雷公藤内酯醇对缺氧诱导的视网膜新生血管形成的影响研究

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1、第二军医大学硕士学位论文雷公藤内酯醇对缺氧诱导的视网膜新生血管形成的影响研究姓名：秦海峰申请学位级别：硕士专业：眼科学指导教师：赵世红201205雷公藤内酯醇对缺氧诱导的视网膜新生血管形成的影响研究摘要【目的】探讨雷公藤内酯醇(triptolide，T10)对缺氧诱导的视网膜新生血管形成中的作用。【方法】l、建立人脐静脉内皮细胞的缺氧培养模型，在上清液中加入T10，用MTT检测的方法，确定最佳T10抑制浓度。正常组细胞置于5％的二氧化碳恒温环境中，用RT-PCR和WeStemblot检测正常组、缺氧组及TlO治疗组

2、细胞内VEGF、ANXA2和t．PA的基因及蛋白表达水平。2、新生C57BL／6J小鼠96只随机分为正常组、缺氧组与T10治疗组，每组32只(64眼)。缺氧组与治疗组于生后5天(P5)置于75％氧浓度环境中，P12返回正常空气环境中，治疗组小鼠给予腹腔注射T10，正常组始终置于正常空气环境中。P17对正常组、缺氧组和治疗组行异硫氰酸荧光素灌注造影、视网膜铺片及病理切片，观察视网膜新生血管生成情况；病理切片每只眼选取5张切片，双盲法统计突破内界膜细胞核数；应用RealTimePCR分别检测三组VEGFmIⅢA、ANX

3、A2mRNA和t．PAmRNA表达水平。【结果】1、T10的最佳抑制浓度为loonnlol／L；治疗组与缺氧组相比，降低了人脐静脉细胞中VEGF、t．PA和ANⅪ心的基因和蛋白表达水平，差异有统计学意义(尸<0．05)；治疗组与正常组无统计学意义(尸>O．05)。2、异硫氰酸荧光素灌注视网膜铺片造影正常组小鼠在P17视网膜血管分布均匀，无异常改变。缺氧组小鼠在P17可见视网膜血管明显迂曲、扩张，灌注区与无灌注区交界处发现大量的新生血管丛、微血管瘤及渗出。治疗组小鼠在P17未见视网膜大面积的无灌注区，渗漏及微动脉瘤。

4、视网膜病理切片：对P17小鼠突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核进行计数统计，正常组见到很少突破视网膜内界膜的细胞核数为1．05士O．28／片／眼；缺氧组小鼠中可见大量突破视网膜内界膜的新生血管，细胞核数为81．95士1．93／片／眼，治疗组可见到少量突破视网膜内界膜的新生血管，细胞核数为42．25士1．16／片／眼，缺氧组和治疗组差别具有统计学意义口<0．05)，治疗组和正常组无统计学意义pO．05)。3、对正常组、缺氧组和治疗组VEGFmRNA、ANXA2mRNA和t．PAmRNA相对表达水平进行统计学分析，治疗组

5、与缺氧组表达水平差异具有统计学意义(尸0．05)。【结’论】1、T10对人脐静脉内皮细胞的增殖有抑制作用，可以降低脐静脉内皮细胞中VEGF、AN)乙蛇和t．PA的表达。2、缺氧诱导视网膜新生血管小鼠模型稳定、可靠、重复性高，可做为研究视网膜新生血管疾病发病机制和防治方法的动物模型。3、T10在视网膜新生血管形成中可以抑制VEGF、ANXA2和t-PA的表达。第二军医大学硕士学位论文【关键词】雷公藤内酯醇，视网膜新生血管，血管内皮生长因子，膜联蛋白A2，组织型纤

6、溶酶原激活物雷公藤内酯醇对缺氧诱导的视网膜新生血管形成的影响研究AbstractobjectiveToinVest迳atethemechanismoftriptolid(T1O)inhypoxia—inducedretinalneovascul撕zation．Method1．nO丌11aIandhypO×icmOdeIsOfh啪anumbilicalVeinendothelialce¨s(HUvEC)werebu．It．Itwastodete肌inethebestInhibitoryconcentrationofT

7、l0byMTT．EndothelialceUwiththeefrectsoftriptolide(triptolid，T10)pmlifbrationwaLsaLssayedbyMTT，a11dexpressionoft-P加nRNA，VEGFmRNAa11dANXA2mRNAinHUVECcelllineswereobservedbyItT—PCR锄dwestemblotting．2．Ninety—sixmiceofC57BL／6JaRerbirthwererandomlydiVidedintotllreegro

8、ups：controlgroup(32mice／64eyes)，treatment黟oup(32mice／64eyes)andmodelgroup(32mice／64eyes)．Atday5(P5)，treatmentgroupaIldmodelgroupareplacedinaconcentrationof75％oxygen，retumtononllala