krt8对乙型肝炎病毒复制影响的体外研究

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1、重庆医科大学硕士学位论文KRT8对乙型肝炎病毒复制影响的体外研究姓名：钟卿申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：胡鹏201205重庆医科大学硕士研兜生学险论文KRT8对乙型肝炎病毒复制影响的体外研究摘要目的研究宿主蛋白KRT8对乙型肝炎病毒(HBV)复制的影响。方法体外培养稳定表达HBV的肝癌细胞株(HepG2．2．15细胞)。(1)利用抑制Ⅺ盯8基因表达的三段特异的siRNA片段转染HepG2．2．15细胞，实验分siRNA一1组、siRNA．2组、siRNA．3组、阴性对照组、脂质体对照组和空白对照组，转染48小时后收集细胞和上清液以

2、检测细胞内KRT8基因表达水平和上清液中HBVDNA表达水平。(2)利用高表达KI盯8基因的质粒转染HepG2．2．15细胞，实验分质粒组和对照组，转染48小时后收集细胞和上清液以检测细胞内KRT8基因表达水平和上清液中HBVDNA表达水平。(3)利用拉米夫定药物与HepG2．2．15细胞共培养以抑制细胞HBV复制，实验分拉米夫定组和对照组，共培养72小时后收集上清液和细胞以检测上清中HBVDNA表达水平和细胞内KRT8基因表达水平。RT-PCR法检测KI订8mRNA水平，荧光定量PCR法检测HBVDNA水平。结果(1)转染干扰KRT8基因

3、的siRNA后，siRNA一1组、silwA．2组、siRNA．3组细胞内KRT8mRNA表达水平均显著下调(RQ2)，质粒组KRT8训}WA水平是对照组的40．32倍(p

4、．01)。(3)拉米夫定药物与细胞共培养后，拉米夫定组HBVDNA表达水平与对照组相比明显下降，下降率为66％(pO．05)。结论抑制宿主KRT8基因具有抗病毒作用。关键词KRT8，宿主蛋白，HBv复制，RNA干扰重庆医科大学硕士研究生学位论文EFFECToFKj汀8ONTHEREPLICATIONOFHEPATlTISBVIRUSlNVITRoABSTRACTobjectTbinvestiga

5、tetheef凳ctofhostproteinKRT8onHBVDNAreplicationMethodsHepatitisBV玉rus(HBV)一transfectedhumanhepatoblastomacelllineHepG2．2．15wereculturedinvitro．(1)Weusedthree仔agmentsofKIU’8speci6csiRNAtosilenceKRT8geneexpression．TheexperimentwasdiVidedintosixgroups：siRNA—lgroup，s承NA-2group，

6、s承NA一3伊oup，negatiVecon缸olgroup，lipofectaInjncontrolgroupandblankcontrolgroup．48hoursaRerthetransfection，thecellswerehan，estedfordetectingtheleVelofKRT8geneexpressionandtheculnlresupematantswerecollected内rmeasuretheleVelofHBVDNAreplication．(2)WeusedplasmidVectortoupregulate

7、KRT8geneexpression，andtrans南ctedthemtoHepG2．2．15cells．TheexpeIIimentwasdividedinto帆ogroups：plasmidgroupandblanl(controlgroup．48hoursaRerthetransfection，thecellswereharVestedfordetectingtheleVelofKRT8geneexpressionandtheculturesupematantswerec011ectedformeasurethelevelofHBV

8、DNAreplication．(3)LamivudinewasselectedtoinhibitHBVDNAreplication，andwasco-culturedwithHe