台湾花蓟马和棕榈蓟马雄虫聚集信息素的提取分离鉴定

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IDENTIFICATIoNoFAMALE-PRODUCEDAGGREGATIONPHEROMONEINFrankliniellaintonsaandThripspalmiByZhuXiaoyunTheDissertationSubmittedtoNanjingAgriculturalUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeMasterofScienceSupervisedbyAssociateProfessorLuYaobinDepartmentofEntomologyNanjingAgriculturalUniversityNanjing，210095，P．R．ChinaMay，2012 本研究由国家公益性行业(农业)科研专项外来入侵害虫西花蓟马防控技术研究与示范(项目编号：200803025)入侵昆虫．综合防控技术研究与示范推广(项目编号：201103026)联合资助本研究工作在浙江省农科院“浙江省植物有害生物防控重点实验室一一省部共建国家重点实验室培育基地”完成 原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者(需亲笔)签名：祝魄元≯f霹箩月≯7日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南京农业大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。保密口，在——年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密口。(请在以上方框内打“√”)学位论文作者(需亲笔)签名：视晓五导师(需亲笔)签名：≯忱年明叼日锄，2年g月7日 目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯，．1第一章花蓟马研究概况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31花蓟马的分布及其危害⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32花蓟马的形态特征及生活习性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43花蓟马的防治方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43．1农业防治⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯，⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯53．2物理防治⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．53．3药剂防治⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．53．4生物防治⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．54展望⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5第二章棕榈蓟马研究概况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7l棕榈蓟马的起源和分布⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯72棕榈蓟马的寄主范围和危害⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．83棕榈蓟马的防治方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯83．1农业防治⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．83．2物理防治⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．93．3化学防治⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．93．4生物防治⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．94展望⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯lO第三章聚集信息素应用研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．11l昆虫信息素的提出和定义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．112昆虫聚集信息素生物学研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯～122．1聚集信息素释放的性别和部位⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯122．2聚集信息素的感受机制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯122．3昆虫对聚集信息素的行为反应⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯133昆虫聚集信息素的化学研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．133．1聚集信息素的提取⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯133．2聚集信息素的结构鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯143．3聚集信息素的合成⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯154昆虫聚集信息素的应用研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．154．1预报预测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯154．2诱捕害虫⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯164．3交配干扰⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯164．4区分近缘种⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯164．5害虫检疫⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯175本研究的目的和意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．17研究内容⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19第一章花蓟马雄虫聚集信息素组分的提取和分离⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯211材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．221．1蓟马饲养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22 台湾花蓟马和棕榈蓟马雄虫聚集信息素的提取分离鉴定1．2嗅觉测定试验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯221．3花蓟马成虫释放挥发物的提取和分离⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯231．4西花蓟马雄虫聚集信息素的提取和分离⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯231．5仪器工作条件⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯231．6数据分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯232结果与分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一242．1花蓟马成虫对其自身作为气味源的行为选择试验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯242．2花蓟马雄虫释放聚集信息素的分离和鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯242．3花蓟马雄虫与西花蓟马雄虫释放挥发物比较⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯253讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯．27第二章花蓟马雄虫聚集信思索的分离和鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．31l材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一321．1供试蓟马⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯321．2花蓟马雄虫聚集信息素的提取⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯321．3花蓟马雄虫聚集信息素的分离和鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯321．4花蓟马及西花蓟马雄虫聚集信息素释放量的比较⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33】．5花蓟马成虫和西花蓟马成虫对不同气味源的行为选择试验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯331．6仪器工作条件⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯341．7数据分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯342结果与分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯～342．1花蓟马雄虫释放挥发性化合物的结构鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯342．2花蓟马及西花蓟马雄虫聚集信息素释放量的比较⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯372．3花蓟马成虫和西花蓟马成虫对不同气味源的行为选择试验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯383讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．38第三章棕榈蓟马雄虫聚集信息素组分的提取和分离⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯411材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．421．1棕榈蓟马的饲养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯421．2棕榈蓟马成虫对其自身气味源的行为选择试验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯421．3棕榈蓟马成虫释放挥发物的提取和分离⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯421．4棕榈蓟马雄虫聚集信息素组分的相对含量⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯431．5仪器工作条件⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯431．6数据分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯432结果与分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一432．1棕榈蓟马成虫对其自身气味源的行为选择试验⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯432．2棕榈蓟马成虫释放挥发物的提取和分离⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯442．3棕榈蓟马雄虫释放挥发物与花蓟马雄虫释放挥发物比较⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯442．4棕榈蓟马雄虫聚集信息素组分的相对含量⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯473讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯47第四章全文总结与展望⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．49参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．51攻读硕士学位期间发表论文情况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．59致诩j⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．61 摘要台湾花蓟马和棕榈蓟马雄虫聚集信息素的提取分离鉴定花蓟马(Frankliniellaintonsa)和棕榈蓟马(孤ripspalmi)是世界上重要的农林植物害虫，每年可造成巨大的经济损失。本研究采用Y．型嗅觉仪测定花蓟马成虫和棕榈蓟马成虫对不同气味源的行为反应：用固相微萃取-(SPME)方法提取2种蓟马雄虫挥发物，并利用含有BGB．176SE或CP．chirasil．DexCB2种不同手性柱的气．质联用仪(GC—MS)对挥发物进行分离鉴定，结果如下：1．在花蓟马成虫对其自身作气味源的行为选择实验中。花蓟马雌虫被花蓟马雄虫气味源所吸引，但不被花蓟马雌虫气味源所吸引，这说明花蓟马的聚集信息素是由雄虫产生。花蓟马雄虫对花蓟马雄虫气味源有极显著的选择性，说明花蓟马雄虫产生的聚集信息素有聚集两性的作用。2．弄q用气质联用仪对花蓟马雄虫释放组分进行鉴定。结果表明花蓟马雄虫释放的挥发物中含有2种雌虫中没有的主要组分。在浸泡花蓟马雄虫的溶剂中也未发现这2种组分。3．利用含有不同手性柱的GC．MS对花蓟马雄虫聚集信息素进行鉴定，结果表明花蓟马雄虫可释放的2种聚集信息素组分分别是职)．1avandulylacetate和neryl(∞一2一methylbutanoate，其与已报道的西花蓟马(Foccidentalis)雄虫释放的聚集信息素组分相同。但定量分析表明，在花蓟马和西花蓟马雄虫中僻)一lavandulylacetate和neryl(固一2．methylbutanoate释放的比例不同。行为学试验结果表明这2种组分比例的不同在花蓟马和西花蓟马种间识别过程中发挥重要作用。4．棕榈蓟马雌虫被雄虫气味源所吸引，而雌虫气味源对其无吸引作用，这说明棕榈蓟马的聚集信息素是由雄虫释放的。对棕榈蓟马雄虫释放挥发物进行分析发现其含有2种主要组分，这两种组分在雌虫中是没有的。而这两种组分与花蓟马雄虫释放的聚集信息素组分并不相同。在浸泡棕榈蓟马雄虫的溶剂中也未发现这2种组分。因此确定这2种组分并不储存在棕榈蓟马体内，而是在特定条件下合成并释放的。 台湾花蓟马和棕榈蓟马雄虫聚集信息素的提取分离鉴定关键词：花蓟马：棕榈蓟马；聚集信息素；行为学试验：固相微萃取lI 摘要IDENTIFICATIONOFAMALE．PRODUCEDAGGREG』气TIoNPHEROMONEINFrankliniellaintonsaandThABSTRACTFranklinieltaintonsaandThripspalmiarepolyphagousherbivoresandcauseeconomiclossesonvegetable，fruitandornamentalcrops，InthelaboratorywetestedthebehavioralresponsesofadultFintonsaandZpalmitodifferentodorsourcesinY-tubeolfactometer．Head—spacevolatilesreleasedfromadultmalesofEintonsaandZpalmiwerecollectedusingsolid-phasemicroextraction(SPME)，andidentifiedbygaschromatography(GC)-massspectrometry(MS)anddifferentchiralgaschromatography(BGB一176SEandCP-chirasil-DexCB)．Allresultsshowedasfollowing：1．BehavioralresultsshOWedthatbothmalesandfemalesofFintonsawereattractedtotheodorsreleasedfromconspecificmales，providingbehavioralevidenceforamale-producedaggregationpheromoneinthisspecies．AdultmalesofFintonsawereattractedtotheodorofadultmales．Theresultshowedthatitcouleattractbothsexs．2．GC．MSanalysisofodorscollectedonSPMEfibersshowedthattwomajorcomponentsinhead—spacevolatilesproducedbymaleFintonsa．whicharenotinthefemaleodor．Thecompoundswerenotpresentinhexaneextractsofmales．3．GC-MSanalysisshowedthattwomajorcomponentsinhead—spacevolatilesproducedbyFintonsawere僻)一lavandulylacetateandneryl($一2一methylbutanoate，whicharethesarrlecompoundsthatarereportedinvolatilesofFrankliniellaoccidentalismales．However，quantificationalanalysisshowedthattheratioof(尺)一lavandulylacetateandneryl(∞一2一methylbutanoatedifferedbetweenEintonsaandFoccidentalis．BehavioralexperimentsfurthershowedthatthedifferenceinratioofthetwocomponentsplaysanimportantroleininterspeciesidentificationbetweenEintonsaandFoccidentalis．4．FemalesofZpalmiwereattractedtotheodorsofadultmalesofZpalmi，butnottotheodorofadultfemalesofZpalmi．Theresultsshowedthatmaleswereproducingaggregationpheromoneinthisspecies．GC-MSanalysisshowedthattwomajorcomponentsinhead—spacevolatilesproducedbyZpalmi．whicharenotinthefemaleodor．ThecompoundswerenotpresentinhexaneextractsofmaleswhichshowedthattheI¨ 台湾花蓟马和棕榈蓟马雄虫聚集信息素的提取分离鉴定compoundsAreproducedondemandandnotstoredKeywords：Frankliniellaintonsa；Thripspalmi；aggregationpheromone；behavioralbioassay；SPMEIV l-_篇文献综述卜··--●___一／I-_L‘rF=】／丽文献综述 台湾花蓟马和棕榈蓟马雄虫聚集信息素的提取分离鉴定2 文献综述第一章花蓟马研究概况第一章花蓟马研究概况1花蓟马的分布及其危害蓟马属于缨翅目(Thysanoptera)，目前全世界已知蓟马种类约有6000种(Ananthakrishnan，1979；Mound，1983)。我国目前已记录蓟马种类有124属336种(张维球和童晓立，1993)。其中一部分种类的蓟马是以真菌为食，少数种类捕食其他的节肢动物，余下的种类是以植物为食，而在植食性种类中多是农林害虫，可对植物造成直接损害(MorseandHoddle，2006)。花蓟马Frankliniellaintonsa(Trybom)又叫台湾花蓟马，隶属于缨翅目，蓟马科(Thripidae)，花蓟马属Frankliniella，在我国及世界大部分地区都有分布(韩运发，1997)。花蓟马为多食性害虫，其寄主范围十分广泛，能危害多种蔬菜、种植作物及花卉植物，是农林作物的重要害虫之一。我国早在1997年就有关于花蓟马的报道(吴振旺等，1997)，但是对其研究并不多(付东义等，2007；张玲等，2008)。花蓟马在我国分布广泛，分布区域有：黑龙江、吉林、辽宁、内蒙古、宁夏、甘肃、新疆、陕西、河北、山西、山东、河南、湖北、湖南、安徽、浙江、上海、江西、福建、台湾、海南、广东、广西、四川、贵州、云南、西藏。花蓟马通过取食、产卵和传播病毒使农作物大量减产，造成巨大的经济损失(Lewis，1997：NagataandPeters，2001)。花蓟马对寄主植物的危害方式有两种：直接危害和间接危害。直接危害是花蓟马以锉吸式口器刺吸寄主植物的茎、叶、花、果实等器官，导致叶片变小、皱缩，甚至黄化、干枯，直接导致农产品生产减产、产品商品价值降低，造成严重经济损失。花蓟马有很强的趋花性(段半锁和吕佩珂，1995)，各种植物的花均可被其危害。花蓟马的成虫、若虫多群集于花内取食为害，损害繁殖器官；花冠受害后出现点或横条状斑纹，花器、花瓣受害后成白化，经日晒后变为黑褐色，危害严重的花朵萎蔫以致干枯，对观赏价值影响较大；叶部受害后呈现银白色条斑，严重的枯焦萎缩；叶基部受害呈银灰色，可导致植物落叶，影响生长。例如花蓟马成虫及若虫取食辣椒叶片、花和幼果的汁液，造成叶片皱缩、粗糙，受害面斑枯；在花期可以引起花蕾脱落；坐果期可导致有果老化、僵硬、果柄黄化。间接危害是花蓟马通过传播多种植物病毒进行为害，例如番传播茄斑萎病毒(Tomatospottedwiltvirus，Tswv)和风仙花坏死斑病毒(Impatiensnecroticspotvirus，INSV)(Germanetal．，1992；Ullmanetal．，1997)。北美温室作物中，风仙花坏死斑病毒是主要病毒病，而在欧洲，危害较多的是番茄斑萎病毒，这可能与凤仙花坏死斑病毒主要危害花卉，而番茄斑萎病毒主要危害疏菜有关(Daughtreyeta1．，1997)。在 台湾花蓟马和棕榈蓟马雄虫聚集信息素的提取分离鉴定大丽花和菊花两种花卉作物上番茄斑萎病毒也是重要病毒病(Zhangeta1．，2007)。病毒通过花蓟马成虫取食而传播到健康植株上，使病毒迅速扩散蔓延，造成为害。病毒的传播一般可致作物损失30％一50％，严重时可达到70％，甚至有可能导致绝q复(LimaetIt．，2004)。在1986年TSWV的传播导致夏威夷苜蓿减产严重，达50％一90％(YudinetaZ．，1986)。可见，花蓟马通过传播病毒危害造成的经济损失远远大于其直接取食造成的危害(Lewis，1997：NagataandPeters，2001)。2花蓟马的形态特征及生活习性花蓟马属渐变态昆虫，分为卵、若虫、预蛹、蛹以及成虫五个发育阶段(张玲等，2008)。此虫卵长约0．29mm，宽约1．5mm，头方的一端有卵帽，近孵化时可见红色眼点。1龄若虫体长0．3～0．6mm，触角7节，第4节膨大呈锤状；2龄若体长0,6～0．8mm，桔黄色，第4节触角伸长与粗相等；3龄若虫又称“预蛹”，体长1．2～1．4mm，翅芽伸达腹部第3节，触角向头的两侧张开；4龄若虫又称蛹，体长1．2一一1．6mm，触角分节不明显，并折向头胸部背面，单眼内缘有黄色晕圈。成虫体长1．3ram，雌虫淡褐色至褐色，雄虫乳白色至黄白色；触角8节；前胸背板的前缘有长鬃4根，中间2根稍短，后缘有长鬃6根，中间2根也较短；前翅上脉鬃19～22根，下脉鬃14～16根，均匀排列。花蓟马在南方一年可发生11—14代，在华北、西北地区年发生6．8代。在20℃恒温条件下完成一代需20一25天。其成虫在枯枝落叶层、土壤表皮层中越冬。翌年4月中、下旬出现第一代。10月下旬、11月上旬进入越冬代。10月中旬成虫数量明显减少。该虫世代重叠严重。成虫羽化后2—3天开始交配产卵，全天均可进行。卵单产于花组织表皮下，每雌可产卵77—248粒，产卵历期长达20一50天。每年6—7月、8-9月下旬是该虫的危害高峰期。3花蓟马的防治方法在过去的数十年中，相关的研究报道表明相当多种类的昆虫及螨虫中的不少种群已经产生了一定的抗药性，而产生抗药性的节肢动物种类已经超过了500种(Georghiou，1990)。花蓟马是一种世界性分布的农业害虫，171前对其的防治方法主要以化学防治为主(吴青君等，2005；钟锋等，2009)，但由于花蓟马发育历期较短，个体小易隐蔽，对大多数杀虫剂易产生抗性，导致防治的效果并不理想。因此，开发一种绿色、无污染、可持续的防治方法已经迫在眉睫。4 文献综述第一章花蓟马研究概况3．1农业防治清除田间杂草，深耕冬灌，以减少虫源；加强水肥管理，使植株生长旺盛，也可减轻危害。3．2物理防治有研究表明，花蓟马对天蓝色的趋性最强，其次为白色(肖婷等，2011)，因此可采用蓝板诱杀。张玲等(2008)研究发现温度对花蓟马的生长发育速率影响很大，随着温度的升高，花蓟马各虫态发育历期明显缩短，不同虫态对温度的反应存在明显差异，其中3龄若虫及产卵前期对温度反应最敏感。因此，可通过调节温室内的温度来控制花蓟马的暴发。3．3药剂防治因花蓟马群体聚集在花内危害，喷施化学农药易造成落花，因此应选择以生物农药和低毒高效的农药为主。可选用具有胃毒、触杀及渗透作用的农药，例如1．8％阿维因素3000倍液；2．5％菜喜悬浮剂1000～1500倍液；25％阿克泰水分散粒剂1500倍液，从苗期开始喷，每5—7d喷洒1次。也可通过根施毒土法，每1000m2使用巴丹原粉177g，用于苗期、初花期及幼果期个1次，可有效防止花蓟马。3．4生物防治生物防治是一种新型的农业害虫防治方法，与化学农药相比，它具有灵敏度高、选择性强、无毒、不污染环境、不杀伤天敌、不易产生抗药性等优点，因而得到广泛的研究与支持。花蓟马的主要天敌有小花蝽、窄姬猎蝽、草蛉和蜘蛛等。目前国内大量大量农药的使用，导致应用本土天敌防治花蓟马效果并不理想，而通过引用国外天敌又存在一定的风险。因此导致生物防治的效果并不理想。4展望目前对花蓟马的防治方法主要以化学防治为主。但是由于花蓟马蓟马具有发育历期较短，个体小易隐蔽，而且对大多数杀虫剂易产生抗性等特点．导致化学防治和物理防治的效果并不理想。鉴于这样的现状，寻找一种无公害可持续的防治方法己迫在眉睫。而利用聚集信息素是防治蓟马的有效措施之一(Hamiltoneta1．，2005)。昆虫聚集信息素直接来自于昆虫虫体，不会给人类和环境带来危害，有利于延缓昆虫对化学农药抗性的演化，同时还可以保护自然界中的天敌种类及其种群数量，有利于农业害虫的可持续性治理。但是，目前关于蓟马聚集信息素成分鉴定及其诱捕果的相关研 台湾花蓟马和棕榈蓟马雄虫聚集信息素的提取分离鉴定究较少(Terry，1997)。除了西花蓟马，关于其他蓟马雄性释放的聚集信息素成分的提取鉴定目前国内外仍是空白。因此，分离鉴定花蓟马的聚集信息素对于雌虫的生物防治具有重要的意义。6 文献综述第二章棕榈蓟马研宄概况第二章棕榈蓟马研究概况1棕榈蓟马的起源和分布棕榈蓟马rhrippalmiKarny属于缨翅目(Thysanoptera)蓟马科(Thripidae)蓟马属死，枷，又名节瓜蓟马、瓜蓟马、棕黄蓟马、南黄蓟马(张维球，1990)。1925年在印尼苏门答腊岛的烟草上首次发现棕榈蓟马，同一时期，棕榈蓟马标本还在印度、苏丹和台湾出现，但由于当时分类学混乱而被混淆了。到20世纪80年代初，新修订的分类方法发表以后巴基斯坦、台湾、新加坡、菲律宾、印尼和泰国相继有报道发现该虫。至20世纪70年代后期，棕榈蓟马已在远东地区广泛分布，造成了一定的经济损失。1977年，Medina报道菲律宾棕榈蓟马爆发，在吕宋岛为害了80％的西瓜种植地(Cannoneta1．，2007)。1983年在菲律宾棕榈蓟马已经发展为重要的农业害虫之一。棕榈蓟马在10年的时间内，以从东南亚侵入到澳大利亚、加勒比海、美国的福罗里达州、非洲西部及南美洲(Kajitaetal．，1996；Smithetal．，1997)。欧洲和地中海地区的植物保护组织(EuropeanandMediterraneanPlantProtectionOrganization，EPPO)将棕榈蓟马定位检疫性害虫，并且制定了详细的检验检疫标准，以防止其侵入欧洲及地中海地区。棕榈蓟马在我国南方发生特别严重，可造成蔬菜减产或颗粒无收。广东省自20世纪80年代以来，瓜类和茄类蔬菜受到棕榈蓟马的严重危害，严重影响当地蔬菜生产。90年代初，棕榈蓟马在浙江发展成为灾害性害虫。1993年6月一9月棕榈蓟马在浙江大暴发，严重危害豆科、茄科、葫芦科蔬菜，导致这些蔬菜大量减产，造成严重的经济损失(贝亚维，1996)；1995年该虫造成浙江余姚市的棉花田减产达50％以上。随后湖南、湖北、广西、江苏、河南、山东、上海等地相继有棕榈蓟马危害的报道。而东南亚国家像菲律宾、泰国及马来西亚等国也深受棕榈蓟马的危害(Kajita，t996)。拉丁美洲地区的蔬菜被棕榈蓟马危害造成的损失达90％(Hall，1993)。日本西部的田闯和温室的茄子、黄瓜及甜椒因其受到严重危害，造成大量减产(Kaiwai，1988)。1992年日本出版的“现代农业”刊物上刊登了棕榈蓟马的为害状及其成虫和若虫照片，并称此虫为灾害性害虫。棕榈蓟马在日本的危害己超过白粉虱、蚜虫和红蜘蛛，成为第一大蔬菜害虫，是保护地蔬菜生产的一大威胁(Hiroseeta1．，1999)。瓜德罗普岛地区棕榈蓟马严重为害甜瓜、黄瓜、紫茄及辣椒作物，造成紫茄的品质严重下降，使其出口量在一年中减少了3000多吨；马提尼克的两个主要协作社的蔬菜受害达37％，茄子受害达90％；棕榈蓟马在夏威夷的黄瓜、辣椒、茄子及菠菜上也暴发成灾(K@m，】996)。 台湾花蓟马和棕榈蓟马雄虫聚集信息素的提取分离鉴定2棕榈蓟马的寄主范围和危害棕榈蓟马是一种多食性害虫，在我国主要为害蔬菜和瓜类。棕榈蓟马寄主植物主要有两大类，一类是茄科植物：茄子、辣椒、马铃薯、野生癫茄、少华龙葵及枸杞等；另一类是葫芦科植物：节瓜、黄瓜、丝瓜、冬瓜、南瓜、甜瓜和西瓜等，其中以茄子及节瓜为嗜好寄主(张维球，1990；Okajima，1992)。另一些报道认为棕榈蓟马寄主范围甚广，除能寄生以上寄主外，还可寄生于绿豆、大豆、菜豆、棉花(Rosenheimeta1．，1990)、菊花、兰花(Kajitaetal．，1990)、芒果(verghese，1988)，并可在大巢菜、球序卷耳及荠菜等3种杂草上越冬(Nagaieta1．，1990)。棕榈蓟马可两性生殖，也可进行孤雌生殖，其孤雌生殖为产雄孤雌生殖，在两种生殖方式下，棕榈蓟马雌虫繁殖能力没有显著差异(吴佳教等，1995)。棕榈蓟马对寄主植物的危害表现在两个方面：一是直接锉食植物的茎、叶、花、果实等器官，导致叶片变小、干枯，果实经济价值下降；二是能够传播多种植物病毒病，造成严重的经济损失(Lewis，1997；NagataandPeters，2001)。棕榈蓟马的成虫和若虫群体聚集在叶片(中脉和叶脉附近)、茎(生长点附近)、花(花瓣和正在发育的子房)和果(表皮)上取食为害，被害植物叶片呈银灰色或棕色，叶片和顶端叶鞘发育受阻，造成果实的疮痂和缺刻。棕榈蓟马还可通过传播多种植物病毒进行为害。1992年，日本发现该虫能够传播多种植物病毒病(Yeh，1992)，例如番茄斑萎病毒(TomatoSpoRedWiltVires，Tswv)和花生黄斑病(PeanutYellowSpotVirus，PYSV)(赵刚，2003)。Kota等发现棕榈蓟马能够在甜瓜上传播一种新的番茄班委病毒属(Tospoviruses)病毒～甜瓜黄斑病毒(MelinYellowSpotVirus，MYSV)(Kato，2000)。3棕榈蓟马的防治方法目前，常用的防治棕榈蓟马的方法有农业防治、物理防治、化学防治以及生物防治等。但是由于棕榈蓟马发育历期短，个体小易躲藏，且对杀虫剂易产生抗药性的特点，导致单一的防治措施难以取得好的控制效果。因此，对棕榈蓟马的防治应采取预防为主、综合治理的原则(孙士卿，2010)。3．1农业防治通过农业防治技术可以在总体上有效的降低虫口密度。轮作可以减少棕榈蓟马对作物的为害。例如黄瓜、茄子在育苗时应该远离受棕榈蓟马入侵过的田地，防止连续为害；对设施栽培地和露地可再用地膜覆盖的方法，减少成虫出土量；烧毁、清除主要受害作物的茎、秆以及棕榈蓟马越冬的主要寄主，可减少虫源，防止扩散。研究发现棕榈蓟马对温差敏感，可在其化蛹期间通过调节温室内温度，将其杀死(贝亚维， 文献综述第二章棕榈蓟马研究概况1996；张玉坤，1998)。3．2物理防治棕榈蓟马具有趋蓝色的习性，可将蓝色粘虫板悬挂或插在温室和大棚内，进行诱杀(陈华平等，1997)。Salas发现使用银色薄膜的辣椒地产量最高，黑色地膜也可阻止若虫在途中化蛹及趋避成虫的作用(Salas，2004)。Kawai也发现棕榈蓟马成虫有趋避银色物质的特性，在覆盖有银色地膜的温室里的虫口密度较低(Kawai，1990)。3．3化学防治化学防治是目前使用最多的防治方法。但是化学防治存在易造成环境污染，农药残留，使害虫易产生抗药性及伤害天敌的缺点，使化学防治效果并不理想。Kaiwai等(1988)对棕榈蓟马的种群密度与黄瓜、茄子、辣椒等作物损失之间的关系做了评估认为，黄瓜总产量损失达5％．10％时，其经济阈值叶片上成虫分布为5．3头／片一10．6头／片(Kaiwai，1988)。棕榈蓟马防治适期为2．3龄若虫期。研究发现防治棕榈蓟马若虫采用毗虫啉效果最好，防治效果达85．7％，阿维菌素为74．74％，吡丙醚为69．57％，杀螟丹为57．16％，但这些农药只对若虫效果好，对成虫效果不佳：对成虫防治可采用仲丁威、胺丙畏及氯唑磷，效果较好(Cermeletal．，2002)。另有结果显示，5％锐劲特悬浮剂1000倍液的平均防治效果达95．6％(赵刚，2003)；好年冬1500倍液、40％七星宝乳油500倍液等的防治效果较好(孙海滨，1999)。3．4生物防治生物防治是一种新型的农业害虫防治方法，与化学农药相比，它具有灵敏度高、选择性强、无毒、不污染环境、不杀伤天敌、不易产生抗药性等优点，因而得到广泛的研究与支持。目前对棕榈蓟马的生物防治研究较多的是捕食性天敌。主要捕食性天敌有小花蝽、螨类、蜘蛛类、赤眼蜂科、纹蓟马科、塔六点蓟马、白脸草蛉、亚洲草蛉等(王清玲，1994)。日本系统的研究过小花蝽对棕榈蓟马的捕食以及本身的生态学特征。日本还曾报道过瓜钝绥螨及小花蝽在棕榈蓟马防治上的应用(Cermeletal．，2002)。Castineiras等(1997)研究了福罗里达州茄子地中棕榈蓟马天敌的分布，研究发现中华微刺盲蝽能够捕食棕榈蓟马(Castineirasetal．，1997；Wang，1994)。我国广东省富含天敌中华微刺盲蝽，利用其防控作用达到50％以上。另有研究发现蜡蚧轮枝菌能够感染棕榈蓟马(秦玉洁和吴伟坚，2004)；球包白僵菌可寄生棕榈蓟马的成虫、若虫和蛹；斯氏线虫在25。C对棕榈蓟马的致死率高于蜡蚧轮枝菌(Cuthbertsonefal．，2005)。9 台湾花蓟马和棕榈蓟马雄虫聚集信息素的提取分离鉴定4展望棕榈蓟马的防治在国内主要采用杀虫剂防治，但是由于农药的使用方法不科学，而棕榈蓟马本事个体小，易隐蔽，且繁殖能力强，易产生抗药性，导致化学防治的效果并不理想。而国外对棕榈蓟马的生物防治方法研究广泛并深入，己形成了一套有效的综合防治方法应用于农业生产中。而国内的研究大多停留在实验室研究阶段，未建立一个有效的综合防治体系。但引用新的天地又存在一定的风险，所以寻找一种无公害、可持续的防治方法已经迫在眉睫。10 文献综述第三章聚集信息素应用研究进展第三章聚集信息素应用研究进展1昆虫信息素的提出和定义在1766年MosesHarris研究发现栎枯叶蛾LasioeampaquercusL．雌虫能够吸引其雄性前来交配(HowseandJones，1998)。Fabre(1913)利用这一现象，对栎树上的一种大蚕蛾SaturniapyriWestwood的雌虫进行诱捕试验，结果发现雌蛾能释放某些特殊的化学物质，而这些物质可以被周围的某些物体吸附和进行再释放，并能被同种雄蛾的触角检验到，从而引导雄蛾飞向雌蛾(FabreandMattos，1913)。1959年，德国化学家Butenandt等首次证明了昆虫信息素的存在，从50万头家蚕蛾BornbyxmoriLinnaeus腹部末端的提取物中分离鉴定出蚕蛾醇，E一10，z．12一十六碳二烯醇(ButenandtandStamm，1959)，标志着信息素研究的真正开端。1959年Karlson平[1Luscher最早提出信息素一词，它是由两个希腊字pherein(信息)及homall(刺激或兴奋物质)组合而成。信息素最初的定义是：由动物个体分泌到体外，可被同种个体接收，并引发一种特殊的行为反应，例如特定行为或发育进程的一类化合物。在1963年，Wilson等将信息素分为释放信息素(releaserspheromone)和引物信息素(primerspheromone)两大类(WilsonandBossert，1963)。1970年，Brown等发现了利他素(kairomones)、利己素(allomones)等能影响不同种昆虫行为的种间化学物质(Browneta1．，1970)。1971年，Whittaker等建议将昆虫之间化学通讯的物质统称为信息化学物质(semiochemicals)，它包括用于种内个体间通讯的昆虫信息素(Insectpheromone)和用于种间通讯的他感化学物质(allelochemical)(WhittakerandFeeny，1971)。昆虫信息素依据功能分为：性信息素(sexpheromone)、报警信息素(alarmpheromone)、示踪信息素(trailpheromone)、聚集信息素(aggregationpheromone)、蜂王信息素(queenpheromone)、疏散信息素(epidecticpheromone)、那氏信息素(nosanovpheromone)等多种类型。而性信息素和聚集信息素是其中研究比较多的两种信息素。昆虫聚集信息素(aggregationpheromone)通常被定义为由昆虫产生，并能引起雌、雄两性同种昆虫聚集行为反应的化学物质。信息素是昆虫种群之间进行觅食、交配、避敌等的通讯的化学物质。昆虫性信息素，又称性外激素，是由同种昆虫的某一性别个体特殊分泌器官分泌于体外，能被同种异性个体的感受器所接受，并引起异性个体产生一定的行为反应或生理效应(如觅偶、定向求偶、交配等)的微量化学物质(杜家伟，19841。利用昆虫信息素防止害虫是近年来发展起来的一种新技术，由于他具有高效、无毒、不伤害天敌和不污染环境的优点(杜家伟，1991；刘孟英，1994；沈兆 台湾花蓟马和棕榈蓟马雄虫聚集信息索的提取分离鉴定鹏，2001)，深受人们的欢迎。2昆虫聚集信息素生物学研究2．1聚集信息素释放的性别和部位昆虫聚集信息素来源是多样化的，这是与昆虫性信息素的主要区别之一。不同昆虫种群的聚集信息素来源和作用对象存在着很大的差异。昆虫的若虫、幼虫、雌雄成虫均可产生聚集信息素。鞘翅目释放的聚集信息素绝大多数由雄虫产生，并且对两性成虫都具有吸引作用；而在直翅目中，不仅雄性成虫能释放聚集信息素，若虫也可释放聚集信息素。例如沙漠蝗Schistocercagregaria，其成虫及2—5龄的若虫均可以释放聚集信息素并且二者释放的聚集信息素成分相同(Assadeta1．，1997；Mahamateta1．，1993)。双翅目中的刺舌蝇Glossinamorsitans其幼虫和成虫均可产生正十五烷(Sainieta1．，1996)。而在蜚蠊目中，某些成虫与若虫产生的聚集信息素组分只有部分相同，并且能够引起不同的聚集反应(McFarlandandAlli，1986)。昆虫聚集信息素的产生和释放在一定程度上取决于成虫的成熟度。例如鳞翅目昆虫羽化后能立刻释放性信息素以获得交配，而聚集信息素则是在到达新生环境后产生的，因为在已耗尽的生存环境中不宜释放信息素招引同伴。五刺齿小蠹幼虫在新的环境中很少产生信息素，而成虫找到新寄主就能产生信息素物质。当昆虫到达一种新的环境会立刻释放聚集信息素，能够迅速的征服寄主，使寄主屈服。研究表明，昆虫聚集信息素绝大多数是通过消化道释放的。聚集信息素的释放有两条途径：一是由胃盲囊和中肠通向后肠，另一条是由马氏管通向后肠。聚集信息素也有通过腺体产生和释放的。例如甜菜蚜爿phis．廊6口e的聚集信息素是通过腹管释放的，波纹小蠹Soc纱tusmultistriatus是通过与鞘状须相连的附腺产生和释放的；Blapssulcata是由肛门腺产生释放的的。此外，赤拟谷盗Triboliumcastaneum雄虫通过前胸腿节上刚毛斑基部的一个腺体产生聚集信息素。有一些种类昆虫的聚集信息素是从消化道释放的。例如小蠹在飞行前，腹部会形成一个大气泡，当到达新寄主时，便会释放。另外一些昆虫则是通过粪便释放聚集信息素的，例如美洲大蠊Periplanetaamericana、德国小蠊Germancockroach、锈赤扁谷盗Cryptolestesferrugineus、棉铃象AnthonomusgrandisBoheman等。2．2聚集信息素的感受机制大量的触角电位(EAG)以及单细胞记录(singlecellrecording)研究证明触角是昆虫对聚集信息素的感受部位，同时揭示了昆虫对聚集信息素感受的复杂系统。昆虫触角对信息素的感觉特别灵敏，对每一种信息素组分都有特定的感器，这些 文献综述第三章聚集信息素应用研究进展感器的感觉细胞对信息素的灵敏度已经达到仅大半个信息素分子就是使其感觉细胞产生兴奋的水平(Payne，1979)。研究发现棉铃象甲Anthonomusgrandis触角上的感觉细胞对其四种聚集信息素组分是分别接受的(Gutmaneta1．，】981)。昆虫对聚集信息素的反应行为分为导向反应和非导向反应两种。对于远距离的聚集信息素源昆虫会同时比较两触角感受的聚集信息素刺激来确定运动的方向，这称作同时感觉导向。利用同时感觉导向机制的昆虫，若将其一侧触角切除，仍可利用余下的一只触角确定聚集信息素的方向。黑材小蠹Trypodendronlineatum就是利用同时感觉导向机制寻找聚集信息素源的。加州五齿小蠹lpsparaconfusus在爬向聚集信息素源时，将其单侧触角切除，虽然反应能力下降但是仍能对聚集信息素做出反应(Bordeneta1．，1966)。有些昆虫在到达聚集信息素源时会安静下来，这种反应叫做非导向反应。研究发现豆卫矛蚜Aphishfabae在到达聚集信息素时会安静下来(Kay，1976)。2．3昆虫对聚集信息素的行为反应聚集信息素是昆虫个体问求偶、交配等行为的重要联系物质。但是这种影响在种间和种内存在差异性。不同性别、不同虫态的昆虫对聚集信息素的反应不同。研究表明非洲飞蝗Locustamigratoriamigratoioides成虫对若虫释放的聚集信息素物质反应很明显，但是5龄若虫对成虫释放的聚集信息素的反应并不明显(Niassyeta1．，1999)。红萤甲利用聚集信息素可以使雌雄成虫形成明显的警戒色，以获得保护，免受捕食者的伤害。聚集信息素可以使昆虫聚集到一4起，但是若在一个有限的环境中聚集了过多的昆虫，就会造成食物的匮乏以及种群的繁殖和延续。所以昆虫不会一直的释放聚集信息素，有时会释放抗聚集信息素(antiaggregationpheromone)，其作用是使同种昆虫离开或者不在向已经过度拥挤的食物源前进。例如不若维卡明是多种小蠹的抗聚集信息素或者多功能信息素成分。3昆虫聚集信息素的化学研究3．1聚集信息素的提取信息素在昆虫体内的含量很少，导致信息素的收集非常困难。昆虫信息素的提取有3种方法(杜家伟)：空气收集法、溶剂浸泡法以及固体萃取法。空气收集法是采用冷凝法或固体吸附法将昆虫释放在空气中的挥发物吸附。实验前将昆虫放入容器，空气经过分子筛和活性炭进入到装有活虫的容器中，昆虫释放的信息素随空气流出，经低温冷凝收集或吸附在有吸附剂的玻璃管中，常用的吸附剂有硅胶、PorapakQ、玻璃棉、纤维素等：二是溶剂浸泡法，将昆虫的腺体或整只昆虫用 台湾花蓟马和棕榈蓟马雄虫聚集信息素的提取分离鉴定溶剂进行浸泡，将信息素萃取出来，常用的溶剂有正己烷、乙醚、二氯甲烷等；三是固体萃取法法，利用气固吸附原理，将挥发在空气中的信息素分子吸附在吸附剂山。固相微萃取(SPME)技术是一种新型的提取技术，其原理是利用l根熔融的表层涂有特异性图层的石英纤维进行提取。提取时，将石英纤维推出保护针，昆虫释放在空气中的挥发物就会吸附在石英纤维上。将带有信息素的石英纤维插入气象色谱(GC)中，吸附在其表面的挥发物会在高温的影响下快速解吸，进入色谱柱中分离。该方法不需溶剂，简单方便、使用范围广、灵敏度高。SPME已于1993年商业化，该方法在医药、化工以及环保等领域的邮寄分析中得到广泛的应用。3．2聚集信息素的结构鉴定昆虫信息素研究的首要问题就是其结构鉴定。信息素的分离鉴定要求昆虫学家和化学家的通力合作：首先是对昆虫释放的信息素物质进行收集和提取；然后利用各种色谱法将收集的物质进行分离；对单个或混合的物质进行生物活性测定，确定有活性的化学物质；对信息素的结构利用化学方法和光谱方法进行鉴定；以鉴定的化合物进行人工合成；对合成的物质进行生物测定试验。信息素的组分分离主要采用毛细管色谱法，它可以直接分析未纯化的信息素样品，近年来多用于单头昆虫释放挥发物的分离(Pierceeta1．，1984)。昆虫聚集信息素的鉴定可采用质谱法和红外光谱法等，但这些方法要求得到纯品，必须分离出单一化合物。而利用气谱．质谱(GC．MS)联用仪可对粗提取物直接进行定性，利用质谱检索库进行组分结构的鉴定。但是经GC．MS分析是不能断定组分中哪个是有活性的，因此可通过气象色谱．触角电位(GC—EAD)联用技术判断化合物的活性(华湘翰，1988)。1971年，Vite等从森林害虫异加州齿小蠹lpsparaconfusus中分离、鉴定并合成出聚集信息素的三个组分，分别是小蠹烯醇ipsenol、小蠹二烯醇ipsdienol和顺一马鞭草烯醇cis．verbenol，这是最早分离的昆虫聚集信息素。随后又鉴定了西部松小蠹Dendrictinusbrevicomis的聚集信息素中的一个组分——布若维卡明(brevicomm)和南部松小蠹D．frontalis聚集信息素中的弗若塔林(frontalin)。目前所鉴定的昆虫聚集信息素有直翅目、蜚蠊目、双翅目、半翅目及鞘翅目等6目，12科的昆虫，其中鞘翅目鉴定的最多。昆虫聚集信息素的成分主要是一些烃、醛、酮、醇、酯、酸、酸酐、胺及腈类化合物。昆虫的聚集信息素组分在同属中具有极大的相似性。在昆虫的信息素中单个化合物作为信号化学体系是很少的，即使只有一种化合物，他在起作用的时候也有其它化合物的参与，例如寄主产生的利他素。研究发现，昆虫产生的聚集信息素大多是旋光异构体，不同的异构体可作为不同的信息素，例如顺马鞭烯醇是加州五14 文献综述第三章聚集信息素应用研究进展刺齿小蠹的聚集信息素，而反马鞭烯醇是黑山大小蠹Dendroctonusponderosae的信息素。3．3聚集信息素的合成昆虫聚集信息素的化学合成是聚集信息素研究的重要环节，其既可为结构鉴定提供标准化合物，也可为室内和大田试验的生物活性测定提供试验样品。昆虫聚集信息素的合成可以借鉴性信息素的合成方法进行合成，例如炔化合物路线、Grignard偶联反应及Witting缩合反应是常用的合成方法(HenrickandClive，1979)。现在我国己合成了一些昆虫的性信息素和性引诱剂。例如梨小食心虫得性信息素的合成。而聚集信息素在生产和环境保护中的作用潜力巨大，国外已经展开迅速的研究，目前己从很多昆虫中分离并鉴定了昆虫的聚集信息素(Viteetal．，1972；Viteeta1．，1978)。4昆虫聚集信息素的应用研究20世纪70年代以来，昆虫信息素的研究从实验室走向大田试验，被称为“第三代农药”。目前昆虫聚集信息素主要应用于害虫的虫情检测和可持续治理。4．1预报预测利用信息素对害虫进行预报预测以获得普遍的认可(赵春恋，2004)。害虫的预报预测是害虫综合治理的前提，只有准确及时的对害虫的危害做出预报预测，才能采取有效的防治方法，将害虫造成的损失控制在最低。聚集信息素诱捕器灵敏度高，诱捕器的诱捕量可以反映某一区域内害虫发生的数量、种群分布以及成虫羽化的高峰。一般的测报方法是以诱捕器作为虫情检测的工具(孟宪佐，2000)，诱捕器由捕虫器和诱芯两部分组成，诱芯中含有人工合成的信息素。观察人员每天检查诱捕器中害虫的数量，做好记录，画出害虫消长曲线。根据这个曲线可以指导人们选择害虫的防治方法，提高防治效率，降低防治成本。1986年Laschiavo等利用含有聚集信息素的试管诱捕监测大麦和小麦仓库中的锈赤扁谷盗的危害，获得了很好的效果，通过实验发现，诱捕的效果受诱捕时间、虫口的密度以及诱捕位置的影响(DowdyandMichel．，1997)。昆虫聚集信息素最初应用于防治森林害虫小蠹，1995年，James等利用聚集信息素防治露尾甲获得成功；1996年，Plarre利用聚集信息素研究谷象的分布。我国在1985～1986年上半年，应用信息素对松毛虫、小菜蛾、梨小食心虫等进行预报，应用面积达6．67万hm2。 台湾花蓟马和棕榈蓟马雄虫聚集信息素的提取分离鉴定4．2诱捕害虫利用昆虫聚集信息素可对害虫进行持续防治。在田间设置大量信息素诱捕器诱杀两性昆虫，降低虫口密度，达到降低下一代种群密度的目的。聚集信息素也可与杀虫剂混用，诱杀半翅目害虫以及部分鞘翅目害虫(RossandDaterman，1997)；可在聚集信息素中添加某些植物增效剂，增加聚集作用；也可在其中添加活虫或者死虫(Bartelleta1．，1995)。1996年Rudy利用人工合成的聚集信息素研究谷象在麦堆中的分布发现聚集信息素是抑制剂并非引诱剂，从而提出了间接使用聚集信息素诱捕害虫的理论。研究发现，诱捕法在虫口密度较低时才有效，若虫口密度太高，则难以达到防止效果。此时可先喷施农药降低虫口密度，在使用诱捕器进行大量诱捕，可达到很好的防治效果。4．3交配干扰1960年，美国学者Beroza提出利用信息素对雌雄昆虫之间的交配通讯系统进行干扰，近几年来此方法广泛应用在林、农、果树害虫的防治中。干扰交配俗称“迷向法”，其原理是利用弥散在环境中的信息素，使昆虫失去定向的能力，雌虫得不到交配，从而使下一代种群的虫口密度降低(Berozaetal．，1979)。信息素释放器在田间的分布方式有两种：疏布式和密布式。疏布式是将信息素释放器稀疏的放置在田闾，间隔较大，信息素的释放速率为每小时几毫克至十几毫克。李连昌等人于1986～1989年间利用交配干扰方法防治枣黏虫，雌蛾交配率下降61％，使雄蛾迷向达60％～95％，幼虫量下降84％，田问产卵量下降66％，有效的控制了该虫。密布式是在田间分布大量微型信息素释放器，使整个防治区充满信息素。1982年，李文谷与美国阿尔巴尼国际公司合作，在我国浙江省萧山进行性信息素干扰交配棉红铃虫试验，结果发现试验区比对照区花害率下降56．5％，雌蛾交配率下降87．1％，并且发现试验区比对照区少喷农药50％以上(李文谷等，1992)。4．4区分近缘种利用信息素可对昆虫进行近缘种区分，而传统的昆虫形态学在近缘种的区分上存在很多局限性，难以达到理想的效果。不同种的昆虫具有不同的信息素化合物，信息素具有种的特异性。利用信息素可以识别不同种昆虫，特别是对同地域分布的近缘种，虽然他们的形态特征及其相似。70年代初我国利用欧洲玉米螟性信息素进行田间诱蛾试验，发现其基本没有活性。经全国玉米螟协作组(1981)对全国范围的不同玉米螟性信息素进行测定，发现我国大部分为亚洲玉米螟；欧洲玉米螟主要分布在新疆；而宁夏、甘肃以及河北部分地区是两种玉米螟都有。16 文献综述第三章聚集信息素应用研究进展4．5害虫检疫昆虫的信息素不仅可以进行害虫的预报预测，也可进行害虫检疫、疫区扩散范围监测。何复梅等利用实蝇性信息素进行水果检疫取得良好效果。我国利用苹果蠹蛾Cydiapomonella和美国白蛾Hlyphantriacunea的性信息素监测害虫的入侵、扩散范围以及防治效果均取得良好效果(熊春华，1997：刘晓砚等，2001)。5本研究的目的和意义蓟马是一种世界性分布的多食性农业害虫，蓟马主要危害寄主植物的茎、叶、花、果实等器官，易导致叶片变小、皱缩，甚至黄化、干枯，直接导致农产品生产减产、产品商品价值降低等严重经济损失。据本实验室2003—2010年期间对浙江省11个地(市)43个县(区)的主要蔬菜和花卉种植基地、花卉市场、绿地和街道绿化带等调查发现，我省蓟马种类多达35种，其中台湾花蓟马的数量最大(占总标本量的55．71％)，其次是棕榈蓟马(12．66％)，黄胸蓟马Thripshawaiiensis(10．66％)等；其危害的农作物包括油菜、葫芦、棉花、辣椒、西瓜、空心菜等主要经济作物30余种。目前，关于蓟马的防治方法主要有3种：化学防治，生物防治和物理防治(吴青君等，2005；钟锋等，2009)。但由于蓟马具有发育历期较短，个体小易隐蔽，而且对大多数杀虫剂易产生抗性等特点，导致化学防治和物理防治的效果并不理想。鉴于这样的现状，寻找一种无公害可持续的防治方法已迫在眉睫。而利用聚集信息素是防治蓟马的有效措施之一(Hamiltoneta1．，2005)。昆虫聚集信息素直接来自于昆虫虫体，不会给人类和环境带来危害，有利于延缓昆虫对化学农药抗性的演化，同时还可以保护自然界中的天敌种类及其种群数量，有利于农业害虫的可持续性治理。目前有关蓟马聚集信息素成分鉴定及生物活性的相关研究国内外仍然较少。迄今为止，只有西花蓟马的聚集信息素得到有效分离和鉴定，包含有(R)一lavandulylacetate和nerylfSl—2．methylbutanoate2种组分(Hamiltoneta1．，2005)，并且已经开发出相应的生防产品。西花蓟马雄虫产生的性信息素不仅有引诱异性以完成交配的功能，也有聚集两性成虫的功效。因此，西花蓟马雄虫产生的性信息素也称为聚集信息素fHamiltoneta1．，2005)。对于其他蓟马种类的聚集信息素研究，目前仅限于其幼虫肛门分泌物的组分鉴定(Suzukiela1．，2000；Suzukieta1．，2004)，或者对其雄性成虫的气味源生物活性进行了测定(DeKogelandVanDeventer，2003：KirkandHamilton，2004)；而对于其他蓟马雄虫释放的聚集信息素成分的提取鉴定目前国内外未见报道。花蓟马与西花蓟马同属于花蓟马属，二者形态及生物学特性均非常相似，那么花 台湾花蓟马和棕榈蓟马雄虫聚集信息素的提取分离鉴定蓟马是否同西花蓟马一样也可以释放聚集信息?其活性成分同西花蓟马所释放的活性成分是否相同?棕榈蓟马属于蓟马属，是否也能释放聚集信息素?花蓟马属蓟马与蓟马属蓟马释放的聚集信息素是否一致?对于这些问题的回答，不仅有助于更深的理解蓟马之间的关系，同时也为开发蓟马引诱剂提供理论依据。本研究采用Y-型管方法测定蓟马对其自身释放气味源的行为反应；通过固相微萃取(SPME)方法提取蓟马雄虫挥发物：然后利用含有不同手性柱的气一质联用仪(GC-MS)对挥发物进行组分分离鉴定；并利用标准品对蓟马释放的聚集信息素进行定量分析。 下篇研究内容万施审霹币研究内容19 台湾花蓟马和棕榈蓟马雄虫聚集信息素的提取分离鉴定20 研究内容第一章花蓟马雄虫聚集信息素的提取分离第一章花蓟马雄虫聚集信息素组分的提取和分离摘要：明确花蓟马雄虫释放的聚集信息素对于花蓟马种群生物防治具有重要意义。本研究通过嗅觉仪试验发现，花蓟马雄虫释放的气味源对其雄性及雌性成虫均具有明显的吸引作用，说明其雄虫能够释放聚集信息素。通过圈相微萃取方法提取花蓟-Sgt虫释放的挥发物，并利用气质联用仪对其组分进行鉴定。结果表明花蓟马雄虫释放的挥发物中含有2种雌虫中没有的组分。在浸泡花蓟马雄虫的溶剂中也未发现这2种组分，由此推测这2种组分是在特定条件下合成并释放的，而并不储存在体内。关键词：花蓟马；国相微萃取；西花蓟马：聚集信息素：行为反应EVIDENCEFoRAMALE．PRoDUCEDAGGREGATIONPHEROMoNEINAbstract：IdentificationofaggregationpheromonereleasedfromtheFranklinieUaintonsamalesplayakeyroleinbio—controlofflowerthrips．BehavioralresultsshowedthatbothmalesandfemalesofEintonsawereattractedtotheodorsreleasedfromconspecificmales，providingbehavioralevidenceforamale-producedaggregationpheromoneinthisspecies．GC—MSanalysisofoderscollectedonSPMEfibersshowedthattwomajorcomponentsinhead—spacevolatilesproducedbymaleF．intonsa，whicharenotinthefemaleodor．Thecompoundswerenotpresentinhexaneextractsofmales．Itshowedthatthecompoundsayeproducedondemandandnotstored．Keywords：Frankliniellaintonsa；SPME；Frankliniellaoccidentalis；aggregationpheromone；behavioralresponse 台湾花蓟马和棕榈蓟马雄虫聚集信息素的提取分离鉴定1材料与方法1．1蓟马饲养花蓟马：2010年采自杭州；西花蓟马：2007年采自北京，按照Mollema等(1993)的菜豆荚法进行群体饲养。两种蓟马以四季豆PhaseolusvulgarisL．饲养于人工气候箱内，建立试验种群(图1—1)，试验前花蓟马、西花蓟马己分别在室内连续饲养10代、60代。试验用虫为羽化后2—5d的成虫。未交配花蓟马的饲养：将群体饲养的花蓟马中生长到二龄的蓟马若虫转移到1．5mleppendorftube中，管中放一滤纸条，以甘蓝叶片(约0．5cm2)为饲料进行饲养，每48h更换一次叶片，直至若虫羽化为成虫。饲养条件：温度26士1℃、相对湿度75士5％、光照周期L：D=14h：10h。1．2嗅觉测定试验1．2．1嗅觉测定仪设计利用Y-型嗅觉仪测定蓟马成虫释放挥发性物质的生物活性。Y-型嗅觉仪依Koschier等(2000)方法设计并略加改进，其由玻璃制成，适应臂长和测试臂长均为60mm，内径均为5mm，两个测试臂之间的夹角为90。C。此装置以气泵为动力，空气经活性炭、分子筛过滤后形成两个分支，每个分支流经一个空气流量计、50mL的圆底烧瓶，与Y形管的测试臂相连，各部件之间用teflon管相连(图1—2)。1．2．2花蓟马成虫对其自身气昧源的行为选择试验在进在进行行为测试之前，利用高纯二氧化碳气体将花蓟马种群瞬间麻醉，然后用软毛笔轻轻将雄性成虫或雌性成虫挑出，约50～60头，将其转移至50mL圆底烧瓶中，同时瓶中放一湿润的滤纸片，保持空气湿度，该烧瓶作为聚集信息素气味源。另一相同的圆底烧瓶，瓶中仅放一湿润的滤纸片，不放任何蓟马，作为对照空气源。两个圆底烧瓶的进气口和出气口塞上少量的棉花，防止花蓟马成虫从瓶中跑出，用冷光源(10000lx)对昧源瓶进行光照，刺激其释放信息素(TerryandGardner，1990)。调节测试臂的流量为60mL／min，适应臂的流量为120mL／min。然后取单头花蓟马雄虫，或雌虫，进行嗅觉仪试验，测试不同气味源对雌雄成虫的吸引作用。当测试蓟马爬过某测试管臂的20mm，并持续30s以上，记录其对该气味源做出选择；若蓟马进入Y-型管3min内没有做出选择，则记录为无反应。每次测定虫口数为20头，每组处理重复3次。每次试验后Y-型管和味源瓶用95％酒精清洗，120℃烘干。实验条件：温度27士1℃、相对湿度60％ 研究内容第一章花蓟马雄虫聚集信息素的提取分离1．3花蓟马成虫释放挥发物的提取和分离利用高纯二氧化碳气体将花蓟马种群瞬间麻醉，然后用软毛笔轻轻将花蓟马雄虫或雌虫挑出，约30一一40头，将其转移至1．5mL玻璃瓶中，在距离玻璃瓶2cm的地方用冷光源(大约10000Ix)进行光照刺激，引起蓟马成虫的徘徊和打斗行为(TerryandGardner，1990)。然后利用固相微萃取(SPME，1009m，PolydimethylsiloxaneCoating)方法，提取花蓟马成虫释放的挥发性物质5h(尉rkandHamilton，2004)(图l一3)。然后用气一质联用仪(GC．MS)对花蓟马成虫释放挥发物进行分离(图1．4)。SPME柱使用前在200℃下活化1h。每组处理重复5次。另外取40头花蓟马雄虫，将其浸泡在正己烷溶液中，储存在一20℃冰箱中，直到进行分析。每组处理重复5次。实验条件：温度27士1℃、相对湿度60％。1．4西花蓟马雄虫聚集信息素的提取和分离取30-40头西花蓟马雄虫将其转移(方法同1．2．2)至1．5mL玻璃瓶中，在距离玻璃瓶2cm的地方用冷光源(大约10000Ix)进行光照刺激。然后利用SPME方法吸附西花蓟马雄虫释放的挥发性物质5h(温度27士1℃、相对湿度60％)(KirkandHamilton，2004)。SPME使用前在200。C下活化1h。每组处理重复5次。1．5仪器工作条件1．5．1仪器型号岛津气谱一质谱联用仪(SHIMADZUGCMS—QP2010plus)1．5．2仪器的工作条件气谱工作条件：色谱柱Rxi@_5ms(30mx0．25mmx0．259m)；不分流进样；程序升温：40。C，保持3min，以8。C／min升到250℃，保持5rain。进样口温度250℃；载气He(>99．999％)。质谱工作条件：离子源：EI；离子源温度：230。C；四级杆温度：150。C；电子能量：70eV，扫描质量范围35～320amu。1．6数据分析数据处理用SPSSl3．0软件进行，嗅觉仪测定试验的试验数据采用二项分布检验的方法进行检验分析。花蓟马雄虫和西花蓟马雄虫释放挥发物的分离鉴定，通过NIST08谱图库行成分的鉴定。 台湾花蓟马和棕榈蓟马雄虫聚集信息素的提取分离鉴定2结果与分析2．1花蓟马成虫对其自身作为气味源的行为选择试验未交配花蓟马雌虫被花蓟马雄虫气味源所吸引，但不被花蓟马雌虫气味源吸引。花蓟马雌虫的选择与未交配花蓟马雌虫的选择类似，对花蓟马雄虫气味源有极显著的选择性。花蓟马雄虫对花蓟马雄虫气味源同样有极显著的选择性(表1—1)。表1．1花蓟马成虫对其雌雄虫释放气味源的行为反应Table】BehaviouralresponsesofadultFrankliniellaintonsatotheodorsreleasedbyfemaleandmaleadults2．2花蓟马雄虫释放聚集信息素的分离和鉴定利用GC—MS对SPME吸附的花蓟马雄性和雌性成虫释放的挥发物进行分离分析(图1-5)。在花蓟马雄虫释放的挥发物的总离子流色谱图中，出现了两个主要的峰：峰a和峰b，这两个峰的保留时间分别是15．7min和20．3rain，而在花蓟马雌虫释放的挥发物的总离子流色谱图中未发现这两个主要的峰。在花蓟马雄虫浸泡的正己烷中也未发现这两个峰。 研究内容第一章花蓟马雄虫聚集信息素的提取分离毛{量!l星霉||墓趔16．017018．019．020021022023024．0时间Thne(min)图1．5花蓟马雄虫和花蓟马雌虫释放挥发物总离子流色谱图Figl-5ThetotalionchromatogramofthevolatilescollectedfromadultmalesandadultfemalesofFrankliniellaintonsa2．3花蓟马雄虫与西花蓟马雄虫释放挥发物比较据文献报道，西花蓟马雄虫能够释放2种聚集信息素组分，分别为僻)．1avandulylacetate和neryl(固．2-methylbutanoate。本研究利用GC．MS对SPME柱提取的花蓟马雄虫释放的挥发物及西花蓟马雄虫释放的挥发物进行分离分析(图1．6)。对西花蓟马雄虫释放挥发物中的化合物进行分析，发现分别为15．7min和20．3min出现2个主要的峰，将这两个峰的质谱图与文献报道的俾)．1avandulylacetate及neryl㈣．2-methylbutanoate两种化合物的质谱图进行对比，发现峰at与(尺)．1avandulylacetate的质谱图极其相似，峰b’与neryl(趵．2一methylbutanoate的质谱图极其相似。而花蓟马雄虫释放的挥发物中，化合物a的出峰时间也是15．7min，化合物b的出峰时间是20．3min。我们将花蓟马雄虫释放的化合物a的质谱图及化合物b的质谱图(图1．7)与西花蓟马雄虫释放的2种聚集信息素组分的质谱图进行对比，发现化合物a的质谱图与限)．1avandulylacetate的质谱图极其类似，而化合物b的质谱图与neryl(研．2-methylbutanoate的质谱图极其类似，并且它们的出峰时间完全相同。由此推测花蓟马雄虫释放的聚集信息素主要组分与西花蓟马雄虫释放的聚集信息素组分可能是相同的。 台湾花蓟马和棕榈蓟马雄虫聚集信息素的提取分离鉴定(x10．000．0007．0>E6．0MaleF加Ionsa^．．．．．●．．．I．yMak，=。“耐州m缸f。--ab。809．010011．012013．014015016017．018019．020．021．022．023024．0时问Time(rain)图1-6花蓟马雄虫和西花蓟马雄虫释放挥发物总离子流色谱图Figl-6ThetotalionchromatogramofthevolatilescollectedfromadultmalesofFrankliniellaintonsa0OandadultmalesofFrankliniellaoccidentalis405060708090100110120130质核比m应1605075100125150175200225质核比m／z图1．7花蓟马雄虫释放化合物a和化合物b的质谱图Figl-7Massspectraoft_hemajorcomponentsoftheheadspacevolatilesofmalesofFrankliniellaintonsa：componentaandcomponentb=；枷¨卸¨∽o目＆∞2-ol§u口避毯善椎幕靼饼m秽一8uepunq∞口。一毯*m诬 研究内容第一章花蓟马雄虫聚集信息素的提取分离3讨论昆虫在寻找配偶的过程中通常会由一种性别的成虫释放出性信息素以引诱异性前来完成交配。研究发现，多种蓟马的雄性成虫其腹部具有分泌功能的腺体(Moundeta1．，1980)，该结构的存在说明雄性蓟马有可能释放聚集信息素(Bode，1978；SudoandTsulsumi，2002)。比如褐翅蓟马Thripsfuscipennis(Haliday)、大蓟马zmajor(Uzel)(Ⅺrk，1985)、西花蓟马(TerryandGardner，1990；MattesonandTerry，1992；TerryandDyreson，1996)、番茄蓟马Fschultzei(Milneeta1．，2002)雄虫在花上都有聚集行为。已有研究发现，将番茄蓟马的雄性成虫放到灰色粘虫板上能够显著增加对雌性成虫的诱捕量(Milneetal．，2002)；西花蓟马雄性成虫释放的气味对于其雄性个体和雌性个体均具有明显的吸引作用(DeKogelandvanDeventer，2003；KirkandHamilton，2004)。西花蓟马雄虫产生的性信息素不仅有引诱异性以完成交配的功能，也有聚集两性成虫的功效。因此，西花蓟马雄虫产生的性信息素也称为聚集信息素(Hamiltoneta1．，2005)。在花蓟马成虫对其自身作气味源的行为选择试验中，未交配花蓟马雌虫与花蓟马雌虫被花蓟马雄虫气味源所吸引，但不被花蓟马雌虫气味源所吸引，这说明花蓟马的聚集信息素是由雄虫产生。花蓟马雌虫及雄虫对花蓟马雄虫气味源有极显著的选择性，说明花蓟马雄虫产生的聚集信息素有聚集两性的作用。在自然界中有很多的花蓟马雄虫，而花蓟马雌虫在变成成虫后的几个小时内就可进行交配(TerryandSchneidet，1993)，因此，混合年龄的花蓟马雌虫可能是己经交配过的。由此推测花蓟马雌虫对雄虫气味源的反应并不是未交配雌虫所特有的。关于蓟马聚集信息素的研究，DeKogel和vanDeventer(2003)研究发现西花蓟马雄虫气味源对西花蓟马雌虫有吸引作用，但是对西花蓟马雄虫无吸引作用；鼬rk和Hamilton(2004)研究发现西花蓟马雄虫对西花蓟马雌虫和雄虫都有吸引作用；DeKogel和vailDeventer(2003)研究发现随着气味源中西花蓟马雄虫数量的增加，可以增加对西花蓟马雌虫的吸引。我们推测，产生不同实验结果的原因有两个方面，一是在本研究及瞄rk和Hamilton(2004)的研究中，花蓟马雄虫和西花蓟马雄虫气味源用冷光源进行光照刺激，引起蓟马的徘徊和打斗行为，蓟马的这种行为是聚集信息素产生的条件(TerryandGardner，1990；TerryandDyreson，1996)；二是实验所用的雄虫数量的不同，蓟马雄虫数量较少时，产生的聚集信息素浓度较低，不易被蓟马成虫发现，而雄虫数量多时，释放的聚集信息素总浓度较高，易于被别的蓟马发现，这个推论还有待进一步证明。本研究利用SPME方法提取花蓟马雄虫释放的挥发物发现2个主要的峰，这两个 台湾花蓟马和棕榈蓟马雄虫聚集信息素的提取分离鉴定峰在花蓟马雌虫的挥发物中是没有的。花蓟马雄虫腹部的腺体很有可能是聚集信息素的释放源，但是这个说法并未证实。Ⅺrk等(2004)对西花蓟马雄虫进行聚集信息素的提取，在西花蓟马雄虫释放的挥发物中提取到2种组分分别是(R)一lavandulylacetate及neryl(∞一2一methylbutanoate，但是在浸泡雄虫身体的溶液中并未发现这2种组分，由此推测这2种挥发物是雄虫特有的，而且是不储存在体内的。本研究利用正己烷对花蓟马雄虫进行浸泡，通过GC．MS分析也并未发现这两种组分。在其它昆虫的雄虫中也发现具有分泌功能的腺体。在灰色蜚蠊的雄虫中，12种雄虫所特有的组分从腹腺中被分离出来，而且其中3种是信息素的活性成分(Sreng，1984；Sreng，1990；Sirugueeta1．，1992)。这些化合物在雄虫远距离和近距离吸引雌虫的过程中起着重要的作用(Moore，1997)。因此花蓟马雄虫释放的聚集信息素在花蓟马的一些行为中也起着重要的作用。通过比较花蓟马雄虫和西花蓟马雄虫释放挥发物的时间，发现花蓟马雄虫释放2种化合物的时间与西花蓟马雄虫释放2种聚集信息素组分时间完全相同，因此推测花蓟马雄虫与西花蓟马雄虫释放的聚集信息素主要成分可能是一致的，当然这需要进一步试验验证。28 研究内容第一章花蓟马雄虫聚集信息素的提取分离∽图1-1蓟马的饲养Figl-1thripsrearing图1-2嗅觉测定试验装置Figl-2Y-Tubeofactometer29两一￡沁{图隆兰型酬删㈣ 台湾花蓟马和棕榈蓟马雄虫聚集信息素的提取分离鉴定图1．3花蓟马雄虫挥发物提取装置Fig．1-3CollentionofthevolatileofadultmaleofFrankliniellaintonsaan图1-4气．质联用仪Figl--4Gaschromatography-massspectrometry～{．一 研究内容第二章花蓟马雄虫聚集信息素的分离鉴定第二章花蓟马雄虫聚集信息素的分离和鉴定摘要：本研究用固相微萃取方法提取花蓟马雄虫释放的挥发物，并利用含有BGB一176SE和CP．chirasil—DexCB2种不同手性柱的气一质联用仪对挥发物进行分离鉴定。结果表明花蓟马雄虫挥发物中含有2种主要的化合物，分别为职)一lavandulylacetate和neryl(研．2一methylbutanoate，其与巳报道的西花蓟马雄虫释放的聚集信息素成分相同。但定量分析表明，僻)一lavandulylacetate和neryl(．S)．2．methylbutanoate在花蓟马和西花蓟马雄虫中释放的比例不同，行为学试验进一步证明，2种组分比例的不同在花蓟马和西花蓟马种闻识别过程中发挥重要作用。本研究推测花蓟马属的昆虫释放的聚集信息素组分可能是相同的。关键词：花蓟马：聚集信息素：嗅觉测定仪：僻)．1avandulylacetate：neryl(回一2-methylbutanoateISoLATIoNANDIDENTIFICATIoNoFTHEAGGREGATIONRELEASEDBYMALEADUIJSOFFrankliniellaintonsa(Thysanoptera：Thripidae)Abstract：HeadspacevolatilesreleasedfromadultmalesofEintonsawerecollectedusingsolid—phasemicroextraction(SPME)，andidentifiedbydifferentchiralchromatographyfBGB一176SEandCP—chirasil—DexCB)．GC—MSanalysisshowedthattwomajorcomponentsinhead-spacevolatilesproducedbyF|intonsa：(R)-lavandulylacetateandneryl(固一2一methylbutanoate，whicharethesamecompoundsthatarereportedinvolatilesofFrankliniellaoccidentalismales．However，quantificationalanalysisshowedthattheratioof暇)一lavandulylacetateandneryl(回一2一methylbutanoatedifferedbetweenEintonsaandF．occidentalis．BehavioralexperimentsfurthershowedthatthedifferenceinratioofthetwocomponentsplaysanimportantroleininterspeciesidentificationbetweenEintonsaandFoccidentalis．Ourresultssuggestthatdifferentspeciesofthripsfromthesamegenusmaysharethesameaggregationpheromones．Keywords：Frankliniellaintonsa；aggregationpheromone；olfactometer；俾)一lavandulyl3 台湾花蓟马和棕榈蓟马雄虫聚集信息素的提取分离鉴定acetate；neryl(∞一2一methylbutanoate1材料与方法1．1供试蓟马花蓟马：2010年采自杭州；西花蓟马：2007年采自北京，按照Mollema等(1993)的菜豆荚法进行群体饲养，两种蓟马分别以四季豆PhaseolusvulgarisL．饲养于人工气候箱内，建立试验种群。试验用虫为羽化后2—5d的成虫。饲养条件：温度264-1℃、相对湿度75士5％、光照周期L：D--14h：10h1．2花蓟马雄虫聚集信息素的提取利用高纯二氧化碳气体将花蓟马种群瞬间麻醉，然后用软毛笔轻轻将雄性成虫挑出，约30—40头，将其转移至1．5mL玻璃瓶中，在距离玻璃瓶2cm的地方用冷光源(大约10000lx)进行光照刺激，引起花蓟马的徘徊和打斗行为。然后利用SPME(1001am，PolydimethylsiloxaneCoating)方法，提取雄虫释放的挥发性物质5h(温度274-1℃、相对湿度60％)(飚rkandHamilton，2004)。SPME使用前在200℃下活化1h。每组处理重复5次。1．3花蓟马雄虫聚集信息素的分离和鉴定英国基尔大学(KeeleUniversity)Hamilton等(2005)已经鉴定出西花蓟马雄虫聚集信息素挥发物的2种组分分别为(月)．1avandulylacetate和neryl(∞一2一methylbutanoate，本研究所需标准品(R)一Iavandulylacetate(50ng／p-L)和neryl($-2-methylbutanoate(100ng／gL)均从英国基尔大学获得。据Hamilton等(2005)研究发现，Beta．Dex325手性色谱柱能够有效拆分lavandulylacetate外消旋体，CP．chirasil．DexCE手性色谱柱能够有效拆分neryl2-methylbutanoate外消旋体。本研究采用与上述2种手性色谱柱固定相相同的2种手性色谱柱BGB一176SE(30m×0．25minx0．251．tm)及CP—chirasil．DexCB(25mx0．25minx0．25pm)进行花蓟马雄虫释放聚集信息素成分鉴定。实验条件：温度27+1℃、相对湿度60％。本实验采用手性色谱柱BGB．176SE进行花蓟马雄虫释放聚集信息素及僻)一lavandulylacetate标准品的鉴定；采用手性色谱柱CP．chirasil—DexCB进行花蓟马雄虫释放挥发性化合物及neryl(研一2．methylbutanoate标准品的鉴定。本试验采用的手性柱可以有效拆分消旋物，如果花蓟马雄虫释放的挥发性物质中32 研究内容第二章花蓟马雄虫聚集信息素的分离鉴定某种组分与标准品的混合物的峰完全重合，就可以确定这种组分是同标准品手住相同的同一物质。将1pL50ng／IrtL的僻)一lavandulylacetate溶液或1pL100ng／pL的neryl(两．2．methylbutanoate溶液滴至1．5mL玻璃瓶中，瓶中放一小团脱脂棉。利用SPME吸附俾)．1avandulylacetate溶液或neryl(固一2．methylbutanoate溶液挥发物lh，然后用GC．MS对其进行分离鉴定。利用SPME吸收花蓟马雄虫挥发物(方法同1．2)3h，用GC—MS对其组分进行分离鉴定。首先用SPME吸附花蓟马雄虫挥发物2h，然后利用吸附有花蓟马雄虫挥发物的SPME吸附1“L50ng／pL(尺)一lavandulylacetate溶液或1gL100ng／gL的neryl(两．2．methylbutanoate溶液1h，用GC—MS对其组分进行分离鉴定。1．4花蓟马及西花蓟马雄虫聚集信息素释放量的比较将l“L50ng／gL的(JR)一lavandulylacetate溶液和1pLl00ng／pL的neryl(∞一2．methylbutanoate溶液分别注射到GC．MS中，测定其峰面积。取30-40头花蓟马雄虫或西花蓟马雄虫将其转移(方法同第一章1．2．2)至1．5mL玻璃瓶中，在距离玻璃瓶2cm的地方用冷光源(大约10000lx)进行光照刺激，利用SPME方法提取花蓟马雄虫或西花蓟马雄虫释放的挥发性物质5h(温度274-1℃、相对湿度60％)，每组处理重复5次。据纯品峰面积对花蓟马、西花蓟马雄虫释放的聚集信息素进行定量，从而获得花蓟马、西花蓟马雄虫每头每小时释放的聚集信息素的量。1．5花蓟马成虫和西花蓟马成虫对不同气味源的行为选择试验依Koschier等(2000)方法设计并略加改进，Y-型嗅觉仪由玻璃制成，适应臂长和测试臂长均为60mm，内径均为5mm，两个测试臂之间的夹角为90'C。此装置以气泵为动力，空气流经活性炭、分子筛过滤后形成两个分支，每个分支流经一个空气流量计、50mL的圆底烧瓶，与Y形管的测试臂相连，各部件之间用teflon管相连。利用高纯二氧化碳气体将花蓟马种群或西花蓟马种群瞬间麻醉，然后用软毛笔轻轻将花蓟马雄虫和西花蓟马雄性成虫挑出，分别取50～60头转移至50mL圆底烧瓶中，瓶中放一湿润的滤纸片，作为聚集信息素气味源。用冷光源对2个味源瓶同时进行光照刺激(10000lx)。取20头花蓟马雌虫或雄虫，分别进行嗅觉仪试验，测试不同气味源对花蓟马雌虫或雄虫的吸引作用。取20头西花蓟马雌虫或雄虫，进行同样试验。每组处理重复3次，记录反应虫数。实验条件：温度274-1℃、相对湿度60％。 台湾花蓟马和棕榈蓟马雄虫聚集信息素的提取分离鉴定1．6仪器工作条件仪器：岛津气谱一质谱联用仪(SHIMADZUGCMS—QP2010plus)；气谱工作条件：手性色谱柱BGB一176SE(30rex0．25mmx0．25岬)和手性色谱柱CP．chirasil．DexCB(25mx0．25minx0．25gm)；不分流进样；程序升温：40。C，保持3min，以8。C／min升到2009C，保持5min。进样口温度200"C；载气He(>99．999％)。质谱工作条件：离子源：El；离子源温度：230。C；四级杆温度：150。C：电子能量：70eV；扫描质量范围35～320amu。1．7数据分析数据处理用SPSSl3．0软件进行，嗅觉仪测定试验的实验数据采用二项分布检验的方法进行检验分析。花蓟马聚集信息素的分析鉴定，通过NIST08谱图库及二种标准品质谱图进行成分的鉴定。花蓟马和西花蓟马雄虫释放量的比较采用独立样本t检验的方法进行的检验分析。2结果与分析2．1花蓟马雄虫释放挥发性化合物的结构鉴定利用手性柱BGB一176sE对僻)．1avandulylacetate标准品、花蓟马雄虫挥发物以及二者混合物进行定性分析(图2．1)。标样俾)．1avandulylacetate在手性柱中的出峰时间为16．31min(图2．1：A)；花蓟马雄虫释放挥发性组分a在手性柱中的出峰时间同样为16．31min(图2—1：B)；并且二者的混合物在手性柱中的出峰时间仍然一致(图2—1：C)，由此可以确定花蓟马雄虫释放挥发性组分a为(JR)．1avandulylacetate。利用手性柱CP—chirasil—DexCB对neryl(S)．2一methylbutanoate标准品、花蓟马雄虫挥发物以及二者混合物进行定性分析(图2．2)。标样(S)．2一methylbutanoate在手性柱中的出峰时间为20．25rain(图2．2：A)：花蓟马雄虫释放挥发性组分b在手性柱中的出峰时间同样为20．25rain(图2—2：B)；并且二者的混合物在手性柱中的出峰时间仍然一致(图2．2：C)，由此可以确定花蓟马雄虫挥发性组分b为(s1—2一methylbutanoate。 研究内容第二章花蓟马雄虫聚集信息素的分离鉴定10．07．55．O2．50．05．04．03．02．01．00．01．251．000_750．500．250．00(月)一lavandulylacetateA8．09．010．011．012．013．014．015．016．017．018．019．020．021．022．0lB{I一⋯．。．8．09．010．011．012．013．014．015．016．017．018．019．020．021．022．02C一●J8．09．010．011．012．013．014．015．016．017．O18．019．O20．021．022．0li寸]'s-lTime(min)图2．1俾)．1avandulylacetate标准品、花蓟马雄虫挥发物以及二者混合物的总离子流色谱图Fig．2-lThetotalionchromatogramofthestandardof伍)-lavandulylacetate，thevolatileofadultmaleofFrankliniella／ntonsaandthemixedblendofthemA：状)．1avandulylacetate总离子流色谱图；B：花蓟马雄虫挥发物总离子流色谱图；c：花蓟马雄虫聚集信息素挥发物和僻)．1avandulylacetate混合物总离子流色谱图A：Thetotalioncllrom=ogramofthestandardof职)-lavandulylacetate；B：ThetotalionchromatogramofthevolatileofadultmaleofFrankliniellaintonsa；C：Thetotalionchromatogramofthemixedblendofstandardof僻)．1avandulylacetateandthevolatileofadultmaleofFrankliniellainlonsa35^>ulv∞∞口0d∞2-g星u口翠通唇稚嚣辑 台湾花蓟马和棕榈蓟马雄虫聚集信息素的提取分离鉴定5．04．03．02．01．00．Onery(回-2-mehylbutanoateA8．09．010．O11．012．O13．014．015．016．017．O18．019．020．021．O22．0￡lB^8．O9．O10．O11．012．013．014．015．016．O17．018．019．020．021．022．0bC．．．1．。．．j．．．一j．．．．I．⋯8．O9．o10．O11．O12．013．O14．o15．o16．017．018．019．020．021．O22．O时间Time(min)图2-2neryl④．2一methylbutanoate标准品、花蓟马雄虫挥发物以及二者混合物总离子流色谱图Fig．2-2Thetotalioncllromatogramofthestandardofncryl(33·2一methylbutanoate，thevolatileofadultmaleofFrankliniellaintonsaandthemixedblendofthemA：neryl(固．2一methylbutanoate总离子流色谱图；B：花蓟马雄虫挥发物总离子流色谱图；C：花蓟马雄虫聚集信息素挥发物和neryl(固一2-methylbutanoate混合物总离子流色谱图A：Thetotalionchromatogramofthestandardofneryl(回一2-methylbutanoate；B：ThetotalionchromatogramofthevolatileofadultmaleofFrankliniellaintonsaan；C：Thetotalionchromatogramofthemixedblendofstandardofneryl∞-2-methylbutanoateandthevolatileofadultmaleofFrankliniellaintonsa505050O50502D752DmL曩Zn1O0O1^>唇vQ∞IIo厶∞2bl口迦越辱稚嚣辖 研究内容第二章花蓟马雄虫聚集信息素的分离鉴定2．2花蓟马及西花蓟马雄虫聚集信息素释放量的比较由图2．3可以看出2种化合物在花蓟马雄虫和西花蓟马雄虫中的比例是不同的。经定量分析发现花蓟马雄虫和西花蓟马雄虫每头每小时释放的(R)一lavandulylacetate的量有显著差异(P=0．001)，花蓟马的释放量显著高于西花蓟马；花蓟马雄虫和西花蓟马雄虫每头每小时释放的neryl(S)．2一methylbutanoate的量也有显著差异(P=0．0045)。花蓟马雄虫释放的聚集信息素中(R)．1avandulylacetate：neryl(S)．2．methylbutanoate为1：1．7，而西花蓟马雄虫释放的聚集信息素中(R)一lavandulylacetate：neryl(S)．2．methylbutanoate为1：12．9。花蓟马雄虫和西花蓟马雄虫中2种化合物的配比明显不同(表2．1)。表2-1花蓟马雄虫和西花蓟马雄虫聚集信息素组分和含量Table2．1QuantitativeanalysisofpheromonecomponentsreleasedfrommaleFrankliniellaintonsaandmaleFrankliniellaoccidentatis8．o9．o10．011．012．013．014．o15．o16．017．018．o19．o20．o21．022．023．024．0PqTime(rain)图2．3花蓟马雄虫和西花蓟马雄虫释放挥发物总离子流色谱图Fi92-3ThetotalionchromatogramofthevolatileofadultmaleofFrankliniellaintonsaandadultmaleofFran脚iniellaoccidentalis^>量v∞∞口金∞2k9u嚣。趔倒兽稚幕掣 台湾花蓟马和棕榈蓟马雄虫聚集信息素的提取分离鉴定2．3花蓟马成虫和西花蓟马成虫对不同气味源的行为选择试验花蓟马雌虫对花蓟马雄虫气味源的偏好性要显著高于西花蓟马气味源(P<0．001)，花蓟马雄虫与花蓟马雌虫选择类似，对花蓟马雄虫气味源有显著的选择性沪=o．002)。西花蓟马雌虫对西花蓟马雄虫气味源的偏好性显著高于花蓟马气味源(P<0．001)，同样西花蓟马雄虫对西花蓟马雄性气味源的选择率也显著高于花蓟马气味源(P<0．001)(表2．2)。表2．2花蓟马成虫和西花蓟马成虫对花蓟马雄虫和西花蓟马雄虫气味源的行为反应Table2-2BehaviouralresponsesofadultFrankliniellaintonsaandFrankliniellaocciden衄liswhenprovidingthechoicebetweenodorsemittedfromF．intonsamalesandodorsemittedfromFoccidentalismales．4对于花蓟马以花蓟马雄虫作为处理(treatment)，以西花蓟马雄虫作为对照(contr01)；对于西花蓟马以西花蓟马雄虫作为处理(treatment)，花蓟马雄虫作为对照(contr01)。‘ForEintonsa，themaleFintonsaistreatmentsideandthemadefoccidentalisiscontrolside；ForFoccidentalis．themaleFoccidentalisistreatmentrsideandthemaleFintonsaiscontrolside3讨论Hamilton等(2005)在西花蓟马雄性个体中成功分离并鉴定出两种聚集信息素组分，分别为@)一lavandulylacetate和neryl(回一2一methylbutanoate，并确定neryl(S)一2一methylbutanoate为有效活性物质。本研究通过2种不同的手性柱对花蓟马雄虫释放的挥发物进行鉴定，结果发现花蓟马雄虫释放的2种聚集信息素分别为僻)一lavandulylacetate和neryl(固一2一methylbutanoate，其与西花蓟马雄虫释放的2种聚 研究内容第二章花蓟马雄虫聚集信息素的分离鉴定集信息素组分是相同的。本研究将花蓟马雄虫与西花蓟马雄虫释放的2种聚集信息素进行定量分析，结果发现(R)一lavandulylacetate和neryl(∞．2．methylbutanoate在花蓟马和西花蓟马雄虫中释放的比例显著不同。在进一步的行为学试验中，我们发现花蓟马雄虫气味源对花蓟马雌雄虫具有极显著的引诱效果，但对西花蓟马雌雄虫没有吸引作用；西花蓟马雄虫气味源对西花蓟马雌雄虫具有极显著的引诱效果，但对花蓟马雌雄虫没有吸引作用。在种类繁多的昆虫世界中，存在生殖隔离机制，它是由生态行为、形态或生理上的原因引起的，其中包括昆虫的性信息素，性信息素释放时间、化学成分和成分配比的不同，造成了昆虫的生殖隔离(石奇光和赵祖培，1986；TabataandIshikawa，2005；Laurentetal．，2007)。性信息素组分的差异是推进物种特异化过程的重要因素(LinnetaI．，2007)。Monti等(1995)对Spodoteralatifascia(Walker)以及Sdescoinsi(Lalannecassousilvain)2个近缘种群进行比较研究，发现它们雌蛾的性信息素组分是相同的，但各个种群的最佳诱芯配比不同。而性信息素活性物质比例的不同，能够引起不同的行为反应。例如，梨小食心虫Grapholitamolesta能够辨别不同比例的性信息素组分(日．8一dodecenylacetate和㈤．8．dodecenylacetate，从而产生不同的行为反应(LinnandRoelofs，19831。本研究发现花蓟马与西花蓟马雄虫释放的2种聚集信息素组分相同，而定量分析表明花蓟马和西花蓟马雄虫释放的(R)．1avandulylacetate和neryl(∞．2．methylbutanoate2种组分的比例分别为1：1．7和1：12．9，聚集信息素组分比例的不同引起了不同的行为反应，使花蓟马雄虫气味源只对花蓟马雌雄虫有吸引作用，西花颤马雄虫气味源只对西花蓟马雌雄虫有吸引作用，聚集信息素比例的不同可能是导致花蓟马和西花蓟马生殖隔离的原因之一。昆虫同种种群之间的地理隔离有可能弓l起种群信息素的变异。Hansson等(1990)对欧洲保加利亚和西亚亚美尼亚的小地老虎Agrotissegetum种群雌蛾的性信息素组分进行研究，结果表明3种主要性信息素组分z5—10：Ac、Z7—12：Ac和Z9—14：Ac的比例分别是1：42：57和1：52：47，其配比并不相同。Huang(1998)对日本不同区域抽样调查亚洲玉米螟Ostrinia(urnacalis性信息素的地理变异发现，南部种群与北部种群有相同的性信息素成分，但是2种成分的比例不同。本文测定西花蓟马雄虫释放的聚集信息素2种组分的比例为1：12．9，而Hamilton和Ⅺrk(2005)测定的英国的西花蓟马2种聚集信息素组分的比例范围为l：0．8～1：5之间，地理隔离可能是造成这种差异的原因之一。本研究表明，花蓟马雄虫可释放2种聚集信息素组分(尺)一lavandulylacetate和neryl(西一2一methylbutanoate，其与己报道的西花蓟马雄虫释放的聚集信息素组分相同。由于花蓟马和西花蓟马同属花蓟马属，由此推断花蓟马属蓟马所释放的聚集信息素组分可 台湾花蓟马和棕榈蓟马雄虫聚集信息素的提取分离鉴定能是相同的，当然这尚待进一步的深入研究来证明。Hamilton等(2005)研究发现，单一的俾)．1avandulylacetate纯品对西花蓟马成虫无吸引作用，单一的neryl(∞一2一methylbutanoate纯品对西花蓟马成虫有吸引作用。当限1一lavandulylacetate和neryl㈣。2一methylbutanoate2种组分以1：1混合，也能够增加对西花蓟马成虫的诱捕量。根据本文定量的结果，花蓟马中僻)一lavandulylacetate和neryl㈣．2．methylbutanoate2种组分的最佳配比为l：1．7，此推论有待进一步验证。 研究内容第三章棕榈蓟马雄虫聚集信息素的提取分离摘三章棕榈蓟马雄虫聚集信息素组分的提取和分离棕榈蓟马是农林植物的重要害虫之一，可造成严重的经济损失。因此明确棕榈蓟马雄虫释放的聚集信息素对于棕榈蓟马种群生物防治具有重要意义。在棕榈蓟马对其自身的行为试验中，棕榈蓟马雌虫被雄虫气味源所吸引，而雌虫气味源对其无吸；作用，这说明棕榈蓟马的聚集信息素是由雄虫释放的。通过固相微萃取方法提取棕榈蓟马雄虫释放的挥发物，并利用气质联用仪对其组分进行鉴定。结果表明棕榈蓟马雄虫释放的挥发物中含有2种主要组分，这两种组分在雌虫中是没有的。将其与花蓟马雄虫的聚集信息素组分进行对比发现为不同化合物。而在浸泡棕榈蓟马雄虫的溶剂中也未发现这2种组分，由此推测这2种组分并不储存在体内，而是在特定条件下合成并释放的。关键词：棕榈蓟马；聚集信息素：花蓟马：行为试验EVIDENCEFORAMALE．PRODUCEDAGGREGATIONPHEROMONEINThripspalmiAbstract：Thripspalmiispolyphagousinsectandcausesinflicteconomiclossesonvegetable，fruitandornamentalcrops．IdentificationofaggregationpheromoneofZpalmimaleswillplayakeyroleinbiocontrolofthem．InthelaboratorywetestedthebehavioralresponsesofadultZpalmitodifferentodorsources．TheresultsindicatedthatfemalesofZpalmiwereattractedtotheodorsofadultmalesofEintonsa，butnottotheodorofadultfemalesofZpalmi．Theresultsshowedthatmaleswereproducingaggregationpheromoneinthisspecies．HeadspacevolatilesreleasedfromadultmalesofEintonsawerecollectedusingsolid—phasemicroextraction(SPME)，andidentifiedbychromatography．Itshowedthattwomajorcomponentsinhead—spacevolatilesproducedbyZpalmi，whicharenotinthefemaleodor．Thecompoundswerenotpresentinhexaneextractsofmales．Theseindicatethatthecompoundsareproducedondemandandnotstored．Keywords：Thripspalmi；aggregationpheromone；Frankliniellaintonsa；behavioralresponse第冕 台湾花蓟马和棕榈蓟马雄虫聚集信息素的提取分离鉴定1材料与方法1．1棕榈蓟马的饲养棕榈蓟马：2011年采自杭州，按照Mollema等(1993)的菜豆荚法进行群体饲养，以四季豆PhaseolusvuIgarisL．饲养于人工气候箱内，建立试验种群。试验用虫为羽化后2—5d的成虫。未交配棕榈蓟马的饲养：将群体饲养的蓟马中生长N--龄的蓟马若虫转移到1．5mleppendorftube中，管中放一滤纸条，以甘蓝叶片(约0．5Gm2)为饲料进行饲养，每48h更换一次叶片，直至若虫羽化为成虫。饲养条件：温度27M℃、相对湿度75士5％、光照周期L：D=16h：8h。1．2棕桐蓟马成虫对其自身气味源的行为选择试验利用Y-型嗅觉仪测定蓟马成虫释放挥发性物质的生物活性。依Koschier等(2000)方法设计并略加改进，Y-型嗅觉仪由玻璃制成，适应臂长和测试臂长均为60mm，内径均为5mm，两个测试臂之间的夹角为90。C。此装置以气泵为动力，空气流经活性炭、分子筛过滤后形成两个分支，每个分支流经一个空气流量计、50mL的圆底烧瓶，与Y形管的测试臂相连，各部件之间用teflon管相连。在进在进行行为测试之前，利用高纯二氧化碳气体将棕榈蓟马种群瞬间麻醉，然后用软毛笔轻轻将雄虫或雌虫挑出，约50～60头，将其转移至50raL圆底烧瓶中，同时瓶中放一湿润的滤纸片，保持空气湿度，该烧瓶作为聚集信息素气味源。另一相同的圆底烧瓶，瓶中仅放一湿润的滤纸片，不放任何蓟马，作为对照空气源。两个圆底烧瓶的进气口和出气口塞上少量的棉花，防止棕榈蓟马成虫从瓶中跑出，用冷光源(10000Ix)对味源瓶进行光照，刺激其释放信息素(TerryandGardner，1990)。调节测试臂的流量为60mL／min，适应臂的流量为120mL／min。然后取单头棕榈蓟马雄虫，或雌虫，进行嗅觉仪试验，测试不同气味源对雌雄成虫的吸引作用。当测试蓟马爬过某测试管臂的20mm，并持续30s以上，记录其对该气味源做出选择；若蓟马进入Y-型管3min内没有做出选择，则记录为无反应。每次测定虫口数为20头，每组处理重复3次。每次试验后Y-型管和昧源瓶用95％酒精清洗，120℃烘干。实验条件：温度27±1℃、相对湿度60％。1．3棕榈蓟马成虫释放挥发物的提取和分离利用高纯二氧化碳气体将棕榈蓟马种群瞬间麻醉，然后用软毛笔轻轻将棕榈蓟马雄虫或雌虫挑出，约30-40头，将其转移至1．5mL玻璃瓶中，在距离玻璃瓶2cm的 研究内容第三章棕榈蓟马雄虫聚集信息素的提取分离地方用冷光源(大约10000lx)进行光照刺激，引起棕榈蓟马成虫的徘徊和打斗行为(TerryandGardner，1990)。然后利用固相微萃取(SPME)方法，提取棕榈蓟马成虫释放的挥发性物质5h(飚rkandHamilton，2004)。然后用气一质联用仪(GC-MS)对棕榈蓟马成虫释放挥发物进行分离。SPME柱(1001Xm，PolydimethylsiloxaneCoating)使用前在200℃下活化1h。每组处理重复5次。另外取40头棕榈蓟马雄虫，将其浸泡在正己烷溶液中，储存在一20℃冰箱中，直到进行分析。每组处理重复5次。实验条件：温度27±1℃、相对湿度60％。1．4棕榈蓟马雄虫聚集信息素组分的相对含量取30．40头棕榈蓟马雄虫将其转移至1．5mL玻璃瓶中，在距离玻璃瓶2cm的地方用冷光源(大约10000Ix)进行光照刺激。然后利用SPME方法吸附雄虫释放的挥发性物质5h(温度27±1℃、相对湿度60％)(ⅪrkandHamilton，2004)，然后用GC—MS对其进行分离鉴定。SPME使用前在200℃下活化1h。每组处理重复5次。根据GC．MS中NIST08谱图可获得棕榈蓟马雄虫释放挥发性物质的峰面积。峰面积相对含量=虫121数4h+1001。5仪器工作条件仪器：岛津气谱一质谱联用仪(SHIMADZUGCMS．QP2010plus)；气谱工作条件：色谱柱RXi⑩．5ms(30m×0．25mm×0．25pm)；不分流进样；程序升温：40。C，保持3min，以8℃／rain升到250"C，保持5min。进样口温度250℃；载气He(>99．999％)。质谱工作条件：离子源：EI；离子源温度：230℃；四级杆温度：150。C；电子能量：70eV，扫描质量范围35．320amu。1．6数据分析数据处理用SPSSl3．0软件进行，嗅觉仪测定试验的实验数据采用二项分布检验的方法进行检验分析。棕榈蓟马雄虫释放挥发物的分离鉴定，通过NIST08谱图库行成分的鉴定。2结果与分析2．1棕榈蓟马成虫对其自身气味源的行为选择试验43 台湾花蓟马和棕榈蓟马雄虫聚集信息素的提取分离鉴定雄虫气味源对未交配雌虫有显著的吸引作用，而雌虫气味源对未交配的雌虫没有吸引作用。雌成虫的选择结果与未交配雌虫的选择结果类似，被雄虫气味源显著吸引。雄性成虫被雄虫气味源显著吸引，其选择结果(68．0％)与雌成虫选择结果(67．1％)类似(图3．1)。口瞳_对照空气源雌虫气味源测试昆虫引诱率％40．364．867．168．0图3-1棕榈蓟马成虫对其雌雄虫释放气味源的行为反应Fig3-1BehavioralresponsesofadultThripspalmitotheodorsreleasedfromconspecificfemalesandmales．2．2棕榈蓟马成虫释放挥发物的提取和分离利用GC—MS对棕榈蓟马雄虫和雌虫释放的挥发物进行分离分析(图3．2)。结果发现，在棕榈蓟马雄虫释放挥发物的总离子流色谱图中出现了两个主峰，分别是13．3min的峰A及19．4min的峰B，而在棕榈蓟马雌虫释放的挥发物色谱图中未出现这两个主峰。其它在棕榈蓟马雄虫中出现却未在雌虫中出现的峰分别出现在8．0min、12．3min、12．7rain、15．6min、18．0min、18．8min。其中峰A和峰B在棕榈蓟马雄虫的浸泡溶剂中也未发现，由此推断这两种化合物并未储存在昆虫体内。2-3棕榈蓟马雄虫释放挥发物与花蓟马雄虫释放挥发物比较本文将棕榈蓟马雄虫释放的挥发物色谱图与花蓟马雄虫释放聚集信息素色谱图进行比较(图3—3)。结果发现，棕榈蓟马雄虫释放的两种化合物A和B与花蓟马释放的2聚集信息素组分a(R)．1avandulylacetate和组分bneryl(S)一2一methylbutanoate的出峰时间完全不同。本实验将提取的棕榈蓟马的化合物A及化合物B的质谱图与花蓟马释放的2聚集信息素组分化合物a和化合物b的质谱图进行比较发现，其质谱图存在一定的差异。由此可以确定，棕榈蓟马雄虫释放的聚集信息素组分与花蓟马及西花蓟马雄虫释放的聚集信息素主要组分是完全不同的。 研究内容第三章棕榈蓟马雄虫聚集信息素的提取分离“10，000，000)．1．010．011．o12．013．014．015．016．017．018．019．020．021．022．023．024．0时间TiT∞(mml图3．2棕榈蓟马雄雌成虫释放挥发物总离子流色谱图Fig3-2ThetotalionchromatogramofthevolatilescollectedfromadultmalesandadultfemalesofThripspalmi(xl0．000．0001莹10．011．012．013014．015．016．017．018．019．020．021．022．023．024．0时间Time(min)图3。3棕榈蓟马雄虫和花蓟马雄虫释放挥发物总离子流色谱图Fi93-3ThetotalionchromatogramofthevolatilescollectedfromadultmalesofthripspalmiandadultmalesofFrankliniellaintonsa450543210^>E『)∞*c&∞2墨繁凸犁毯誉黎蘑殍I^>Evu∞cod∞2k皇8笛。犁翅善稚嚣萼} 台湾花蓟马和棕榈蓟马雄虫聚集信息素的提取分离鉴定妒·5三5．0世敲：·s键O．o405060708090100110120130140150160170180190质核比m，z(xl，000．0001—7．5零百2昌55．0儡C旦恺*2．5m髓0．09g4158。II，。{ij1．Ii6，43，54，67，8，，932。722，23639⋯J川|I||川I_．II．50．075．0100．0125．0150．0175．0200．0225．0质核比m／z图3-4棕榈蓟马雄虫释放化合物A和化合物B的质谱图Fi93-4MassspectraofthemajorcomponentsoftheheadspacevolafilesofmalesofThripspalmi：componentAandcomponentB 研究内容第三章棕榈蓟马雄虫聚集信息素的提墩分离2．4栋榈蓟马雄虫聚集信息素组分的相对含量对棕榈蓟马雄虫释放的化合物A和化合物B进行相对含量的定量分析。棕榈蓟马雄虫释放的2种化合物相对含量比为1：5，由此推测其最佳化合物配比可能也是1：5。表3-1棕榈蓟马雄虫释放聚集信息素组分和相对含量Fi93-1QuantitativeanalysisofpheromonecomponentsreleasedfrommaleThripspalml3讨论昆虫的聚集信息素是指由雌虫或雄虫产生，并能一起雌雄两性昆虫聚集行为反应的化学物质。Mound等(1980)研究发现多种蓟马的雄虫其腹部具有分泌功能的腺体，而这些腺体的存在就说明蓟马能够释放聚集信息素。2004年William等发现西花蓟马雄虫能够释放聚集信息素，并于2005年将西花蓟马雄虫释放的2种聚集信息素组分(R)．1avandulylacetate和neryl(S)一2一methylbutanoate进行分离鉴定并合成，现己开发出相应的生防产品(KirkandHamilton，2004；Hamiltonetal．，2005)。2011年张蓬军等对花蓟马雄虫释放的聚集信息素组分进行分离鉴定，确定花蓟马同西花蓟马一样可以释放聚集信息素(R)一lavandulylacetate和neryl(S)．2．methylbutanoate，只是2种组分在两种蓟马中的配比不同(Zhanget．a1．，2011)。行为学试验结果表明棕榈蓟马未交配雌虫被棕榈蓟马雄虫气味源所吸引，棕榈蓟马雌虫气味源对其没有吸引作用。棕榈蓟马雌虫与未交配棕榈蓟马雌虫选择类似，对棕榈蓟马雄虫气味源有极显著的选择性。deKogel和VanDeventer于2003年研究发现西花蓟马雌虫能够被西花蓟马雄虫气味源所吸引；2004年鼬rk和Hamilton的研究发现西花蓟马雄虫释放的气味源对其未交配和交配西花蓟马雌虫均具有吸引作用；2011年Zhang等发现相似研究结果，花蓟马雄虫也能够吸引交配和未交配的花蓟马雌虫。Terry等研究发现在自然界中存在很多西花蓟马雄虫，西花蓟马在羽化为成虫的几个小时内即可交配。本研究中的棕榈蓟马雌虫很可能也是交配过的。由此推测棕榈蓟马47 台湾花蓟马和棕榈蓟马雄虫聚集信息素的提取分离鉴定的聚集信息素是由雄虫释放的，而雌虫被雄虫气味源所吸引并不是未交配雌虫的特性，这个结论还需进一步证明。棕榈蓟马雄虫对棕榈蓟马雄虫气味源的偏好性显著高于对照空气源。Milne等研究发现将番茄蓟马Eschultzei的雄性成虫放到灰色粘虫板上能够显著增加对雌性成虫的诱捕量，但不能增加对雄虫的诱捕量(Milneetal．，2002)；DeKogel等(2003)研究发现西花蓟马雄虫对西花蓟马雄虫无吸引作用。而Kirk(2004)等研究发现西花蓟马雄虫气味源对雄虫有吸引作用；Zhang(2011)等研究发现花蓟马雄虫能够被花蓟马雄虫气味源所吸引。Terry研究发现蓟马的巡逻和打斗行为是聚集信息素产生的条件(TerryandGardner，1990；TerryandDyreson，】996)。在本研究中用冷光源刺激棕榈蓟马雄虫，引起棕榈蓟马的巡逻和打斗行为，使之产生聚集信息素。飚rk和Zhang等的研究中雄虫气味源同样用冷光源进行刺激。而在Milne和DeKogel的研究中信息素渊并没有用任何的装置进行刺激，可能产生的并不是聚集信息素，而是性信息素，所以只对雌虫有吸引作用而对雄虫无吸引作用。另一方面在本实验中聚集信息素源所采用的活虫数量较多，在有限的空间中产生的聚集信息素总浓度相对较高，实验中易被蓟马成虫发现，此结论还需进一步证明。本研究通过SPME方法提取棕榈蓟马雄虫释放的挥发物，发现在13．3min和19．4rain出现两个高峰，而这两个峰在雌虫和雄虫浸泡的溶液中是没有的。通过对比棕榈蓟马雄虫和花蓟马雄虫释放挥发物的总离子流色谱图发现，其释放这2种化合物的时问与花蓟马完全不同。将这2个峰的质谱图与(R)一lavandulylacetate和neryl(S)．2．methylbutanoate2种纯品的质谱图进行对比也发现其完全不同。由此可以确定棕榈蓟马雄虫与花蓟马雄虫释放的聚集信息素组分是完全不同的。而在浸泡的成虫溶液中未发现这2个峰说明这两种化合物可能并未储存在棕榈蓟马体内，而是合成后直接释放。而在一些蝽象和蟑螂中，其雄虫的腹腺是能够分泌并储存信息素的(SchuhandSlater，1995；Sreng，1984)。本研究根据谱库中提示购买了与目标化合物相似度较高的lavandulol和nerylacetate两种化合物纯品。将两种纯品注射到GC—MS中分析发现，其总离子流色谱图与棕榈蓟马雄虫挥发物总离子流色谱图出峰时间完全不同，因此棕榈蓟马释放的两种化合物并不是所购买的化合物纯品。本研究将棕榈蓟马雄虫释放的2种化合物进行相对定量发现，化合物A与化合物B的相对含量比为1：5。由此推测棕榈蓟马雄虫释放聚集信息素的最佳配比为1：5，是否是这样，有待进一步验证。 研究内容第四章全文总结与展望第四章全文总结与展望1全文总结1．1花蓟马雄虫聚集信息素的提取分离鉴定本研究表明，花蓟马雄虫可释放2种聚集信息素组分(尺)．1avandulylacetate和neryl(∞．2．methylbutanoate，其与己报道的西花蓟马雄虫释放的聚集信息素组分相同。但定量分析表明，似)一lavandulylacetate和neryl(回一2．methylbutanoate在花蓟马和西花蓟马雄虫中释放的比例不同。在花蓟马成虫和西花蓟马成虫对不同气味源的行为学试验中，花蓟马雌雄成虫对花蓟马雄虫气味源的偏好性要显著高于西花蓟马气味源；西花蓟马雌雄成虫对西花蓟马雄虫气味源的偏好性显著高于花蓟马气味源。这表明2种组分比例的不同在花蓟马和西花蓟马种间识别过程中发挥重要作用。由于花蓟马和西花蓟马同属花蓟马属，由此推断花蓟马属蓟马所释放的聚集信息素组分可能是相同的，当然这尚待进一步的深入研究来证明。1．2棕榈蓟马雄虫聚集信息素的提取分离在行为学试验中，棕榈蓟马雄虫气味源对其雌雄成虫均具有吸引作用，而雌虫气味源对棕榈蓟马雌虫无吸引作用，这说明棕榈蓟马的聚集信息素是由雄虫释放的，并对两性都具有吸引作用。利用GC—MS对提取的棕榈蓟马顶部挥发物进行分析，结果发现雄虫释放的挥发物中含有2种主要组分，这两种组分在雌虫中是没有的。将棕榈蓟马雄虫释放的挥发物与花蓟马雄虫释放的聚集信息素进行比较，其组分同花蓟马的组分明显不同，由此推测蓟马属蓟马同花蓟马属蓟马所释放的聚集信息素组分可能是不同的，此结论需要进一步的研究证明。2主要创新点蓟马是危害我国农作物的主要害虫之一，明确几种主要蓟马的聚集信息素组分，不仅可以提高蓟马的生物防治效率，而且可以减少化学农药带来的环境污染，实现绿色农业。目前，关于台湾花蓟马、棕榈蓟马释放的聚集信息素的研究在国内外仍是空白，而本研究有望填补这一空白。而本研究确定花蓟马雄虫释放的聚集信息素为(只)一lavandulylacetate和neryl($一2一methylbutanoate，对花蓟马的生物防治具有重要的意义，也为以后的大田试验提供理论依据。本研究确定了棕榈蓟马雄虫可释放聚集信息素，并确定2种组分的出峰时间、质谱图以及相对含量，为以后棕榈蓟马雄虫聚集信息素的研究提供依据。 台湾花蓟马和棕榈蓟马雄虫聚集信息素的提取分离鉴定3研究展望花蓟马聚集信息素田间诱捕效果评价。根据实验室内嗅觉仪试验结果，对聚集信息素的有效成分，设置不同浓度梯度，进行田间花蓟马的诱捕试验，评价其诱捕效果，包括最佳诱捕浓度及有效诱捕时间等。棕榈蓟马雄虫释放聚集信息素组分的鉴定以及生物活性测定。利用傅里叶变换离子回旋共振质谱仪、核磁共振仪等对主要组分进行定性分析。对确定的聚集信息素组分进行购买或者人工化学合成。然后将聚集信息素组分设置成不同的浓度梯度，进行田间生物测定试验。 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致谢本论文是在导师吕要斌博士的悉心指导下完成的。从论文的选题、实验设计以及论文的写作，每一步都无不凝聚着导师的大量心血和关怀。在科研过程中，吕老师多次帮我分析实验问题，精心点拨，热情鼓舞，使得实验任务能够顺比完成。吕老师渊博的知识，敏捷的思维，宽广的胸襟，正直的品格，严谨的科研精神将会使我受益终身，是我一生学习的典范。我相信这段求学经历无论是对我未来的工作还是生活都将产生深远的影响。值此毕业之际，向我的导师吕要斌博士致以深厚的谢意!本论文是在浙江省农科院植物保护与微生物研究所农业经济作物虫害实验室完成的。特别感谢试验过程中张蓬军老师给予的悉心指导和帮助，张老师严谨求实的工作作风和宽厚豁达的风格让我敬佩。感谢贝亚维、黄芳、郦卫弟、章金明和张治军老师对我学业上的关心和帮助；感谢孙善强师傅在实验室管理方面提供的帮助。感谢朝气蓬勃、团结友爱的同学们的支持和给我带来的快乐时光，谢谢你们：乔飞师兄、张辉师兄、朱秀娟师姐、张吴、刘敏、李晓星、朱义勇、张玉秀师妹、宋亮师弟。特别感谢好友李慧给予我的支持和理解。光阴荏苒，近三年的科研生活即将结束，实验室浓厚的学术氛围和彼此间融洽的气氛深深的感染了我，和大家共同学习生活的经历也必将化作我生命中一道美好的回忆。值此毕业之际，向实验室全体成员表示深深的感谢，原我们的友谊相伴永久。在漫长的求学期间，家人一直是我坚强的后盾，是我前进的动力，感谢你们长久以来给我的理解支持和无私奉献。祝晓云2012年5月