猪ghrelin基因真核表达载体的构建及其表达

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1、ConstructionofSwineGhrelinEukaryoticExpressionVectoranditsExpressionThesissubmittedtoQngdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofAgronomyCaoYue-sheng(DepartmentofAnimalScienceandVeterinaryMedicine)Supervisor：Prof．SunJin—haiQingdao．ChinaJune，201

2、2独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。啾虢髫码红帆年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解青岛农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以用不

3、同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)啾龆锗确导师签名：乳毛炀时间：年月日时间：年月日青岛农业大学硕士学位论文摘要猪Ghre1．n基因真核表达载体的构建及其表达摘要培育节粮瘦肉型转基因猪需要选择生长相关的基因构建表达载体，本研究选取生长激素释放肽Ghrelin基因作为目的基因，其Ghrelin属于生长激素促释放激素受体(GHS-R)的内源性配体，通过与其受体结合，能够促进生长激素(GH)的释放，而且Ghrelin在调节能量平衡、增强胃功能以及增强免疫力方面都呈现出重要的效应。本研究首先从20日龄的长

4、白猪十二指肠组织中提取总RNA，根据Genbank(序列号：DQ355969．1)提供的GhrelincDNA序列，设计带有NheI和HindIII酶切位点的引物，采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术，然后将该基因片段重组于无多酶切位点的T载体上，构建pMI)-Ghrelin质粒，多次测序，选取克隆完整的DNA片段，用于构建pEGFP-Ghrelin重组质粒。同时利用PCR扩增技术、酶切与电泳及基因测序的方法对重组质粒进行鉴定。然后，pEGFP-Ghrelin重组质粒转染成纤维细胞，观察荧光蛋白的表达。结果如下：1．通过RT-PCR技术获得了G

5、hrelin的cDNA序列，并应用基因重组技术构建了pEGFP—Ghrelin重组质粒，同时通过PCR扩增和双酶切均得到大小为357bp左右的目的片段，经测序鉴定重组质粒含有完整的Ghrelin的CDS序列片段．2．重组质粒(pEGFP--Ghrelin)转染成纤维细胞，得到表达绿色荧光蛋白的细胞，表明真核表达栽体pEGFP-Ghrelin构建成功．关键词：生长激素释放肽；真核表达载体；绿色荧光蛋白；反转录PCR青岛农业大学硕士学位论文ConstructionofSwineGhrefinEukaryoticExpressionVectoranditsE

6、xpressionAbstractInordertonurtureDewvarietiesof[弘tn-savingfoundationandleanswine，thestudyconstructedexpressionvectorofgrowthrelatedgene．ThestudyselectedGhrelingenesaspurposegene．Ghrelinwasfillendogenouslegendofgrowthhormonetopromotehormonerelease．nr01】ghitsreceptor,Ghrelincoulds

7、u-ongstimulatethereleaseoftheGHandpromotetheanimalfeedintake．Ghrelinplayedanimportantroleon删ateenergybalanceandinenhancingthegas研cfunctionandimmurliry,too．Thes吣dyextractedtotalRNAfromtheduodenaltissueof20daysoldlandrace．AccordingtothegeneticsequenceofGhrelincDNA(theloginnumberof

8、Genbankwas：DQ355969．1)’designedtheprimerwithgen