优化hα-syn核酸疫苗免疫反应效果及安全性的评价

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1、重庆医科大学硕士学位论文优化hα--syn核酸疫苗免疫反应效果及安全性的评价姓名：杨云鹏申请学位级别：硕士专业：神经病学指导教师：彭国光201205重庆医科大学硕士研究生学位论文优化hQ．syn核酸疫苗免疫反应效果及安全性的评价摘要目的1．为筛选出更有效的抗帕金森病核酸疫苗，给今后的进一步研究奠定基础。本实验对课题组早期构建的全长核酸疫苗pVAX卜hQS卜1。。和优化帕金森核酸疫苗pVAX卜IL一4／SYN—B，预防接种小鼠来进一步观察核酸疫苗接种后所引起的免疫反应效果。2．为筛选出更加安全的抗帕金森病核酸疫苗，给今后的研究奠定基础。本实验通过预防接种小鼠，来评价全长核酸疫苗pVA

2、Xl-hCcSI-140和优化核酸疫苗pVAXl·IL．4／SYN-B的安全性。方法本实验采用无内毒素质粒大抽试剂盒，先对优化核酸疫苗、空质粒、全长核酸疫苗进行抽提和制备。接下来选用32只C57BL／6J小鼠，并随机分成对照组、空质粒组、优化核酸疫苗组、全长核酸疫苗组，4组动物分别双侧后肢胫骨前肌同一部位、同一深度接种PBS、pVAXl、pVAX卜IL一4／SYN—B、pVAX卜hQS¨扪每次各注射50ul，共接种5次，每次间隔3周。同时在免疫接种前及每次免疫接种后2周鼠尾采血1次，分离血清后于一80℃保存备用。在对小鼠进行免疫接种过程中，注意观察小鼠行为学变化。间接ELISA法测

3、定血清中抗a—syn的抗体滴度及IL一4、IFN—r的含量；免疫组织化学和Q—syn肽抗原的中和实验'重庆医科大学硕士研究生学位论文检测抗血清与慢性鱼藤酮帕金森病小鼠脑切片中Q—syn阳性包涵体的特异性结合；RT—PCR检测小鼠中脑黑质COX一2的表达。结果1．在免疫接种过程中，小鼠行为学无异常变化。各组小鼠平均体重在接种前和接种后无明显差异改变。在慢性鱼藤酮帕金森病小鼠模型制备过程中，小鼠出现尾巴弓形隆起、僵硬、震颤、少动、蜷缩、肢体运动不对称等类帕金森病样症状。2．与对照组相比，pVAX卜工L一4／SYN—B疫苗于第1次免疫后2周产生a—syn抗体，随加强免疫次数增多，抗体滴度

4、明显增加(p0．05)结论优化核酸疫苗pVAX卜IL一4／SYN—B可在小鼠体内产生高效价的a—syn抗体，主要引起体液免疫反应，且比全长核酸疫苗pVAX卜hQsH。。更安全，

5、未发现优化核酸疫苗接种后会引起毒副作用。因此，本实验结果提示优化核酸疫苗比全长疫苗更符合帕金森病的免疫治疗要求，为下一步免疫帕金森病动物的实验研究提供了依据，为3重庆医科大学硕士研究生学位论文优化核酸疫苗的进一步筛选奠定了基础。全性关键词：帕金森病，疫苗，仅一突触核蛋白，免疫效果及类型，安4重庆医科大学硕士研究生学位论文IMMUNITYEFFECTANDSAFETYOFOPTIMIZEDHUM【ANA．SYNUCLEINDNAVACCINEObjectiVe：ABSTRACT1．Theexp甜mental伊oupe耐ybuildtheoptiIIlizedP批i11sonnucle

6、icacidvaccinepVAXl扎一4／SYN-Band如ll-len咖DNAVaccillepVA．X1．h0【S1．140，f-orthepreVentionofVaccinatedmicetofIunherinvestigateⅡ1eDNAvaccine-inducedimmuneresponseresults，inordertofilteroutthemoreeH’ectivevaccines，research．aJldto1aythefoundationf．or向ture2．Toevaluatethesecuntyofoptimization血enucleictheV

7、accinepVAXl．IL．4／SYN．Bandm11一len酉hDNAVaccinepVAXl-hC【S1-140bypreventionofinoculatedmice，inordertofilteroutthesafIerVaccine，tolaythefoundationfor如mreresearchMethodsInthisstudy，缸rsttooptimizeDNAVaccine、emptyVector、m11．1engthDNAvaccineusin