微管蛋白抑制剂sud包合物脂质体的制备及其初步药效学和药动学研究

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1、河北医科大学博士学位论文微管蛋白抑制剂SUD包合物脂质体的制备及其初步药效学和药动学研究姓名：潘振华申请学位级别：博士专业：药理学指导教师：张永健201204中文摘要微管蛋白抑制剂SUD包合物脂质体的制备及其初步药效学和药动学研究摘要目的：环糊精和脂质体(1iposomes)作为药物的载体，可有效地提高药物的生物利用度和治疗指数。脂质体是一种具有类生物膜结构的双分子层微囊，是一种定向药物载体，属于靶向给药体系(targetingdrugdeliverysystem)的一种新型给药系统。其进入体内后主要被网状内皮系统吞噬而激活机体的自身免疫功能，

2、并且通过改变被包封药物的体内分布，使药物主要在肝、脾、肺等组织器官中蓄积，并能优先聚集于肿瘤、炎症、感染等部位，从而提高药物治疗指数，减少治疗剂量并降低药物的毒性；但脂质体在包埋药物尤其是疏水性药物时往往受到药脂比等因素的限制，并且某些疏水性药物可能会干扰脂质双层的结构，影响脂质体的稳定性，使其在贮存过程发生药物泄漏。脂质体包封疏水性药物存在的这些问题在一定程度上限制了它的应用。环糊精(cyclodextrins，CVD)的特殊结构使其可与和疏水性药物形成包合物，增加难溶性药物的溶解度，提高其生物利用度。近年来的研究发现，利用环糊精与脂质体各自

3、具备的优点，制备环糊精包合物脂质体，可以提高脂质体的稳定性，减少药物泄漏，提高载药量，改变药物的体内行为，同时使其具有缓释性和靶向性。本实验以全合成的新型小分子化合物N-[4．(4，6二甲基．2．嘧啶氧基)．3．甲基苯基]-N’-[2．(二甲氨基)]苯甲酰脲(SUD)为疏水性药物模型，研究材料组成、制备工艺对包合物一脂质体包封率的影响，考察其理化性质、体外释药情况、大鼠体内药物动力学行为及小鼠的体内分布，为这一新型给药系统的应用提供实验基础。并采用药理学试验方法进一步探讨其脂质体给药系统对人肺腺癌A549细胞体外增殖的影响，为其作为抗肿瘤药物应

4、用于I隘床提供实验依据。方法：以羟丙基．p．环糊精(hydroxypropyl．p．cyclodextrin，liP．D．CD)为包合材料，分别用饱和水溶液法和研磨法制备了SUD．HP．p．CD包合物，通过对包合率及产率的评价，最后采用饱和水溶液法制备，通过四因素三水平正交实验设计对制备工艺进行优化，对包合率测定结果进行极差分中文摘要析，最后确定SUD．HP．p．CD包合物的最佳处方工艺，并采用差示扫描量热法(differentialscanningcalorimetry,DSC)和X射线粉末衍射(X-raydiffraction，XRD)法对

5、所得到的包合物进行鉴定。在文献和预实验的基础上初步确定SUD．HP．D．CD包合物脂质体的制备方法和处方，通过单因素考察初步确定脂质体制备的影响因素，并研究不同包封率测定方法对包封率测定结果的影响；采用薄膜分散法、注入法、逆向蒸发法、复乳法四种方法制备脂质体，利用葡聚糖凝胶柱对脂质体与未包封游离药物进行分离。测定包封率，最终确定薄膜分散法为SUD．HP．p．CD包合物脂质体的制备方法。以包封率为考察指标，通过单因素考察优化脂质体的制备工艺，并考察磷脂浓度、磷脂与胆固醇质量比、水化液类型、药物与磷脂质量比等因素对脂质体的影响。在此基础上，采用四因

6、素三水平正交试验对各因素的水平进行筛选，对包封率测定结果进行极差分析，最后确定SUD．HP．D．CD包合物脂质体的最佳处方。考察按照优化处方制备的SUD．HP．p．CD包合物脂质体的形态外观，粒径分布及黏度等指标，考察其理化稳定性。分别绘制SUD．HP．D．CD包合物脂质体和SUD-HP．p．CD包合物的体外释药曲线并比较其体外释药过程，分别用零级、一级、Higuchi及Weibull动力学方程进行拟合，并考察相关系数。以高效液相法测定大鼠血浆及小鼠组织中SUD．HP．p．CD包合物脂质体浓度。液相条件：色谱柱：DiamonsilrMODSC1

7、8(钻石)250x4．6mm，51xrn；以甲醇：水(80：20)v／v为流动相；检测波长为232nm；柱温：30℃；流速：lmL·rain"1；进样量为20止。对结果进行处理，计算大鼠体内各种药动学参数，考察SUD．HP．p．CD包合物脂质体在小鼠体内分布，并进行靶向性评价。常规培养人肺腺癌A549细胞，采用MTT法测定SUD-HP．p．CD包合物脂质体对A549细胞增殖的抑制作用。流式细胞仪测定细胞周期分布。Westernblot法测定细胞增殖核抗原(PCNA)及细胞周期蛋白(eyclinD1)蛋白表达。初步探讨SLID．HP．p．CD包合

8、物脂质体对人肺腺癌A549细胞体外增殖的影响。结果：采用饱和水溶液法制备SUD-HP．13．CD包合物包合率较高，最佳制备工艺为SUD与HP．13．C