布鲁斯菌BvrR基因核酸疫苗的构建及免疫效果研究

《布鲁斯菌BvrR基因核酸疫苗的构建及免疫效果研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：单位代码：10159密级：公开学号：200810049博士学位论文中文题目：布鲁斯菌BvrR基因核酸疫苗的构建及免疫效果研究英文题目：TheconstructionandimmunoreactivityofDNAvaccineencodingBvrRagainstBrucella论文作者：陈博指导教师：王桂珍教授学科专业：病原生物学完成时间：2018年10月中国医科大学博士学位论文中国医科大学博士学位论文布鲁斯菌BvrR基因核酸疫苗的构建及免疫效果研究TheconstructionandimmunoreactivityofDNAvacc

2、ineencodingBvrRagainstBrucella论文作者陈博指导教师王桂珍教授申请学位医学博士培养单位基础医学院一级学科基础医学二级学科病原生物学研究方向细菌的核酸疫苗研究论文起止时间2009年3月—2018年10月论文完成时间2018年10月中国医科大学（辽宁）2018年10月中国医科大学博士学位论文中国医科大学博士学位论文摘要目的：布鲁斯菌(Brucella)是引起布鲁斯菌病(Brucellosis)的病原体。布鲁斯菌病可以引起人类的波状热，牛、羊、猪等家畜的流产。布鲁斯菌可分为六个种，即马耳他布鲁斯菌、流产布鲁斯菌、猪布鲁斯菌

3、、绵羊布鲁斯菌、犬布鲁斯菌和沙林鼠布鲁斯菌。布鲁斯菌病是世界范围内较严重的人畜共患传染病之一，在我国北方地区内蒙古、山西、吉林、黑龙江、河北、宁夏等省区流行较广，布鲁斯菌病已经成为最严重的公共卫生问题之一。目前，对动物布鲁斯菌病的防治，依据各地区实际状况的不同，主要是采用疫苗免疫接种或检疫、扑杀的方法。迄今为止已有几种较成功的布鲁斯菌减毒疫苗应用于生产，国外使用的主要有牛种布鲁斯菌19(B.abortusstrain19,S19)疫苗、羊种布鲁斯菌Rev.1(B.melitensisRev.1)疫苗、牛种布鲁斯菌45/20(B.abortuss

4、train45/20)疫苗和粗糙型牛种布鲁斯菌51(RoughstrainB.abortus51,RB51)疫苗。我国主要使用的是猪种布鲁斯菌S2(B.suisstrain2,S2)疫苗。虽然这些减毒疫苗在布鲁斯菌病的防治上起到了积极的作用，但它们有的毒力较强，在推荐剂量使用时对于妊娠动物还存在流产的可能，对人类来说并不安全，存在着潜在感染人类的可能性，有的免疫保护率低，不能供人类应用。因此有必要研制和开发新型布鲁斯菌疫苗。因为布鲁斯菌是一种可以在细胞内寄生并造成感染的病原微生物，因此可以引起机体强烈的细胞免疫应答，在对抗细胞内寄生菌感染方面极

5、具潜力的核酸疫苗就成为了人们关注的研究热点。核酸疫苗与常规疫苗相比除了在预防细胞内寄生菌感染方面效果较好外，还具有无感染风险、可激发长期的免疫应答、比减毒疫苗具有更高的稳定性并且易于制备、造价低等优点。现在已有核酸疫苗用于预防人和动物的多种病毒、真菌和寄生虫感染的报道。在布鲁斯菌核酸疫苗的研究报道中，除了用布鲁斯菌外膜蛋白基因构建的核酸疫苗外，还有一些用布鲁斯菌胞内蛋白基因构建核酸疫苗的报道。据报道，布鲁斯菌胞内蛋白如：L7/L12核糖体蛋白、Cu/Zn超氧化物歧化酶等基因皆可作为布鲁斯菌核酸疫苗的候选基因并取得了较好的免疫效果。这说明，布鲁斯

6、菌的胞I中国医科大学博士学位论文内蛋白基因也可以作为核酸疫苗的候选基因。布鲁斯菌BvrR/BvrS双组分系统是调节布鲁斯菌感知系统的蛋白，在不同种属的布鲁斯菌中具有很高的同源性。据报道，布鲁斯菌BvrR/BvrS缺失突变株表现出侵入细胞的能力减弱，不能抵抗溶酶体的消化作用，在细胞内的复制能力也减弱。更进一步的研究还发现，BvrR/BvrS的缺失使布鲁斯菌失掉对细胞杀菌多聚阳离子的抵抗作用，可增加布鲁斯菌细胞膜表面对表面活性剂的通透性。因此，BvrR/BvrS双组分系统与布鲁斯菌的毒力有关。鉴于该组蛋白在细胞内较保守不宜变异，不同种属的布鲁斯菌B

7、vrR/BvrS基因具有高度同源性，如果该调节蛋白具有特异的免疫原性则可作为布鲁斯菌的核酸疫苗，使用这一种疫苗可预防多种属布鲁斯菌的感染，在布鲁斯菌病的特异性预防领域会有重要意义。本研究拟采用布鲁斯菌BvrR/BvrS双组分系统中的BvrR基因作为靶基因，插入真核表达载体pcDNA3.1中构建新型核酸疫苗pcDNA-BvrR，然后转染Vero细胞分析其在细胞内的瞬时表达情况。随后将重组真核表达质粒pcDNA-BvrR免疫BALB/c小鼠来探讨BvrR基因核酸疫苗的免疫效果。这些研究为进一步探讨布鲁斯菌BvrR基因核酸疫苗的免疫机理以及保护效果提

8、供依据。利用BvrR基因在布鲁斯菌种属之间具有高度同源性的特点，用一种核酸疫苗将可以预防多种属布鲁斯菌的感染。研究方法：1、BvrR基因的PCR扩增。