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《正交设计优化辣椒srap-pcr反应体系及引物筛选》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、江西农业大学学报2010,32(3):0595-0600http://xuebao.jxau.edu.cnActaAgriculturaeUniversitatisJiangxiensisE-mail:ndxb7775@sina.com正交设计优化辣椒SRAP-PCR反应体系及引物筛选1,211313周坤华,方荣,陈学军,缪南生,王悟亮(1.江西省农业科学院蔬菜花卉研究所,江西南昌330200;2.江西省农业科学院油料作物重点实验室,江西南昌330200;3.江西省农业科学院,江西南昌33020
2、0)5摘要:以辣椒基因组DNA为模板,采用L16(4)正交试验设计,对SRAP反应体系中的5种关键因素(TaqDNA2+聚合酶、Mg、dNTPs、引物、模板DNA)进行优化,结果表明,辣椒SRAP-PCR最佳反应体系为:TaqDNA聚合2+酶0.75U、Mg0.6mmol/L、dNTPs0.2mmol/L、引物0.8μmol/L、模板DNA50ng,总体积为10μL。运用该体系对辣椒3份种质材料进行验证,证明该体系稳定可靠,并从198个SRAP引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的35个引物
3、组合。该体系的建立与多态性引物组合的筛选为SRAP标记技术在辣椒分子遗传学中的应用提供科学依据。关键词:辣椒;SRAP;正交设计;体系优化;引物筛选中图分类号:S641.3文献标志码:A文章编号:1000-2286(2010)03-0595-06OptimizationofSRAP-PCRSysteminPepperUsingOrthogonalDesignandSelectionofPrimers1,2113ZHOUKun2hua,FANGRong,CHENXue2jun,13MIAONan2
4、sheng,WANGWu2liang(1.VegetableandFlowerInstitute,JiangxiAcademyofAgriculturalSciences,Nanchang330200,China;2.TheKeyLaboratoryofOilCrop,JiangxiAcademyofAgriculturalSciences,Nanchang330200,China;3.JiangxiAcademyofAgriculturalSciences,Nanchang330200,Chi
5、na)5Abstract:TheL16(4)othogonaldesignwasusedtooptimizeSRAP-PCRsysteminpepper(Capsicum2+spp.)withfivekeyfactors(TaqDNApolymerase,Mg,dNTPs,primerandtemplateDNA,respectively).TheresultsshowedthattheoptimizedSRAP-PCRsystemforpepperwas:0.75UTaqDNApolymera
6、se,0.6mmol/L2+Mg,0.2mmol/LdNTPs,0.8μmol/Lprimer,50ngtemplateDNAinatotalof10μLreactionsolution.TheoptimizedSRAP-PCRsystemwastestedonthreepeppergermplasmsandwassteadyandreliable.35primercombinationswereselectedwithabundantpolymorphismfrom198primercombi
7、nations.TheoptimizedSRAP-PCRsystemandpolymorphismprimercombinationscouldbeappliedtoresearchonmoleculargenet2icsinpepper.Keywords:pepper;SRAP;orthogonaldesign;systemoptimization;selectionofprimers收稿日期:2010-030-03修回日期:2010-05-09基金项目:国家自然科学基金项目(30860173
8、)和江西省农科院创新基金项目作者简介:周坤华(1984-),男,硕士,助理研究员,主要从事蔬菜遗传育种与分子生物技术研究;E-mail:zhoukunhua6080@163.com;3通讯作者:陈学军,博士,研究员,E-mail:19889766@163.com。·596·江西农业大学学报第32卷[1]SRAP标记(sequence-relatedamplifiedpolymorphism,序列相关扩增多态性)是Li和Quiros开发的一种基于PCR(polymerasechainreactio
