏｒｇｐｇｐｙｈｕｍａｎｄｉｓｅａｓｅｍｏｄｅｌ．Ｐｉｓｃａｒｒｉｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｒｏｔｅｉｎｅｎｅｈａｖｅａｎｉｍｏ

8、ｒｔａｎｔｇｙｇｐｇｐａｌｉｃａｔｉｏｎｉｎｘｅｎｏｔｒａｎｓｌａ