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1、热带作物学报2014，35（5）：925-932ChineseJournalofTropicalCrops国兰杂交品种（系）SRAP-PCR反应体系优化及引物快速筛选龚理，黄添毅，王芳，陈倩淑，吴少华*，李永裕福建农林大学园艺学院，福建福州350002摘要以国兰杂交品种（系）为材料，采用L（45）正交试验设计对TaqDNA聚合酶、Mg2+、dNTPs、模板及引16物等5个重要影响因素进行优化，确定国兰杂交品种（系）SRAP-PCR反应的最优反应体系为（25μL体系）：TaqDNA聚合酶，1U；Mg2+，1.8mmol/L；dNTPs，
2、0.08mmol/L；模板DNA，100ng；引物，上下游各0.3mmol/L；10×PCRBuffer，2.5μL。此外，本试验采用DNA混合池技术（DNApooling）快速筛选SRAP引物，从180对SRAP引物组合中筛选出39对扩增产物丰富、多态性高的引物组合。与常规方法相比，该技术明显缩短试验周期、节约了模板用量，为快速高效筛选SRAP引物提供了新思路。关键词SRAP-PCR；体系优化；DNA混合池；引物筛选中图分类号S682.31文献标识码AOptimizationSRAP-PCRSystemandQuicklyScree
3、ningPrimersforHybridizationCultivars(Lines)ofChineseCymbidiumGONGLi,HUANGTianyi,WANGfang,CHENQianshu,WUShaohua,LIYongyuCollegeofHorticulture,FujianAgricultureandForestryUniversity,Fuzhou,Fujian350002,ChinaAbstractTheSRAP-PCRsystemofthehybridizationcultivars(Lines)ofChin
4、eseCymbidiumwasoptimizedbytheorthogonalexperimentwhichwasinfourlevelsoffivefactors(TaqDNApolymerase,Mg2+,dNTPs,DNAtemplateandPrimer).TheresultsshowedthattheoptimizedPCRreactionsystemcontainingTaqDNApolymerase1U,Mg2+1.8mmol/L,dNTPs0.08mmol/L,DNAtemplate100ng,eachprimer0.
5、3mmol/Land10×PCRbuffer2.5μL.ByusingDNApoolingtechnology,39primercombinationswerequickscreenedamong180primercombinations,whichhadabundantpolymorphismbands.Comparingwithconventionalscreeningmethod,theDNApoolingmethodcangreatlyshortenexperimentalperiodandsignificantlyreduc
6、etheconsumptionofDNAtemplate.AndthisshowedanewwayforquicklyscreeningSRAPprimers.KeywordsSRAP;Systemoptimization;DNApooling;Screeningprimersdoi10.3969/j.issn.1000-2561.2014.05.016中国兰花又称国兰，一般是指兰属（Cymbidium）简便、快速，多态性丰富，重复性好以及不需预知地生兰种类中具有较高观赏价值的一些种类,包括物种序列信息等优点。目前已广泛应用于植物的春
7、兰(C.goeringii)、蕙兰(C.faberi)、建兰(C.ensifolium)、遗传多态性研究[4][5]、品种鉴定、遗传连锁图谱构墨兰(C.sinense)、寒兰(C.kanran)、莲瓣兰(C.tortisepalum)建[6][7]等方面研究。利用、测序以及基因克隆和春剑(C.tongibracteatum)7个种[1]。近年国兰种内SRAP分子标记对多种兰科植物进行分子鉴别、遗及种间杂交已得到很大程度上的发展[2]传多样性分析等方面研究也有相关报道[8-14]。目前，国，但用兰杂交品种（系）的研究较少，父母本多不明确
8、，对于国兰杂交品种（系）研究罕有报道。通过SRAP分品种分类及新品种选育带来诸多不便。子标记分析，有助于已有国兰杂交品种（系）资的整相关序列扩增多态性标记(Sequence-related理分类，鉴定亲本来源，对新品种选
