蛋白A亲和层析介质征求意见稿.doc

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1、中华人民共和国国家标准GB/T╳╳╳╳-201╳ICS07.080A20/39蛋白A亲和层析介质ProteinAaffinitychromatographicmedium（征求意见稿）200×-××-××发布200×-××-××实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会17前言本标准参考了GB/T1.1—2009的规则编写。本标准由中国标准化研究院提出并归口。本标准起草单位：本标准主要起草人：17蛋白A亲和层析介质1范围本标准规定了蛋白A亲和层析介质的技术要求、检测方法、检验规则、标志、包装、运输和贮存。本标准适用于骨架为

2、琼脂糖微球的蛋白A亲和层析介质的生产与检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T601-2002化学试剂标准滴定溶液的制备GB/T603-2002化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备3术语与定义下列术语和定义适用于本文件。3.1蛋白A亲和层析介质proteinAaffinitychromatographicmedium将重组蛋白A偶联至琼脂糖基质上制备得到的一类层析介质。4技术要求4.1外观在光学显微

3、镜下球形饱满，表面光滑，透明性良好。4.2理化性质理化性质应符合表1中的规定。17表1蛋白A亲和层析介质的主要性能参数检验项目技术指标粒度范围/%(45.00μm~165μm)≥90平均粒径（μm）90.00±9.00在0.1Mpa压力下可达最高流速*（cm/h）≥390配基密度（mg/ml）5-7动态载量（mgh-IgG/ml）>40微生物污染（菌落数/mL悬浮液）<100化学稳定性脱落物（5-羟甲基糠醛测定，以%计）pH3.0≤0.1pH13.0≤0.1*：层析柱Φ1.60cm×20.00cm(介质床层高度10.00cm),温度22℃（±3℃

4、）,溶液为H2O的条件下测定。5试验方法本方法中所用的水，在未注明其他要求时，应符合GB/T6682中二级水的规格，所用试剂，在未注明其他规格时，均指分析纯（AR）。5.1外观5.1.1仪器5.1.1.1光学显微镜。5.1.1.2真空泵：极限真空0.1MPa。5.1.2测定步骤5.1.2.1样品处理从贮存容器中用量筒量取5mL蛋白A亲和层析介质，置于50mL砂芯漏斗中。用去三级水清洗5次，每次2min，抽干5min。将洗净的介质置于烧杯中，介质上应有2cm的三级水。混匀后得到蛋白A亲和层析介质与水的混合体系。175.1.2.2样品观测前处理用塑料

5、吸管吸取1mL蛋白A亲和层析介质与水的混合体系置于载玻片上，调整显微镜放大倍数。以视野里80%以上面积均为微球为标准，用塑料吸管增减载玻片上的微球，最后用盖玻片压上。5.1.2.3样品观测调节光学显微镜焦距，使视野中的影像清晰。拍摄介质照片并保存。5.2粒径及其分布5.2.1仪器5.2.2.1激光粒度仪。5.2.2.2塑料吸管。5.2.2.3玻璃滤瓶。5.2.2.4砂芯漏斗（G3）。5.2.2.5真空泵：极限真空0.10MPa。5.2.3测定步骤5.2.2.1样品处理方法同5.1.3.1。5.2.2.2样品检测设置测量颗粒类型为通用型，分散剂类型

6、为水，分析模式为单峰模式，添加样品进行测定。5.2.4结果表示通过激光粒度仪的检测结果包括平均粒径值及其分布图，根据粒径分布（如图1中表格）按公式（1）计算45-165μm粒径范围内微球数量所占百分比。……………………………………(1)式中：W粒径——45-165μm粒径范围内微球数量所占百分比（%）；W1，W2，……Wx——符合45-165μm范围的各粒径范围百分比，例如图1中52.481μm-60.256μm的球所占百分比为2.85%。17图1蛋白A亲和层析介质粒径分布图平均粒径的计算方法：其中dBk为单个介质的粒径，为所统计的一定数量介质颗

7、粒的平均值，N为所统计的介质颗粒的数目。5.2.5允许差同一试样三次测定结果之差，应不超过平均值的5%。5.3耐受压力强度测试5.3.1仪器5.3.2.1中低压层析系统。5.3.2.2玻璃层析柱：Φ1.60cm×20.00cm。5.3.2.3玻璃滤瓶。5.3.2.4砂芯漏斗（G3）。175.3.2.5真空泵：极限真空0.10MPa。5.3.3测定步骤5.3.3.1样品处理方法同5.1.3.1。5.3.3.2样品装柱将介质与水的混合浆液倒入层析柱中，堵住柱子出口，静置，待柱床层稳定（Φ1.60cm×10.00cm），柱子上端充满水。打开柱子入口，连

8、续向柱中通入三级水（10个柱体积），保持床层稳定。5.3.3.3样品测定将层析柱连入中低压层析系统。测定时，从零开始设定一定流速Vx（m