甲型肝炎病毒衣壳蛋白转基因柑桔食用疫苗的初步研究

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1、西南师范大学生命科学学院硕士学位论文甲型肝炎病毒衣壳蛋白转基因柑桔食用疫苗的初步研究姓名：胡蓉申请学位级别：硕士专业：动物学指导教师：魏泓20040501理学硕士论文甲型肝炎病毒衣壳蛋白转基因柑桔食用疫苗的初步研究甲型肝炎病毒衣壳蛋白转基因柑桔食用疫苗的初步研究学科专业动物学研究方向分子遗传导师魏泓作者胡蓉2001352中文摘要甲型肝炎是由一种经由肠道传染的病毒即甲型肝炎病毒HepatitisAvirusHAV感染肝脏细胞而引起的急性传染病是严重威胁人类健康的世界性传染病转基因植物食用疫苗具有接种简便成本低廉的优点是目前正在进行的一项新的探索本研究选用柑桔作为表达甲

2、肝病毒衣壳蛋白的生物反应器将果实作为可以直接口服的疫苗旨在探索一种甲肝疫苗新途径HAV基因组编码的衣壳蛋白决定病毒的抗原性免疫原性和对敏感细胞的吸附性是探索研究基因工程疫苗的焦点为实现HAV衣壳蛋白基因HAV-CP这个重要功能基因的表达调控选用含有花椰菜花叶病毒启动子CaMV35S启动子的植物表达载体pBI121作为基本框架将HAV-CP基因插入质粒T-DNA左右边界区间内构建pBI121-HAV-CP植物表达载体经限制性内切酶分析和PCR鉴定后利用冻融法将重组质粒pBI121-HAV-CP导入根癌农杆菌LBA4404中以锦橙Citrus.SinensisOsbec

3、k上胚轴为转化受体材料农杆菌浸染10分钟共培养2天头孢霉素脱菌培养后选用50mg/LKm进行筛选培养120株外植体中筛选出13株拟转化芽微嫁接于砧木经PCR检测有5株已导入外源目的基因本研究建立了完整的转基因柑桔甲肝疫苗遗传转化技术路线获得了导入HAV-CP基因的柑桔植株为深入研究转基因柑桔甲肝疫苗的有效性安全性提供了基础材料并在技术和方法上进行了理论探讨关键词甲型肝炎病毒衣壳蛋白基因柑桔载体构建遗传转化食用疫苗1理学硕士论文甲型肝炎病毒衣壳蛋白转基因柑桔食用疫苗的初步研究PrimaryStudyofEdibleVaccineofTransgenicCitruswi

4、thHepatitisACapsidProteinGeneMajor:ZoologySpeciality:MoleculargeneticsSupervisor:Prof.WEIHONGAuthor:HURONGABSTRACTHepatitisAiscausedbyhepatitisAvirus(HAV).Ediblevaccinehasbeenasubjectofresearchformanyyearsbecauseoftheeconomicimportanceoftheapplicationandthepotentialforfuture.TheHAVcaps

5、idiscomposedofstructuralproteins:VP1,VP2,VP3,and,possibly,VP4.Multipleantigenpeptides(MAP)havebeendemostratedtobeefficientimmunologicalreagentsfortheamplificationintheanalysisandinductionofimmuneresponsestoavarietyofinfectiousagents.WeconstructedtheplantexpressionvectorwiththeHAVcapsid

6、proteingeneandusedCitrusasahostforstabletransformation.Theplantexpressionvector,pBI121-HAV-CPcontainedthegeneencodinghepatitisAcapsidproteinlocatedbetweentheleftandrightTibordersequences,underthecontrolofCaMV35Spromoter.ThevectorwasidentifiedviaPCRanddouble-digestionreactionandwasintro

7、ducedintoAgrobacteriumtumerifacienceLBA4404.ThetransgenicCitrusplantswereproducedbyAgrobacterium-mediatedtransformationofepicotylsegments.ThepresenceandintegrationofthetransgenehadbeenverifiedbyPCRanalysis.Therewerefivetransformantsintegratedwiththetargetgene.Weviewourexperimentasafi